技能大赛
选手编号：______工位号： 标本号： 比赛日期：2015年 月 日 午 时 分
……………………………密……封……线……内……不……要……答……题…………………………………
第二届全国卫生职业院校检验技能竞赛
革兰染色法（传统法）竞赛试卷
竞赛时间： 15分钟
一、说明
1．本题满分100分，完成时间15分钟。 2．要求独立完成，不得相互询问或讨论。
3．考核成绩为操作过程评分、操作结果评分和考核时间评分之和。 4．全部操作过程时间和操作后处理时间计入时间限额。 二、实验原理
G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色。
G- 菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄或稀释石碳酸复红复染后呈红色。 三、实验器材
载玻片、特种铅笔、接种环、酒精灯、打火机、生理盐水、吸水纸、冲洗瓶、钟表、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯、染色盘、染色架、消毒液等。(学生准备黑体字部分的器材) 四、实验试剂
革兰染液（杭州天和微生物试剂有限公司）：结晶紫染液、碘液、脱色液（95%乙醇）、复染液。(学生准备黑体字部分的器材) 五、实验标本 平皿细菌培养物 六、操作步骤
1.涂片 用灭菌接种环挑取菌落与载玻片上预先滴加的生理盐水涂布成2
1cm或蚕豆大小的半透明菌膜。
2.干燥 涂片制成后，在空气中使其迅速干燥，以免细菌皱缩变形（若需加快干燥速度，将涂布面朝上，置于火焰上方慢慢烘干，切勿紧贴火焰）。
3.固定 玻片干燥后火焰加热法固定，即中速通过火焰3次进行固定，以玻片反面接触手背皮肤，热而不烫为宜。
4.初染 加结晶紫染液染1min，细流水冲洗，并倒去玻片上积水。 5.媒染 加碘液染1min，细流水冲洗。
6.脱色 加脱色液，不时摇动10~30s，至无紫色逸出为止，细流水冲洗。 7.复染 加复染液，染1min，细流水冲洗。
8.镜检 待已染色的细菌标本自然干燥或用吸水纸吸干后，再用显微镜进行观察。
选手编号：_____工位号： 标本号： 比赛日期：2015年 月 日 午 时 分
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七、染色结果
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八、报告
（如：找到革兰阳性球（杆）菌或找到革兰阴性球（杆）菌）
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选手编号：_____工位号： 标本号： 比赛日期：2015年 月 日 午 时 分
…………………………密……封……线……内……不……要……答……题……………………………………
第二届全国卫生职业院校检验技能竞赛
革兰染色（传统法）评分表
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现场裁判签名： 结果评分裁判签名：
复核裁判签名： 现场裁判长签名：
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