一例藏鸡新城疫病毒的分离鉴定与致病指数试验

上传者：黄大明
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上传时间：2015-04-21
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一例藏鸡新城疫病毒的分离鉴定与致病指数试验

一例藏鸡新城疫病毒的分离鉴定与
致病指数试验
朱洪云，旦巴次仁，索朗斯珠
（西藏农牧学院动科学院，西藏林芝 860000）
摘要：取疑似新城疫病毒（NDV）感染的病料进行9 日龄鸡胚接种，结果分离到一株病毒。该病毒具有血凝性，血凝活性能被新城疫阳性血清
所抑制。减蛋综合征（EDS）阳性血清，传染性支气管炎阳性血清、禽流感H5、H9 单因子血清进行血凝抑制（HI）交叉试验发现，该病毒不能
抑制血凝活性，动物回归试验出现与新城疫病毒感染鸡相一致的症状，可确认该病为新城疫病毒感染。根据 NDV 毒力测定标准，MDT＞90 h，
ICPI 为0. 38，IVPI 值为0，可判定为新城疫弱毒株。
关键词：新城疫病毒；分离；鉴定；致病指数
中图分类号：S855. 3 文献标识码：B 文章编号：0529-5130（2011）11-0074-02
新城疫（Newcastle disease，ND），又称亚洲鸡
瘟、伪鸡瘟等，由新城疫病毒（NDV）引起的一种
急性高度接触性传染病，可引起禽类消化道和中枢神
经系统的损伤
［1］
。世界范围内曾发生过4 次大规模的
NDV 流行。首次大暴发源于东南亚和英国，从1926
到1960 年，经过30 多年的时间，从印尼和英国传遍
了全世界，给养禽业带来巨大的损害，世界各国都十
分重视该病，世界动物卫生组织（OIE）规定其为必
须上报的传染病。2010 年，笔者对一藏鸡散养户送
来的病鸡进行临床症状观察和解剖，疑似新城疫病毒
感染。为尽量降低养殖场的损失，快速查明该鸡发病
的原因，找到合理有效的治疗措施，对病料进行病毒
分离和致病性试验。现将试验结果报道如下。
1 材料与方法
1. 1 材料
病料来自某藏鸡养殖户。发病鸡精神萎靡，头颈
缩起，鸡冠呈紫色，眼半闭，走路摇晃，翅下垂，粪
便稀薄，张口呼吸，对2 只死鸡剖检发现，气管黏膜
出血，腺胃乳头和乳头间有出血点或出血斑，腺胃与
肌胃交界处未见出血，空肠、盲肠、回肠等肠段有出
血点，盲肠扁桃体未见明显肿胀。采病死鸡的肺脏、
肝脏和脾脏，作病原分离用。
新城疫阳性血清、减蛋综合征阳性血清，传染性
支气管炎阳性血清购自中国兽医药品监察所，AIH5、
H9 单因子血清购自中国农业科学院哈尔滨兽医研
收稿日期：2011-03-03
基金资助：国家自然科学基金资助（30960283）；西藏农牧学院
“211 工程师资队伍建设项目资助”（SZTD-211-01）。
作者简介：朱洪云（1967- ），男，副教授，从事兽医临床和教
学，E-mail：xzzhyhn@163. com。
究所。
1%鸡红细胞灭菌生理盐水悬液按常规由本实验
室自制。
无NDV 抗体鸡及鸡胚由华中农业大学动物医学
院提供。
1. 2 方法
1. 2. 1 病料的处理
将采集的病料剪碎后加入2 倍体积的灭菌生理盐
水，由组织粉碎机粉碎，冻融3 次后加入青链霉素各
3 000 U，置4 ℃冰箱过夜，菌检合格后备用。
1. 2. 2 病毒的分离传代
将上述制备好的病料上清液分别接种5 枚9 日龄
鸡胚尿囊腔中，每枚0. 2 mL。置37 ℃恒温箱继续孵
育至120 h，每天照蛋2 次。将24 h 内死亡的鸡胚弃
去，及时取出死亡的鸡胚，至 120 h 将全部鸡胚取
出，置4 ℃冰箱过夜。分别无菌收取尿囊液，并逐个
检测血凝（HA）效价。将有效价的尿囊液用 ND、
H5、H9 单因子血清做血凝抑制（HI）交叉试验。将
HA 效价为零的尿囊液经 SPF 鸡胚连续传代2 次后，
再测血凝活性，阴性者弃去。如果出现效价，应及时
检测。HA 及HI 试验方法按常规进行
［2－3］
。
1. 2. 3 动物回归试验
将分离得到的病毒液经滴鼻、点眼途径攻毒5 只
30 日龄的无免疫新城疫疫苗鸡，每只0. 5 mL。观察
鸡群变化。
1. 2 . 4 鸡胚平均死亡时间（MDT）测定
用鸡胚培养分离到的病毒，收集尿囊液；用灭菌
生理盐水连续10 倍稀释病毒（尿囊液）；根据经验，
选择3 ～ 5 个稀释度，取10 枚9 日龄无 NDV 抗体鸡
胚，先接种5 枚，每个鸡胚尿囊腔接种0. 1 mL；大
约8 h 后，每个稀释度再接种另外5 枚鸡胚；接种后
的鸡胚在37 ℃孵化7 d，每天早、晚各观察1 次，记
· 4 7 · Animal Husbandry ＆ Veterinary Medicine 2011 Vol. 43 No. 11

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