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鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株GX899株的致病性

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鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株GX899株的致病性

第18卷第2期年月病毒学报

Vol.18

JuneNo.22002

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株G/X899株的致病性

崔治中1,孙淑红1,单忠芳1,蒋玉雯2,金文杰3

(1.山东农业大学

动物科技学院预防兽医系,泰安271018;南宁3143218;2.广西自治区兽医研究所,

扬州225009)3.扬州大学动物医学系,

超强毒株GX8/系1999年从广西一自然发病鸡群采集到。用原始病鸡法摘要:鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)99,氏囊悬液连续3次人工感染SPF鸡后,再取其法氏囊制备悬液,分装,在-70C保存。以此悬液经卵黄囊接种10

日龄SPF鸡胚,测定鸡胚的半数致死量(ELD50)。随着鸡的日龄和接种剂量的不同,其致死率有很大差异。对28病毒接种量为200个ELD50时,感染后7日内死亡率最高可达73%!(;!30日龄SPF鸡,90.5%11/15和19/21)感染量为20个ELD50时,死亡率亦可达53%!92%(。以500个ELD50感染28!104日龄的SPF8/15和23/25)鸡,死亡率均在55.1%!甚至113!120日龄的SPF鸡,感染后仍有10%!15%致死率。但128日龄的67.2%;

但抗体全部转阳。人工接种发病死亡的鸡,其法氏囊的出血程度SPF鸡感染后既不引起死亡也不表现任何症状,

也随感染量和年龄而异。死亡的鸡100%(法氏囊严重出血;而40日龄鸡50日龄鸡接种2000个ELD50后,12/12)

感染200个ELD50后,死亡鸡中仅17%(发生出血。在2、以2000个3/18)3、4周龄带有母源抗体的商品代蛋鸡,只引起10%(、(和35%(的死亡率。但在5周龄商品代蛋鸡,仅接触感染ELD50病毒接种后,2/20)35%7/20)7/20)的致死率可达61.3%(。另一批商品代蛋鸡,在4周龄和5周龄人工接种200个ELD50病毒后,死亡率分别98/160)是81.6%!(和93.9%!(。通过总共1200多羽鸡的试验表明,94.3%62/76!33/35)94%31/33!47/50)GX-8/表现为高死亡率(最高可达94%),易感年龄延长至4月龄,中枢性免疫器官法氏囊99株是一个超强毒IBDV毒株,出血严重和胸腺明显萎缩。

关键词:鸡传染性法氏囊病病毒;鸡胚半数致死量;致病性中图分类号:S852.659.4

文献标识码:A

文章编号:(1000-87212002)02-0162-05

自从20世纪60年代发现鸡传染性法氏囊病病

以来,它一毒(infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)直在世界各地广泛流行。除了最初发现和流行的后来欧洲国家又发现了致死率IBDV标准毒株外,

很高的IBDV的超强毒株。该毒株以1:/10(WV)法氏囊悬液0.1ml点眼人工感染5周龄商品代蛋用

[1]型鸡时,可引起50%!90%的死亡率。而在美国,却出现了只引起免疫抑制而不造成死亡的变异

[[2]3]株。我国自周蛟等在80年代初首先分离到

毒用病毒做定量测定,对每个分离株所用实验鸡的数量均不超过10只,从严格的科学依据角度考虑,这都有待于做更多的重复实验。为此,本研究在对从我国各地收集到的IBDV毒株的致病性做了初步

比较的基础上,从中选择致病性最强的来自广西的分别在不GX8/99株做研究。在病毒定量测定后,同年龄的SPF鸡和商品代蛋用型鸡,多次重复地比较研究了该毒株的致病性,以确定超强毒IBDV在我国的存在。

各地也先后分离到该病毒,但多数致死IBDV以来,

率都不高,甚至在人工感染时只表现发病而不发生

[4,5]死亡。然而,近十年来,我国一些地方也间或发[6,7]现有超强毒IBDV的流行。这些病毒均来自自然发病时死亡率可达30%!50%或60%!100%的

材料与方法

处理和抗原性鉴定法氏囊病料系1999年1病料的采集、

初由广西自治区兽医研究所从当地某自然发病鸡场采集的。将组织磨碎后,加入4倍量生理盐水制成悬浮液。为去除自然感染病料中可能存在的对乙醚敏感的带囊膜病毒,将法氏囊病料悬液与等量乙醚混合,充分振荡30m随后10000r/in,取上清液于-70C冰箱中保存备用。将上min离心20min,

述处理的原始病料的悬液滴鼻点眼接种7!8羽4周龄SPF鸡,在3!采集法氏囊混合,按4天后出现临床症状时扑杀,上述方法处理制成1:5悬液。将后一悬液再感染7!8羽4

鸡群。对分离病毒所做人工攻毒实验中,死亡率也达60%!70%。但是,在这些报道中,均没有对攻

收稿日期:2001-07-11;修回日期:2001-10-09

基金项目:国家自然科学基金重大项目("3989329)

作者简介:崔治中(1944-),男,江苏江阴市人,动物病毒学博士,教授。

2GX899163周龄SPF鸡,并以同样方法采集和处理法氏囊悬液。将这一悬液分装于若干菌种管中,保存于-70C中备用,以便在鸡胚上测定病毒滴度及做鸡的致病性试验。这一在SPF鸡经过连续3次人工感染后的法氏囊悬液中的IBDV,定名为

GX-8/99株。

将原始病料悬液在SPF鸡传代的同时,取部分原始法氏囊病料提取基因组DNA,分别用鸡传染性贫血病毒(CAV)全基因组DNA克隆、禽网状内皮增生病病毒(REV)全基因组cDNA克隆的重组质粒和!型马立克病病毒(MDV)特异性pp38基因片段克隆质粒作为探针,以斑点分

[]

子杂交来证明其中不含CAV、REV和MDV感染8。此外,在斑点ELISA或免疫转印反应中,该病毒与10种不同来源

[9]的抗IBDV单克隆抗体都能反应。

2病毒效价的测定将分装并保存于-70C的GX-8/99

数、法氏囊出血数,测定法氏囊/体重、胸腺/体重及脾脏/体重比。选取部分7日后存活鸡剖解,取其法氏囊、胸腺和脾脏称重。

SPF来源鸡是从严格的SPF鸡饲养环境下购回后8h内

感染病毒,然后在清洁环境下继续饲养。商品代蛋鸡在2"从部分鸡采集血清,送中3周龄感染前及感染后不同天数,

国农业大学实验动物中心用进口的商品ELISA试剂盒测定对IBDV抗体滴度。

1

GX8/99株IBDV对SPF鸡的致病性在多次人工感染试验中,随着感染量和日龄的

株病毒法氏囊悬液,以PBS做不同浓度稀释后,分别用每个稀释度接种4"每个鸡胚于卵黄囊接6个10日龄SPF鸡胚,

种0.1m去除接种后l。在接种后每24h观察鸡胚存活状态,24h内死亡的鸡胚。观察接种不同稀释度悬液鸡胚的死亡率(观察至接种后第9天),计算每0.1ml悬液中病毒的ELD50。本研究中所用GX8/99株IBDV感染鸡法氏囊样品中,病毒含量相当于每克含105ELD50。3

鸡只的人工感染试验

分别用不同日龄的SPF鸡(济南

或商品代蛋用鸡,经点眼滴鼻人工接种0.2mSPAFAS公司)l不同稀释度的GX8/观察7日内鸡死亡99株法氏囊悬液,

表1

Table1

Virusdose

(ELD/0.2ml)

200020020

(19/2190.5%)

(23/2592%)

28

不同,GX8/99株IBDV对SPF鸡的致死率有很大

的差异。一般认为,3"6周龄左右是对IBDV最易感的年龄段。在本研究中,对28"104日龄期间的16组鸡分别以20、200和2000个ELD50剂量感染后,1周内死亡率变化在20%"73%这一很大范围内,组间差异很大(表1、。不过,大多数试验组的2)死亡率在50%"有7组试验死亡率73%的范围内,在60%以上。显然,为了测定一个IBDV毒株的致病性,必须有一定数量的鸡并重复数次,以避免个体差异造成的偶然结果。

GX8/99株IBDV对SPF鸡的致死率

(Days)AgeofSPFchickenatinoculation3040!(21/2972.4%)17/27(63%)((11/1573%)18/2962%)(8/1553%)

MortalityofSPFchickenscausedbyIBDVGX8/99strain

50

(12/2744.4%)(9/2733.3%)

ELD50pergramofbursalsamplescollectedfromoriginalGX8/99-infectedSPFchickenswasdetermined,andindividualsindifferentSPFchicken

(w/,iththebursalsuspensionsof1:10,1:100,and1:1000v)0.1mlintoeyesand0.1mlintonosesrespec-groupsofdifferentageswereinoculatedwtively.

!Dead/totalchickens,7daysafterinoculation.

表2GX8/99株IBDV对不同日龄SPF鸡的致病性MortalityofSPFchickensof

differentagescausedbyIBDVGX8/99strain

Table2

2

感染鸡法氏囊出血程度及其与发病年龄的关系

接种IBDVGX8/可在一部99法氏囊悬液后,

分发病死亡鸡法氏囊中诱发严重出血,有的从浆膜面即可呈紫葡萄状。但法氏囊出血的严重程度似乎与接种病毒剂量和发病年龄都有关系。以2000个在7天内有12羽ELD50接种27羽50日龄鸡,

(死亡,死亡鸡的法氏囊全部严重出血。而44.4%)

以200个ELD50接种的29羽40日龄鸡,死亡18只(,但只有3只(死亡鸡有法氏囊出血(表62%)17%)

。而以2000个ELD50接种40日龄鸡或200个3)

死亡鸡的法氏囊出血率居ELD50接种50日龄鸡时,

Ageofchickens

()285466104113120128

(TotalMortality

(55.1%205)

(54.5%200)67.2%(50)60%(30)10%(20)15%(20)

0(20)

Eachchickenwasinoculatedwith500ELD50/0.2mlofGX8/99by

nosedroppingandobservedfor7days.eye/

16418中。显然,在相对较大年龄接种大剂量病毒时,死亡鸡的法氏囊出血率最高,最严重。

表3

接毒量及年龄对GX8/99株IBDV

诱发法氏囊出血的影响

以约含2000个ELD50量的GX8/99株法氏囊悬液,分别接种同一批来源的、有一定母源抗体水平的商品代蛋用型2、其死亡率分别为3、4周龄雏鸡,(、和35%(,但在5周10%2/10)35%(7/20)7/20)

龄时由接触感染的致死率却高达61.3%(98/160)(表4)。不论死亡鸡还是感染后存活鸡,其胸腺/体重比和法氏囊/体重比,均较没有接种的对照鸡显著降低,尤以法氏囊/体重比为甚,仅为正常的30%!而脾脏/体重比略有增加。在另一批商品代蛋50%,

用型雏鸡的实验中,对4和5周龄雏鸡接种2000个ELD50量的GX8/在7天内99株法氏囊悬液后,的死亡率分别为94.3%(33/和93.9%(31/35)33)(表5)。在这二次独立的实验中,虽同是4周龄鸡,可是致死率却相差很大。

Table3InfluenceofvirusdosesandchickenagesonhemorrhageintheBursasofchickensinoculated

withIBDVGX8/99strain

Virusdose(ELD50/0.2ml)

2000200

(Days)ageofchickenschallenged

4050!(12/12100%)8/21(38%)(3/1817%)

(4/944.4%)

ChickenswereasdescribedinTable1.!:Chickenswithhemor-rhageinbursa/totaldeadchickens.

3

GX8/99株IBDV对商品代蛋鸡的致病性

表4

Table4

ageofchickens

(Weeks)

22345234

Virusdose

(ELD50)200020020002000Contacts

(GX8/99株IBDV对商品代蛋用型鸡的致病性实验1)

Mortalityofcommercialegg-typechickenscausedbyIBDVGX8/99strain(1)

Chickenschallened

Total20202020160666

Diedwithin6daysKilledafterday6

(210%)18

(210%)(35%)7(735%)(9861.3%)Normalcontrolbirds

4.6 1.56.2 1.95.9 0.8

3.4 1.15.0 0.25.9 0.8

1.6 0.71.7 0.51.4 0.4

1813710

Thymus4.4 2.34.1 1.62.0 1.73.4 0.82.2 0.81.9 1.03.3 1.2

bodweiht>1000Oran/

Bursa3.0 0.62.6 1.22.0 0.12.1 0.73.3 1.12.0 0.73.5 1.31.2 0.21.5 0.3

Spleen1.4 0.22.2 0.51.9 02.6 0.61.7 0.72.3 0.62.5 0.82.0 0.52.9 0.9

(1.TheserumaverageELISatitertoIBDVwas135 99n=7,23-354)beforethechallengeattheageof3weeks;

2.TheserumaverageELISatitertoIBDVwas1036 289(n=7,600-1071)in7survivedchickens7daysafterchallengeattheageof3;weeks

(3.TheserumaverageELISatitertoIBDVwas4985 1120n=7,3206-6213)in7survivedchickens10daysafterchallengeattheageof4

(weeks,anditincreasedto7907 1164n=6,6303-9296)in6survivedbirds17daysafterchallengeattheageof4weeks;4.Bystudent!testanalysis,therewasnosignificantdifferenceintheratiosofbursaorthymusweight/bodyweight6daysafterchallengewith

GX8/99attheageof2weeksbetweenchallengedandcontrolbirds;buttheratiosofbursaorthymusweight/bodyweight6daysafterchallengeatthe

0.05).Theratioofspleen/bodyweighttendedtobelargerininoculatedbirdsthanageof3-4weeksweresignificantlylowerthanthecontrol(""thecontrolbutnotsignificant.

[[6]7]者的高度重视。李德山、曹永长等先后报道了

讨论

从我国分离到vvIBDV毒株,可有60%!70%致死

率。但是,在这些报道中,测定每一个毒株致死率的动物试验所用的鸡只数量太少,均在10只以下。而且,对接种的病毒没有定量,也没有重复试验。因此,确定这些毒株是超强毒的说服力显得不够充分。

[]例如,Chettle等1在首先报道52/70、DV86和E

以相应毒株感染的病鸡anglia等3株vvIBDV时,

从60年代初IBDV发现以来,其在鸡群中自然

感染时发病近乎100%,但最高死亡率已只有20%

[10]这称之为标准毒。然而80年代末90年!30%,代初,欧洲报道了超强毒IBDV(,其死亡率vvIBDV)

11]可达90%甚至100%[1,。这引起了国内禽病界学

2GX899165表5GX8/99株IBDV对商品代蛋用鸡

的致病性实验(2)

Table5

Themortalityincommercialegg-type

chickenscaLsedbyIBDVGX8/99strain(2)

Exp.ageofchickens

VirLsdose

Chickenschallenged()

(ELD50)TotalDiedWithin6days

!420003533(94.3%)520003331(93.9%)"

42007662(81.6%)52005047(94%)7

200

25

15(60%)

InExp.",theaveragematernalantibodyELISatiterstoIBDV

Were420 180(n=16,161-824)and418 139(n=16,191-654)

theageof28daysand35daysrespectively.InELISatest,thetiters!396WerejLdgedaspositiveaccordingtotheinstrLctionofthecom-mercialkit.apparently,theaveragematernalantibodytitertoIBDVWaslyslightlyhigherthanthebaselinejLdgedaspositiveattheageof28ysandbirdsshoLldbesensitivetoveryvirLlentIBDV.In16birds

gedattheageof28days,

theserLmELISatitersin5sLrvivedWere2018-4461and5791-1165010daysand18daysafterchal-ge.In16birdschallengedattheageof35days,only2sLrvived,theirmELISatitersWere4041and7175respectively12daysafterchal-ge.

法氏囊的1:10(W/V)PBS悬液0.1ml点眼人工感

染5周龄商品代蛋用型鸡,诱发了25/50(50%)、/50(90%)、45/50(90%)的死亡率。因此,如果仅用10只鸡显然样本太少,如不重复试验,受个体差异性的影响将会很大,因而有关高致病性的结论就很难令人心服。在本研究的预备实验中,已对从全国不同省份收集来的病料中随机选出的16个有地区代表性的毒株,比较了它们的致病性。结果显示,各地的分离毒在人工感染实验中致死率差异很大。有的完全不引起死亡,有的致死率高达60%#

%,

但多数在50%以下。本研究从中选择了致死率最高的GX8/99株,分别在不同年龄的SPF鸡或商品代蛋鸡用不同剂量的病毒人工攻毒,在26次不同组合的反复实验中,总共用了1200多羽鸡。结果确凿地证明了,在用适当剂量病毒接种易感鸡时,GX8/99株可重复地引起60%以上的死亡率,有些实验组可达90%以上。在研究IBDV野毒株的致病性时,迄今为止国内外对攻毒所用的病毒量尚没有标准化。大多数实验室仍采用最初由Chettle[1]采用的病鸡法氏囊1:10(W/V)悬液0.1ml作为接种量。虽然后来VaNDENBERG等引进了对4周龄SPF鸡的半数致死量(LD50)作为IBDV的感染

单位[11]。他们采用的100个SPF鸡的LD50,相当于0.125ml的1:10感染鸡法氏囊悬液,

与Chet-[11]采用的接种量类似。但这一方法对多数标准

毒不能实施,因而也没有被普遍接受。在本研究中,所用的GX8/99株IBDV感染鸡的法氏囊中每克含

有105ELD50。因此,所用2000个ELD50接种量相当于0.2ml的1:10的法氏囊悬液,与Chettle报道[1]的接种量相比只是多一倍;而200个ELD50接种量,相当于0.2ml的1:100的法氏囊悬液,只是Chettle报道的接种量的五分之一。显然,GX8/99株确实是一个超强毒IBDV株。

国内一些发病鸡场显示,IBDV感染和病理变化的鸡群有时有相当高的死亡率,但在用病料人工攻毒时又常常不引起死亡。为此,有人怀疑,自然发病时的高死亡率可能与其他病毒的共感染有关。我们对大量收集的法氏囊样品中其他病毒的检测结果表明,IBDV确实常常和MDV、REV和CaV发生共感染[8]。本研究采用的GX8/99病毒的原始法氏囊病料中,已用特异性核酸探针作分子杂交实验确

证不含有MDV、REV和CaV[8]

。但在本研究中,同一GX8/99株IBDV的法氏囊悬液,

对二批母源抗体水平已降至很低水平的4和5周龄商品代蛋鸡的致死率分别为81.6%、94%及35%、61.4%(表

4、5),差别仍然很大。在表5中,有3批4#5周龄商品代蛋鸡的死亡率均超过90%,甚至高于在SPF鸡的致死率。GX8/99对这些鸡的高致死率是否与同时还有其他病毒共感染减低了鸡的抵抗力有关,还是与鸡品系的易感性有关,这还有待进一步研究。

近三年中,我们在实施国家自然科学基金重大项目“我国畜禽四种主要病毒病原生态和分子流行病学研究”的过程中,已完成了近30个IBDV毒株的VP2高变区的核苷酸序列的同源性比较研究,并以此绘制了我国分离病毒间及国外发表的毒株间的系统进化树(张曼夫等,国家自然科学基金重大项目中期检查报告,2001.01.11)

。然而,由于缺乏对大多数毒株的生物学活性特别是致病性的深入比较,使病毒的核酸分子结构与其致病性的关系的分析很难做出有说服力的结论。本文报道的GX8/99株IBDV,

则是在致病性研究上所用实验鸡数量最大、数据最为详尽因而能令人信服的一个超强毒株。参考文献:

1]ChettleN,StLartJC,WyethPJ.OLtbreakofvirLlentinfectioLs

bLrsaldiseaseinEastanglia[J].VetRec,1989,125:271-272.2]RosenbergerJK,CloLdSS.Isolationandcharacterizationofvariant

infectioLsbLrsaldiseasevirLses[abst[]J].JaVetMedassoc,189:357.

3]

周蛟,刘福致,陈丽永,等.北京地区鸡传染性法氏囊病病原分离atondachallenlenserLlen[[[4580tle

16618[J].中国兽医杂志,1982,NO.7:25-26.[李树根,黄生,林志雄,等.鸡传染性法氏囊病血清!型毒株的分4]

离[J].中国畜禽传染病,1991,NO.5:7-11.

[李广星,孙宗属,刘文周,等.四株鸡传染性法氏囊病病毒毒力的5]

研究[J].中国畜禽传染病,1998,20:324-326.[李德山,武志强,陈冠春,等.鸡传染性法氏囊病超强毒株的分离6]

和初步鉴定[J].中国畜禽传染病,1991,NO.6:3-6.[曹永长,毕英佐,梁志清,等.超强传染性法氏囊病毒毒株宿主保7]

护抗原的分子特征[J].中国兽医学报,1998,18:521-526.

[金文杰,崔治中,刘岳龙,等.传染性法氏囊病料中MDV,8]CAV,

[REV的共感染检测J].中国兽医学报,2001,21:6-9.[金文杰.传染性法氏囊病毒分离株抗原性和致病性比较[D]9].扬

州大学,2000.[10]LukertPD,SaifYM.DiseasesofPoultry[M].tenthedition,

editedbyCalnek.BW,IowaStateUniVersityPress,Ames,USA,1997.pp721-738.

[11]VandenBergtP,GonzeM,MeulemansG.Acuteinfectiousbursaldiseaseinpoultry:IsolationandcharacterizationofahighlyVirulent

strain[J].AVianPathol,1991,20:133-143.

PathogenicityofaVeryVirulentstrainGX8/99ofinfectiousbursaldisease

Virus

CUIzhi-zhong1,SUNShu-hong1,SHANzhong-fang1,JIANGYu-wen2,JINWen-jie3

(1.DePtartmentofPreoentioeveterinaryMedicine,CollegeofAnimalscienceandveterinaryMedicine,shandongAgriculturalunioersity,Taian271018,China;2.GuangxiveterinaryInstitute,Nanning3143218,China;3.CollegeofAnimalscienceandveterinaryMedicine,Yangzhouunioersity,Yangzhou225009,China)

(Abstract:AVeryVirulentstrainGX8/99ofinfectiousbursaldiseaseVirusIBDV)wasstudiedforitsmortalityin

SPfchickensandcommercialegg-typechickensatdifferentageinoculatedwithbursalsuspensionof20-2,000ELD50inrepeatedexperiments.ItdemonstratedthatGX8/99couldinducehighmortalitybetween55%-92%inSPfchickensattheageof4-13weekswith200ELD50,itstillcausedsomemortalityof10%-15%attheageof120days,butdidnotinduceanymortalityafter128daysofage.Incommercialegg-typechickensof4-5weeks,GX8/99of2,000or200ELD50causedmortalitybetween35%-94%fromfrocktofrock.In2week-oldcommericalegg-typechickensretainingsomeleVelofmaternalantibodytoIBDV,themortalitywasonly10%.

(;Keywords:infectiousbursaldiseaseVirusIBDV)ELD50;pathogenicity

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