生物化学Word
河北科技大学生工学院
第三章蛋白质291页
第一节氨基酸----蛋白质的构件分子
第二节蛋白质概述
第三节蛋白质的共价结构
第四节蛋白质的三维结构
第五节蛋白质结构与功能的关系
第六节蛋白质的性质和分离、纯化
1
河北科技大学生工学院第六节蛋白质的性质和分离、纯化
一、蛋白质的性质
二、蛋白质相对分子质量的测定
三、蛋白质的分离纯化
四、蛋白质的含量测定与纯度鉴定
2
河北科技大学生工学院一、蛋白质的性质
3
河北科技大学生工学院(一)酸碱性质1.两性电解质:2.蛋白质的等电点
3.蛋白质等离子点:?在没有其他盐类干扰的条件下,蛋白质解离的质子等于结合的质子时的pH,就是等离子点。
4
河北科技大学生工学院(二)蛋白质的胶体性质1.蛋白质溶液是胶体溶液2.维持蛋白质的胶体系统稳定的因素①动力学上是稳定的.
②某一pH下质点带有同种电荷,互相排斥。③质点能与溶剂(水)形成水化层。
5
(三)蛋白质的沉淀
1.可逆沉淀与不可逆沉淀2 ?可逆沉淀(非变性沉淀):–在温和的沉淀条件下,蛋白质的结构和性质都没有发生变化,在适当的条件下可重新溶解形成溶液。?不可逆沉淀(变性沉淀):沉淀蛋白质的方法
?等电点沉淀(可逆,不变性)?重金属盐沉淀法(变性)?盐析法(可逆,不变性)?生物碱和酸沉淀法(变性)?有机溶剂沉淀法(可逆或不可逆)?加热变性沉淀法(变性)
(四)蛋白质的变性与复性
1.蛋白质变性作用:天然蛋白质受到外界各种理化因素的影响后,使其维系空间结构的次级键受到破坏,引起天然构象改变,从而使其理化性质和生物活性改变或丧失,这种作用称为蛋白质的变性作用。
蛋白质变性的本质:蛋白质分子中次级键被破坏,引起天然构象松散。不涉用共价键的断裂
河北科技大学生工学院
2.导致蛋白质变性的因素
?物理因素:
有高温、高压、超声波、剧烈振荡、X射线和紫外线等;?化学因素:强酸强碱、尿素、去污剂、胍、重金属盐(Hg2+、Ag+)等。
十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate SDS)8
河北科技大学生工学院3.变性蛋白质的特点
①生物活性丧失:
②某些物理化学性质改变:
4.蛋白质的复性
?当变性因素除去后,变性蛋白质又可重新回复到天然构象,这一现象称为蛋白质的复性。
9
(五)蛋白质的颜色反应
河北科技大学生工学院
1.双缩脲反应?双缩脲与碱性硫酸铜作用,生成粉红色的复合物。?含有两个或两个以上肽键的化合物,能发生同样的反应(红色、蓝紫色)。紫?受蛋白质特异性影响小。?此反应可用于定性鉴定,也可在含量540nm比色,定量测定蛋白
11
河北科技大学生工学院2.米伦氏反应?酪氨酸的显色反应(酚羟基反应)?米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物?蛋白溶液中,加入米伦试剂,产生白色沉淀,加热后变成红色
12
河北科技大学生工学院3.坂口反应
?精氨酸的反应(胍基的反应)?精氨酸与α-萘酚在碱性次氯酸钠(或次溴酸钠)溶液中发生反应,产生红色产物?鉴定蛋白质中是否含有精氨酸?定量测定精氨酸
13
河北科技大学生工学院4.乙醛酸反应
?在蛋白质溶液中加入HCOCOOH,将浓硫酸沿管壁缓慢加入,不使相混,在液面交界处,即有紫色环形成。
?色氨酸的反应(吲哚环的反应)?鉴定蛋白质中是否含有色氨酸
14
河北科技大学生工学院5.福林试剂反应(酚试剂反应)Tyr、Trp的反应
福林试剂:磷钼酸-磷钨酸
Lowry法测定蛋白浓度
在碱性条件下,蛋白质与硫酸铜发生反应
蛋白质-铜络合物,将福林试剂还原,产生磷钼蓝和磷钨蓝混合物
500nm比色,灵敏度比双缩脲反应提高100倍
15
河北科技大学生工学院6.黄蛋白反应?浓硝酸与酪氨酸、色氨酸等苯环氨基酸的反应?生成黄色化合物
16
7.茚三酮反应河北科技大学生工学院17
河北科技大学生工学院8.考马斯亮蓝G-250??本身为红色,与蛋白质反应呈蓝色用于蛋白浓度的测定,灵敏度高?Bradford法
18
河北科技大学生工学院(六)蛋白质的紫外吸收?大多数蛋白质在280nm 附近显示强的吸收。?利用紫外吸收法测定蛋白质浓度。
19
河北科技大学生工学院20
河北科技大学生工学院二、蛋白质相对分子质量的测定21
河北科技大学生工学院1.根据化学组成测定最低相对分子质量例1:肌红蛋白和血红蛋白含铁量均为0.335%,计
算二者的最低相对分子质量。
最低分子量=铁的原子量铁的百分含量100
55.8/0.335 X 100% = 16 700
例2:牛血清白蛋白含色氨酸0.58%,最低分子量为?
22
河北科技大学生工学院2.沉降分析法(超速离心法)
1.沉降速度法
?沉降系数:溶质颗粒在单位离心场中的沉降速度,用S表示(110-13秒)。相对分子质量越大,S值越大。?根据Svedberg方程计算蛋白质分子的相对分子质量
2.沉降平衡法
?不需要扩散系数,且离心速度较低?要达到平衡常常需要几天时间。
23
3.凝胶过滤法测定相对分子质量(分子筛层析)?
?凝胶过滤的介质:多孔网状凝胶珠。一定型号的凝胶网孔大小一定,只允许相应大小的分子进入凝胶颗粒内部,大分子则被排阻在外。
?经常使用的凝胶:
?交联葡聚糖
?聚丙烯酰胺和琼脂糖
河北科技大学生工学院25
河北科技大学生工学院三、蛋白质的分离纯化(一)分离原理与程序(二)蛋白质的分离纯化方法
26
河北科技大学生工学院(一)分离原理与程序原理:利用欲分离蛋白质的溶解度、分子大小、电荷、对配体分子的特殊的亲和力、吸附性质,从混杂蛋白质中分离出一个特殊蛋白质。
27
河北科技大学生工学院(二)蛋白质的分离纯化方法28
河北科技大学生工学院
1.根据分子大小不同的纯化方法
①透析和超过滤29
河北科技大学生工学院
②密度梯度(区带)离心?每种蛋白质颗粒沉降到与自身密
度相等的介质密
度梯度时,即停
止不前,在离心
管中被分离成各自独立的区带。
30
河北科技大学生工学院③凝胶过滤(分子排阻、凝胶过滤层析、凝胶渗透层析)
31
河北科技大学生工学院2.利用溶解度差别的纯化方法
①等电点沉淀
②蛋白质的盐析
盐析:当浓度较高时,中性盐降低蛋白质的溶解度,使蛋白质发生沉淀。③有机溶剂分级分离法
32
河北科技大学生工学院3.根据电荷不同的纯化方法
?在外电场的作用下,带电颗粒将向着与其电性相反的电极移动,这种现象称为电泳。
?33
河北科技大学生工学院
①醋酸纤维素薄膜电泳?醋酸纤维素薄膜具有匀一的结构,渗透性强,对分子移动无阻力
34
河北科技大学生工学院35
河北科技大学生工学院②聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE
)?支持物:多孔的聚丙烯酰胺凝胶。凝胶的孔隙大小用丙烯酰胺的浓度和交联剂加以控制。
36
河北科技大学生工学院③等电聚焦电泳(简称IEF)原理:在具有pH梯度的介质中进行,在外加电场作用下各种蛋白将移向并聚焦(停留)在等于其等电点的pH梯度处,并形成一个很窄的区带。
通电37
河北科技大学生工学院38
④离子交换层析
?基本原理:
?支持介质:纤维素离子交换剂、交联葡聚糖离子交换剂。
?阴离子交换层析:用于带负电荷蛋白质的分离。
DEAE-纤维素或DEAE-葡聚糖(Sephadex)?阳离子交换层析:。。。。。。。
CM-纤维素或CM-葡聚糖
?蛋白质对离子交换剂的结合力取决于:
?彼此间相反电荷基团的静电吸引?与溶液的pH有关
4.利用对配体的特异生物学亲和力的纯化方法?
?亲和层析原理:
待纯化的蛋白特异配体多糖载体
加样
吸附结合在柱上
不被吸附洗涤除去
洗脱
河北科技大学生工学院5 根据蛋白质的吸附特性分离??吸附层析利用待纯化的分子和杂质分子与吸附剂之间吸附能力的不同达到分离目的
?常见吸附剂:活性碳硅胶氧化铝
41
河北科技大学生工学院四、蛋白质的含量测定与纯度鉴定(一)蛋白质的含量测定
①凯氏定氮法②双缩脲法
③Folin-酚试剂法
④紫外吸收法
⑤考马斯亮蓝法等。
(二)蛋白质的纯度鉴定
?电泳等。
42
河北科技大学生工学院
第一节氨基酸(amino acid)123页43
河北科技大学生工学院第二节蛋白质概述
44
河北科技大学生工学院第三节蛋白质的共价结构
45
河北科技大学生工学院
第四节蛋白质的三维结构(构象)一、研究蛋白质构象的方法二、稳定蛋白质三维结构的作用力
三、蛋白质天然折叠结构决定因素四、蛋白质的三维结构
本节小结
46
河北科技大学生工学院
第五节蛋白质结构与相关功能
一、氧结合蛋白
二、免疫球蛋白(抗体)三、肌球蛋白与肌动蛋白
47
河北科技大学生工学院
第六节蛋白质的性质和分离、纯化一、蛋白质的性质
二、蛋白质相对分子质量的测定三、蛋白质的分离纯化四、蛋白质的含量测定与纯度鉴定
48
河北科技大学生工学院
作业
①蛋白质的等电点?
②维持蛋白质胶体溶液的稳定因素?
③使蛋白质沉淀的方法有哪些?其中哪些方法可获得不变性的沉淀蛋白质?
④蛋白质变性与复性?常用变性剂?变性蛋白有何特点?
⑤凝胶过滤法(分子筛层析)和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白相对分子质量的原理?
⑥蛋白质的盐溶和盐析?原理?
⑦蛋白质常用的分离方法?电泳法和离子交换层析法分离蛋白的原理?
49
下载文档
热门试卷
- 2016年四川省内江市中考化学试卷
- 广西钦州市高新区2017届高三11月月考政治试卷
- 浙江省湖州市2016-2017学年高一上学期期中考试政治试卷
- 浙江省湖州市2016-2017学年高二上学期期中考试政治试卷
- 辽宁省铁岭市协作体2017届高三上学期第三次联考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2016-2017学年高二11月月考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2017届高三11月月考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2016-2017学年高一11月月考政治试卷
- 广西钦州市高新区2016-2017学年高二11月月考政治试卷
- 广西钦州市高新区2016-2017学年高一11月月考政治试卷
- 山东省滨州市三校2017届第一学期阶段测试初三英语试题
- 四川省成都七中2017届高三一诊模拟考试文科综合试卷
- 2017届普通高等学校招生全国统一考试模拟试题(附答案)
- 重庆市永川中学高2017级上期12月月考语文试题
- 江西宜春三中2017届高三第一学期第二次月考文科综合试题
- 内蒙古赤峰二中2017届高三上学期第三次月考英语试题
- 2017年六年级(上)数学期末考试卷
- 2017人教版小学英语三年级上期末笔试题
- 江苏省常州西藏民族中学2016-2017学年九年级思想品德第一学期第二次阶段测试试卷
- 重庆市九龙坡区七校2016-2017学年上期八年级素质测查(二)语文学科试题卷
- 江苏省无锡市钱桥中学2016年12月八年级语文阶段性测试卷
- 江苏省无锡市钱桥中学2016-2017学年七年级英语12月阶段检测试卷
- 山东省邹城市第八中学2016-2017学年八年级12月物理第4章试题(无答案)
- 【人教版】河北省2015-2016学年度九年级上期末语文试题卷(附答案)
- 四川省简阳市阳安中学2016年12月高二月考英语试卷
- 四川省成都龙泉中学高三上学期2016年12月月考试题文科综合能力测试
- 安徽省滁州中学2016—2017学年度第一学期12月月考高三英语试卷
- 山东省武城县第二中学2016.12高一年级上学期第二次月考历史试题(必修一第四、五单元)
- 福建省四地六校联考2016-2017学年上学期第三次月考高三化学试卷
- 甘肃省武威第二十三中学2016—2017学年度八年级第一学期12月月考生物试卷
网友关注
- 地理是一种修养
- 中学班主任津贴及奖励制度
- 第三届横影学院羽毛球比赛秩序册1
- 股票教学
- 已审稿 学生版 第一讲 运动图象
- 菜博士与某小区阳台菜园合作方案
- 因为f
- 易驾考科目二通过单边桥考试技巧
- 新考生须知改
- 必考内容
- 乒乓球暴冲训练(一)
- 教学设计
- 农村初中英语教学中如何提高学生的听力水平
- 城镇小学学生请销假制度
- 交通设计考试题
- 7广泛开展小课题研究 提高教师科研能力
- 陕西实验中学班主任培训制度
- 国学六法2015最新参考答案
- 陈庄镇中心小学家庭实验室计划实施意见
- 试题1
- 染料事业部消防理论知识竞赛考试题及答案
- 2015年4月月考针对题
- 惜福镇-科目三考试项目顺序及操作细节(捷达)(双号车)
- 161每日一讲周三自由日记
- 科目二(五项必考)攻略
- 教学反思
- 驾校策划
- 全国中小学教师教育技术水平考试
- 易驾考学车软件知识分享 如何避免黑驾校
- 我在一棵石榴里看见我的祖国 少年中国说 七班朗诵比赛策划案
网友关注视频
- 冀教版小学数学二年级下册第二单元《有余数除法的简单应用》
- 沪教版八年级下册数学练习册21.3(3)分式方程P17
- 外研版英语三起5年级下册(14版)Module3 Unit1
- 北师大版数学四年级下册3.4包装
- 冀教版英语五年级下册第二课课程解读
- 二年级下册数学第二课
- 【部编】人教版语文七年级下册《泊秦淮》优质课教学视频+PPT课件+教案,辽宁省
- 外研版八年级英语下学期 Module3
- 冀教版英语三年级下册第二课
- 人教版二年级下册数学
- 冀教版小学数学二年级下册第二单元《有余数除法的整理与复习》
- 青岛版教材五年级下册第四单元(走进军营——方向与位置)用数对确定位置(一等奖)
- 沪教版八年级下册数学练习册21.4(1)无理方程P18
- 沪教版牛津小学英语(深圳用) 四年级下册 Unit 2
- 3.2 数学二年级下册第二单元 表内除法(一)整理和复习 李菲菲
- 二次函数求实际问题中的最值_第一课时(特等奖)(冀教版九年级下册)_T144339
- 【部编】人教版语文七年级下册《泊秦淮》优质课教学视频+PPT课件+教案,湖北省
- 沪教版牛津小学英语(深圳用) 五年级下册 Unit 10
- 【部编】人教版语文七年级下册《泊秦淮》优质课教学视频+PPT课件+教案,广东省
- 外研版英语三起6年级下册(14版)Module3 Unit1
- 19 爱护鸟类_第一课时(二等奖)(桂美版二年级下册)_T502436
- 冀教版小学数学二年级下册第二周第2课时《我们的测量》宝丰街小学庞志荣
- 冀教版英语四年级下册第二课
- 冀教版小学英语五年级下册lesson2教学视频(2)
- 冀教版小学英语四年级下册Lesson2授课视频
- 冀教版小学数学二年级下册第二周第2课时《我们的测量》宝丰街小学庞志荣.mp4
- 沪教版八年级下册数学练习册21.3(2)分式方程P15
- 沪教版八年级下册数学练习册一次函数复习题B组(P11)
- 【部编】人教版语文七年级下册《老山界》优质课教学视频+PPT课件+教案,安徽省
- 沪教版牛津小学英语(深圳用) 五年级下册 Unit 12
精品推荐
- 2016-2017学年高一语文人教版必修一+模块学业水平检测试题(含答案)
- 广西钦州市高新区2017届高三11月月考政治试卷
- 浙江省湖州市2016-2017学年高一上学期期中考试政治试卷
- 浙江省湖州市2016-2017学年高二上学期期中考试政治试卷
- 辽宁省铁岭市协作体2017届高三上学期第三次联考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2016-2017学年高二11月月考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2017届高三11月月考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2016-2017学年高一11月月考政治试卷
- 广西钦州市高新区2016-2017学年高二11月月考政治试卷
- 广西钦州市高新区2016-2017学年高一11月月考政治试卷
分类导航
- 互联网
- 电脑基础知识
- 计算机软件及应用
- 计算机硬件及网络
- 计算机应用/办公自动化
- .NET
- 数据结构与算法
- Java
- SEO
- C/C++资料
- linux/Unix相关
- 手机开发
- UML理论/建模
- 并行计算/云计算
- 嵌入式开发
- windows相关
- 软件工程
- 管理信息系统
- 开发文档
- 图形图像
- 网络与通信
- 网络信息安全
- 电子支付
- Labview
- matlab
- 网络资源
- Python
- Delphi/Perl
- 评测
- Flash/Flex
- CSS/Script
- 计算机原理
- PHP资料
- 数据挖掘与模式识别
- Web服务
- 数据库
- Visual Basic
- 电子商务
- 服务器
- 搜索引擎优化
- 存储
- 架构
- 行业软件
- 人工智能
- 计算机辅助设计
- 多媒体
- 软件测试
- 计算机硬件与维护
- 网站策划/UE
- 网页设计/UI
- 网吧管理