补血草属植物化学成分提取工艺研究进展_于洪超

第３４卷第２期２０１５年４月

中国海洋药物

ＣＨＩＮＥＳＥＯＵＲＮＡＬＦ　ＭＡＲＩＮＥＲＵＧＳ　Ｊ　Ｏ　Ｄ

Ｖｏｌ．３４　Ｎｏ．２

，Ａｒｉｌ２０１５ｐ

补血草属植物化学成分提取工艺研究进展

于洪超１，郭庆梅＊，周凤琴

（）山东中医药大学药学院，山东济南２５０３５５

△

＊

摘　要：根据近几年的国内外相关文献，综述了补血草属植物中多糖、黄酮、挥发油的提取工艺。为补血草属植物的进一步开发利用提供参考。关键词：补血草属；化学成分；提取方法

（）中图分类号：Ｒ９２　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００２３４６１２０１５０２０９１０４－－－

DOI:10.13400/j.cnki.cjmd.2015.02.016

Ｒｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｓｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｏｎｅｎｔｓ　　　　　　　　ｐ

ｏｆＬｉｍｏｎｉｕｍＭｉｌｌ　

１＊

，，ＹＵ　ＨｏｎｃｈａｏＧＵＯ　ＱｉｎｅｉＺＨＯＵＦｅｎｉｎ－－ｍ　－ｇｇｇｑ

（ＳｃｈｏｏｌｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａｎｄｏｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　　　ｆ　ｇ　ｙｆ　　

Ｊｉｎａｎ２５０３５５，Ｃｈｉｎａ）

：，ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｉｓｒｅｖｉｅｗｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｏｌｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｎｄｖｏｌａｔｉｌｅ　　　　　　　　　ｐｙ

，ｅａｒｓｒｏｖｉｄｅｄｏｉｌｓｆｒｏｍＬｉｍｏｎｉｕｍＭｉｌｌｒｅｏｒｔｅｄｉｎｒｅｃｅｎｔｗｈｉｃｈｕｓｅｆｕｌｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒｅｘ　　　　　　　　　　　　－ｐｙｐａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＬｉｍｏｎｉｕｍＭｉｌｌ．ｌｏｉｔａｔｉｏｎ　　　　ｐ

：；；ＫｅｗｏｒｄｓＬｉｍｏｎｉｕｍＭｉｌｌｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｏｎｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ　　ｐｙ　）植物为白花丹科Ｌｉｍｏｎｉｕｍ　Ｍｉｌｌ　　补血草属（

（）多年生草本植物，分布于世界各Ｐｌｕｍｂａｉｎａｃｅａｅｇ地，但主要分布于欧亚大陆的地中海沿岸；多生于海岸和盐性草原地区。中国有１分布于７～１８种，河北、山东、浙江、江苏、河南、山西、陕西、甘辽宁、

１］

。该属的肃、青海、宁夏、福建、广东、海南等地［

２］

物有补血止血、抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤［以及］５９－免疫调节、抑制白血病、抗肝损伤［等多种药理

作用。

补血草属植物所含化学成分十分丰富，含有黄酮类、甾体、挥发油、维生素类、蛋白质、多糖类、

２］

。其中的活生物碱、鞣质、有机酸、微量元素等［

主要药用品种有中华补血草（Ｌｉｍｏｎｉｕｍｓｉｎｅｎｓｅ　（））、二ＧｉｒａｒｄＯ．Ｋｕｎｔｚｅ［ＳｔａｔｉｃｅｓｉｎｅｎｓｉｓＧｉｒａｒｄ］　　

［２］

色补血草（和黄花补血草Ｌｉｍｏｎｉｕｍ　ｂｉｃｏｌｏｒ）

［３］（）Ｈ）等。补血草属植Ｌｉｍｏｎｉｕｍ　ａｕｒｅｕｍ（Ｌ．ｉｌｌ物在中国的药用历史较长，据记载补血草属植物

黄酮、挥发油等与其较好的临床药性成分如多糖、

理活性密切相关。近年来，对补血草属植物化学成分提取、含量测定等方面研究较多，但对于该属植物化学成分的提取工艺的总结和概述尚未见文献报道。由于传统的提取工艺的不断成熟、完善及新的提取工艺不断提出，对于补血草属植物化学成分的提取工艺的比较总结就显得格外重要，作者对此进行相关综述，旨在为补血草属植物资

的根或全草有清热，利湿，止血，解毒的功效。主治病症有湿热便血，脱肛，血淋，月经过多，白带，

４］

。现代药理实验证明，痈肿疮毒等［补血草属植

）国家高技术研究发展计划项目（资助２０１３ＡＡ０９３００１＊△基金项目：

，：于洪超（男，硕士研究生，研究方向为中药质量控制与资源研究，１９９１Ｅ－ｍａｉｌ６３．ｃｏｍｈｃ０１１１＠１　作者简介：－）ｙ

：郭庆梅，女，教授，研究方向为中药质量控制与资源研究，Ｅ－ｍａｉｌｍｕｏｉｎａ．ｃｏｍ．＊通讯作者：＠ｓｑｇ２０１４０７２９　　收稿日期：－－

９２　中　国　海　洋　药　物３４卷

源的进一步开发利用提供参考。

１　补血草属植物化学成分提取工艺１．１　补血草属植物多糖类化合物提取工艺

补血草属植物中的多糖类成分是一类重要的

１０］活性成分，张连茹等［从二色补血草中分离得到

圣草素、木犀草素、槲皮素等，总黄酮的含量也随药用部位的变化而变化，以二色补血草为例，花中总黄酮含量最高，然后是茎、根，叶中黄酮含量最

２］

。黄酮类化合物具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗少［

病毒、降低脂质过氧化反应、预防心血管疾病和抗

１５］

。并且不断有新的衰老、抗自由基等药理作用［［１６］

黄酮类化合物被发现。ＮａａＫｏｎ－Ｎ　ｇ等从补血

的水溶性多糖在体外能够显著抑制Ｈｅｌａ细胞的

生长和增殖，具有良好的体外抗癌活性。龙玲

３］等［对于黄花补血草多糖的研究表明其对小鼠肝

草中分离获得了２个新黄酮类化合物：槲皮素－３－Ｏ２′′Ｌ－吡喃鼠李糖苷和槲皮－（－Ｏ－巴豆酰基）－α－

素－药３３′′Ｌ－吡喃鼠李糖苷，－Ｏ－（－Ｏ－巴豆酰基）－α－

理实验也证明其有抗肿瘤的作用。黄酮类化合物的提取方法通常有水提法、醇提法、微波法、超声

１７］

酶解法、大孔吸附树脂法等等。严丽芳等［波法、

促进肿瘤细胞的癌Ｈ２２细胞生长具有抑制作用，

凋亡。多糖类化合物的提取常用方法有水提法、超声提取法、酶解法、微波法等几类，但目前所见

［１１］报道最为常用的是前２种方法。Ｔ对中ａｎｇ等

华补血草多糖超声提取法的工艺进行优化，进行单因素试验确定影响多糖提取率最大的３个因素超声时间、料液比，后采用中心复合为提取温度、

实验设计优化３个因素的水平，发现在提取温度超声时间５料液比１∶１９５℃、０ｍｉｎ、２的条件下，提取率最高为１２．８０％±０．１９％。ＰｅｎＺｈａｏｇ　

１２］等［采用ＢｏｘＢｅｈｎｋｅｎ实验设计优化二色补血－

分别采用微波法、超声波法、酶解法３种提取工艺考察了不同提取工艺对中华补血草总黄酮提取率综合总黄酮提取率、操的影响。经过单因素考察，

作简便性以及经济实用型几个方面，认为微波法最优，后选取乙醇体积分数、料液比、微波功率３

５

因素，各取３水平，进行Ｌ正交设计，发现在３）９（

／，乙醇体积分数５料液比１∶３微波０％，０（ｍＬｇ）功率５微波时间３中华补血草总２８Ｗ，０ｓ条件下，

１８］

／。张丽华等［黄酮得率最高为２采用２．１９ｍｇｇ

发现在提取温度８提草多糖的提取工艺，１．２３℃、取功率１提取时间４料液比为９０．８６Ｗ、２．３９ｍｉｎ、多糖提取率最高为７．１∶１５．４的条件下，１１％。

此外，还有学者对补血草属多糖的纯化工艺进行

１３］研究。赵鹏等［分别采用三氯乙酸法、Ｓｅｖａｅｇ

超声波法对二色补血草黄酮进行提取，结合响应曲面法优化超声提取中的时间、超声功率和温度３，个因素，确定最佳工艺条件为：超声时间３５ｍｉｎ（／），温度５超声功率３液料比为９０℃，８０Ｗ，ｍＬｇ提取２次，在此提取条件下，二色补血草黄酮的含

］１９２０－

／。欧莉等［采用水浴醇提结量为３６．２８ｍｇｇ

法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶－Ｓｅｖａｅ法对二色ｇ补血草多糖脱蛋白工艺进行比较优化，木瓜蛋白然后对木瓜蛋白酶－酶－Ｓｅｖａｅ法效果最好，Ｓｅｖａｅｇｇ

法脱蛋白进行单因素实验、响应面优化试验，对酶酶解时间、温度３个因素的水平进行优化，底比、

发现在酶底比２．反应温度７反应时０２％，４．０６℃，间２．蛋白脱除率和多糖保留率最高，０５ｈ条件下，

［４］分别为８采用活３．７２％和８０．２５％。张丽华等１

合大孔吸附树脂吸附的方法对总黄酮进行提取。采用１在５０倍量６０％乙醇为提取溶剂，０℃下水浴３ｈ，重复提取２次，提取液经过滤，浓缩得到生／药量为０．用Ｄ－１２４ｇｍＬ的醇提取液，０１大孔吸附树脂对二色补血草醇提取液进行纯化得总黄酮。此外还考察了其他大孔吸附树脂如ＨＰＤ－

８２６、ＨＰＤ－７２２、ＡＢ－８、ＡＤＳ－１７等对总黄酮的吸附和洗脱性能，综合考虑吸附量和解吸率两方面的因素，确定大孔吸附树脂Ｄ－１０１对总黄酮的富集与纯化效果最好。最佳纯化条件为：上样流速４上样液浓度０．洗脱剂ＢＶ·ｈ－１，２４ｇ·ｍＬ－１，洗脱体积５乙醇浓度７０％，ＢＶ。在此条件下测得二色补血草中总黄酮含量为６５．４６％。１．３　补血草属植物挥发油类化合物提取工艺

性炭法、双氧水法、大孔树脂法，反胶束法几种方法对二色补血草多糖脱色工艺优化，发现双氧水法效果最好，并在单因素试验的基础上，进行了响在最佳工艺条件温度５时间应面优化试验，５℃，二色补血草多糖色素脱除率最２ｈ，Ｈ＝８．５时，ｐ

高为８多糖保留率为８７．７５％，７．９７％。１．２　补血草属植物黄酮类化合物提取工艺

最新的药理活性试验表明，补血草属植物中的黄酮化合物是主要的活性化学成分，包括北美

２期于洪超，等：补血草属植物化学成分提取工艺研究进展９３　

挥发油是１种能随着水蒸气蒸馏的挥发性的油状液体，成分通常含有以萜烯、倍半萜烯及其含氧衍生物等，挥发油的提取方法有有机溶剂浸提压榨法、水蒸气蒸馏法、微波提取法、超临界流法、

体萃取法等等，目前实验室最常用的是水蒸气蒸馏法提取。国内对于补血草属植物挥发性成分的

１０］

张连茹等［采用水蒸气蒸最早报道见于２００４年，

的方法可获得较高的黄酮提取率，综合考虑吸附量和解吸率两方面的因素对大孔吸附树脂进行选择，发现大孔吸附树脂Ｄ－１０１对总黄酮的富集与纯化效果最好。而采用超临界ＣＯ２萃取技术提取挥发油可获得较高的提取率，更低的有效成分的破坏率。

３　展望

补血草属植物耐盐碱、生命力强，分布范围可以用于防风固沙、城市绿化、园林美化等各广，

个方面，是中国１种优良的野生植物资源。此外，补血草植物具有较高的药用价值，广泛的用于各种出血病症，特别是随着对补血草研究的进一步深入，各种活性成分不断被发现，使得补血草的应用更加广泛。但由于不注意保护，野生的补血草属植物资源量不断下降，为了在将来能够对补血开发和利用，就必须保护好现草植物更好的研究、

有的野生种质资源，采取切实有效的保护措施。

本文综述了近年来对于补血草属植物的化学成分的提取工艺，在对补血草属植物的研究当中，提取出补血草属植物的有效活性成分是进行研究的第一步，也是进行后续研究的基础，每种提取工艺都有一定的局限性，还需依靠科学技术的不断进步进行完善和创新，使之为现代化研究服务。参考文献

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ｆｕｌａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｆｒｏｍｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎａｌｈａｌｏｈｔｅＬｉｍｏｎｉａｓｔｒｕｍ　　　　　　ｐｙ］（）：ｕｏｎｉａｎｕｍ［Ｊ．Ｆｏｏｄｃｈｅｍ，２０１２，１３５３１４１９１４２４．　－ｇｙ［］，７ｒｉｆａＭ，ＢｏｕｈｌｅｌＩＧｈｅｄｉｒａｈｅｋｉｒＬ，ｅｔａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕ　Ｋ　　－Ｃ　　－

ｌａｔｏｒａｎｄｃｅｌｌｕｌａｒａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆａｎａｕｅｏｕｓｅｘ　　－　　　　　－ｙｑ　［］ｕｏｎｉａｎｕｍｇｔｒａｃｔｏｆＬｉｍｏｎｉａｓｔｒｕｍ　ａｌｌＪ．Ｊｅｔｈｎｏｈａｒｍａ－　　　ｇｙｐ

馏法提取二色补血草中的挥发油成分，提取的挥发油成分质量分数为０．６％。后采用气相－质谱联用对提取的挥发油组分进行分析，确定了占挥发油组分９共６其中包括４．２％的成分，６个化合物，高级醇类、酯类、烯烃类、脂肪酸、氧化物、环氧化物等。其中Ｔｅｔｒｈａｄｏｒｉｏｎｏｌ为主要的挥发性成ｙ分，并通过药理实验证明二色补血草中挥发油成分对革兰氏阳性菌和革兰阴性菌都有不同程度的

］２０］２１２２－

。刘宇等［采用水蒸气蒸馏法提取抑制作用［

黄花补血草中挥发油成分，并用ＧＣ－ＭＳ法定性，用峰面积归一化法定量，确定了占挥发油总量的共７８２．１２％的成分，０种化合物。其中主要的挥发油成分为硝基乙醇，约占挥发油总量的同时还使用超临界Ｃ５９．６３％。Ｏ２萃取法提取黄花补血草花部挥发油化学成分，确定了占挥发油总量８共５１．１３％的成分，９种化合物。黄花补血草花部挥发油的主要组分为邻苯二甲酸异丁基辛酯分别占挥发油总量的１和菜油甾醇，２．４７％和超临界Ｃ１３．２８％。Ｏ２萃取技术是１种较好的提取挥发油的技术，提取温度低，速度快，提取含量高。避免了高温对其中有效成分的破坏，是１种近年来发展较快的提取挥发油技术。

２　小结

综上所述，在补血草属植物多糖类化合物提取工艺的探索中发现水提法的多糖得率高于超声提取法，在优化水提法工艺参数时，首先采用单因然后采素试验确定影响多糖提取率的几个因素，用响应面设计筛选出因素的最佳水平组合，从而得到最优的提取工艺，这种实验设计思路在目前的研究中采用较多，是１种全面合理的设计。在多糖类化合物的纯化过程中，采用木瓜蛋白酶－双氧水法脱色素可获得较高的Ｓｅｖａｅ法脱蛋白、ｇ蛋白脱除率、色素脱除率和多糖保留率。对于黄酮类化合物的提取以醇提结合大孔吸附树脂吸附

９４　

（）：ｃｏｌ，２０１３，１４６１２４３２４９．－

中　国　海　洋　药　物

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３４卷

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ｕｍｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆ　　　　　　　ｐ［］ＬｉｍｏｎｉｕｍｓｉｎｅｎｓｅａａｉｎｓｔｌｉｖｅｒｄａｍａｅｉｎｍｉｃｅＪ．Ｐｈａｒｍａ－　　　　　　ｇｇ（）：ｃｏｎ　ｍａ２０１０，６２３１９１．ｇｇ，

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