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肿瘤坏死因子-α在脓毒症大鼠心肌损害中的表达及作用机制

?3682?4 TiddensH,SilermanM,BushA畅Theroleofinflammationinairwaydis-5 JardineH,MacNeeW,DonaldsonK,etal畅Molecularmechanismof

alveolarepithelialcells畅InvolvementofAP-1/AREandFra-1〔J〕畅JBiolChem,2002;277(24):21158-66畅

〔2012-07-03收稿 2012-10-10修回〕

transforminggrowthfactor(TGF)-beta1-inducedglutathionedepletionineaseremodelling〔J〕AmJCirtMed,2000;162(1):7畅

道的慢性炎症反应,进而控制病情的发展,从而治疗COPD。4 参考文献

1 江苏新医学院畅中药大辞典(下册)〔M〕畅上海:上海人民出版社,

1977:1879畅

2 中华医学会呼吸疾病学分会畅慢性阻塞性肺疾病(COPD)诊治指南

〔J〕畅中华呼吸和结核杂志,2002;25(8):453-60畅

3 韩 玲,许建英畅慢性阻塞性肺疾病患者气道上皮细胞TGF-β1表

达的研究〔J〕畅山西医科大学学报,2007;38(2):31-3畅

(编辑 赵慧玲/曹梦园)

肿瘤坏死因子-α在脓毒症大鼠心肌损害中的表达及作用机制

张文伟 魏 威 曹 红 金 辉 (辽宁医学院附属第三医院心血管内科,辽宁 锦州 121000)

  〔摘 要〕 目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α在脓毒症大鼠心肌损害中的表达及其作用机制。方法 将40只1月龄的健康清洁级雄性Wist-ar大鼠随机分为脓毒症组20只(盲肠结扎穿刺术脓毒症造模)、对照组20只(假手术仅开腹翻动盲肠),应用免疫组织化学法检测两组心肌中TNF-α的表达强度。电镜观察心肌损伤的病理变化,进行病理学分级和白细胞浸润分级。分析损伤心肌中TNF-α表达强度与病理分级、白细胞浸润分级的关系。结果 TNF-α在脓毒症组心肌中的表达强度明显大于对照组(P<0畅01);脓毒症组心肌病理分级及白细胞浸润分级明显高于对照组(P<0畅01);脓毒症组心肌中TNF-α表达的强弱与病理分级和白细胞浸润分级呈正相关。结论 TNF-α与脓毒症心肌损害密切相关,其介导的炎症在心肌损害的发生发展过程中起着重要的作用。

〔关键词〕 肿瘤坏死因子(TNF)-α;脓毒症;动物造模;心肌损害

〔中图分类号〕 R541畅9  〔文献标识码〕 A  〔文章编号〕 1005-9202(2014)13-3682-03;doi:10畅3969/j畅issn畅1005-9202畅2014畅13畅080

TheexpressionofTNF-αinmyocardialdamageofratswithsepsisandrelatedmechanism

ZHANGWen-Wei,WEIWei,CAOHong,etal畅

DepartmentofCardiovascularInternalMedicine,theThirdAffiliatedHospitalofLiaoningMedicalCollege,Jinzhou121000,Lia-oning,China

【Abstract】 Objective Toinvestigatetheexpressionoftumornecrosisfactor(TNF)-αinmyocardialdamageofratswithsepsisandthemechanisminvolved.Methods FortySDhealthymaleWistarratsof1monthweredividedintotwogroupsrandomly.Thetestgroupwasmadebycecalligationandpuncture(CLP)asthesepsismodelandcontrolgroupwasopenedobdomenandflippedappendix,respectively.ImmunohistochemistrywasusedtodetecttheexpressiondifferenceofmyocardialTNF-αinthebothgroups.Inaddition,thepathologicalchangesofmyocardialdamagewasmeasuredbyelectronmicroscopeandcomparedwithpathologicalandleukocyteinfiltrationgrading.ThecorrelationofTNF-αexpression,pathologicalgradingandLeukocyteinfiltrationgradinginmyocardialdamagewasanalyzedbyDidit.Results TNF-αlevelsintestgroupweresignificantlyhigherthanthoseofcontrolgroup(P<0.05)andthepathologicalgradingandleukocyteinfil-trationgradinghadthesametrendinthetwogroups(P<0.05),respectively.TherewassignificantlypositivecorrelationofTNF-αexpres-sionwithpathologicalandleukocyteinfiltrationgradinginmyocardialofratswithsepsis.TheexpressionofTNF-αwassignificantlyincreasedinmyocardiumofratswithsepsis,andpositivelycorrelatedwithmyocardialdamageandleukocyteinfiltration.Conclusions TNF-αiscloselyrelatedtomyocardialdamageinsepsisandtheinflammatoryresponseinducedbyTNF-αcouldplayanimportantroleindevelopmentandprogressionofmyocardialdamage.

【Keywords】 TNF-α;Sepsis;Animalmodel;Myocardialdamage  脓毒症病情发展异常迅猛,易快速进展为严重的脓毒血症,甚至感染性休克,研究表明心肌抑制和对儿茶酚胺耐药的低血压是严重脓毒血症的两种主要死亡原因

〔1〕

在盲肠结扎穿孔法制造脓毒症大鼠心肌中的表达强度及作用机制。1 材料与方法

1畅1 动物模型建立及分组 清洁级健康雄性Wistar大鼠40只,体质量(123±12)g,由山东大学医学院实验动物中心提供。随机分为对照组(20只)、脓毒症组(20只)。实验动物均可自由饮水,但要禁食12h,脓毒症组参照并改进陈辉等

〔2,3〕

。一旦出现心

肌抑制导致的心肌损害,患者的心肌功能会持续恶化,其病死率可上升至60%~90%。本研究观察肿瘤坏死因子(TNF)-α

基金项目:广东省科技厅重点项目(2010B031500014)1 南方医科大学生物技术学院

第一作者:张文伟(1971-),男,硕士,副主任医师,主要从事脓毒症心肌

功能障碍的发生机制研究。

的方法

进行造模,按300mg/kg应用10%的水合氯醛注射于腹腔内麻

?3683?

醉后将大鼠固定于简易手术台上,腹部备皮,消毒铺巾后沿腹正中线作长约2cm的切口,探查并找到盲肠,将盲肠内的粪便轻轻向远端挤,于距离回盲端60%处用4号线环形结扎盲肠,用20ml注射器针头穿透盲肠,挤出少量粪便,并留置细橡皮条贯通盲肠防止针道闭合,还纳盲肠回腹腔,逐层关闭切口,术后按30ml/kg给予股部皮下注射9%氯化钠预防休克发生,术后常规进水。对照组仅开腹翻动盲肠。

1畅2 取材及标本处理 在造模术后20h,所有大鼠以麻醉法处死后立即取出心脏,生理盐水冲洗后,切取心尖部分(包含部分室间隔前部与左心室心肌约100mg),置入4%的甲醛中固定72h,脱水、石蜡包埋、病理切片、HE和免疫组化染色。光学Ⅱ~Ⅲ级>病理Ⅰ~Ⅱ级,TNF-α表达呈触,白细胞浸润程度为Ⅰ级>病理0级,TNF-α表达呈-或+,白细胞浸润程度0级,心肌TNF-α表达强度与心肌的损伤程度、心肌白细胞的浸润程度呈正相关。3 讨 论

  盲肠结扎穿刺术建立的脓毒症模型,已广泛用于脓毒症的研究。临床上发现近70%的脓毒症患者会并发心肌损害(在新生儿败血症中尤其常见,其心肌损害的发病率及病死率均较高),一般认为于脓毒症发生后5h就存在心肌损伤,可称之为早发型,此型最初是心脏自身功能障碍,而心肌形态学正常,表显微镜下观察并照相。

1畅3 脓毒症所致心肌损害的病理分级 参照Rone评价标准

〔4〕

将心肌损害的病理改变分为0级:无病变;Ⅰ级:心内膜下

小局灶性病变;Ⅱ级:心肌大范围的灶性病变,心肌纤维出现肿胀断裂;Ⅲ级:心肌内广泛的融合性病变;Ⅳ级:心肌出现坏死、变性。

1畅4 电镜观察心肌切片白细胞浸润程度分级

〔5〕

 按电镜高倍

视野下所见目测评估,0级:间质间无白细胞浸润;Ⅰ级:间质间有极少量白细胞浸润;Ⅱ级:间质间有少量白细胞浸润;Ⅲ级:间质间有大量白细胞浸润。

1TNF畅5 -αTNF单抗均由广东中山生物科技有限公司生产-α表达强度染色结果评价标准

〔6〕

 SP试剂盒及抗

中TNF-α染色为细胞膜和细胞质着色,而细胞核不着色。心肌细胞

。按照染色的强度分为:①强阳性(处)呈棕黄色:②阳性(触)呈黄色;③弱阳性(+)呈浅黄色:④阴性(-)不着色。1畅6 统计方法 采用非参数统计方法的Ridit分析。2 结 果

2畅1 电镜下观察心肌损害程度对比结果 术后脓毒症组大鼠一般情况逐渐恶化,表现为嗜睡、精神萎靡、活动减少、刺激反应低、寒战甚至腹泻、竖毛、呼吸急促,剖腹探查见恶臭、血性腹水、盲肠结扎穿刺处肿胀颜色变黑,粘连并出现坏疽,小肠肠管扩张充血、肠胀气,肝、肾充血水肿;提示造模成功。对照组心肌病理切片电镜下观察见心肌纤维束形态结构正常,排列整齐,闰盘显示清晰,所见心肌细胞结构无异常,心肌间质未见充血、水肿,无炎性细胞,Rone病理分级均为0级:无病损。脓毒症组可见心肌纤维广泛的断裂、纤维束结构排列紊乱,可见心肌细胞肿胀、空泡变性、皱缩;心肌间质充血、水肿,大量炎症细胞浸润。脓毒症组心肌Rone病理分级(心肌损伤程度Ⅱ级4只、Ⅲ级10只、Ⅳ级6只)及白细胞浸润程度(Ⅱ级2只,Ⅲ级18只)均明显高于对照组(均为0级20只)(P=0畅00720、0畅00012)。

2畅2 TNF-α的表达强度免疫组化染色结果 脓毒症组TNF-α表达强度(触6只、处14只)明显强于对照组(-19只,+1只)(P=0畅0029)。

2畅3 脓毒症组心肌中TNF-α表达的强度与病理分级及白细胞浸润程度的关系 病理Ⅳ级,TNF-α表达呈处,白细胞浸润程度为Ⅲ级>病理Ⅲ级,TNF-α表达呈触~处,白细胞浸润程度为

现为可逆的动力学障碍,即血压在正常范围内出现心肌收缩功能抑制,这常演变为难治性休克的前兆,心肌损害发生的越早,病情就越重,病死率也越高;脓毒症休克时出现的心肌损害称为晚发型(即低血流动力期型),易控制,预后较早发型好〔7〕

脓毒症发生心肌损害的概率非常高,临床一旦怀疑脓毒症,应

及早采取有效措施预防或减轻心肌损害。

目前研究认为炎症反应在脓毒症心肌损害的发生机制中占主导地位

〔8〕

。脓毒症主要由革兰阴性菌细胞壁脂多糖

(LPS)进入血液导致,LPS黏附于单核-巨噬细胞等免疫细胞的表面,与细胞膜上的TLR4-MD2/CD14复合体结合,结合体将LPS释放

承载的信号传入心肌细胞内〔9〕

。心肌组织产生炎症细胞因子用来抵抗致病物质的侵

,从而引起TNF-α等炎症介质袭,如果产生过量,反而会加重脓毒症患者的心肌损害〔10〕

。目

前普遍认为心肌组织及循环中产生的炎症细胞因子在脓毒症的心肌损害病理变化过程中起关键作用,尤其体现在早发型心肌损害中

〔11〕

切定论TNF,可能与下述两种因素相关-α在脓毒症心肌损害中的作用机制:①趋化并激活白细胞

,目前为止尚无确

〔12〕

TNF化学物质导致组织损害-α作为一种炎症因子可引起白细胞趋化,TNF-α首先作用于损害部位的血管内、集聚,同时释放皮细胞,将其表面的白细胞黏附趋化因子激活,这种因子会诱导白细胞聚集并黏附于损伤的心肌细胞上,白细胞释放出一系列化学物质从而导致心肌组织损伤。②通过坏死方式来诱导心肌细胞凋亡。研究

〔13〕

证实人心肌细胞的表面拥有可表达

TNFTNF的特异性受体TNF-R1、R2的受体蛋白和mRNA,说明效应-,α从而抑制心肌收缩功能或直接损害心肌组织可直接与心肌细胞膜的特异性受体结合而发挥其抑制。

本研究印证了脓毒症心肌损害确与TNF-α有密切的关系,呈正相关性,也就是说心肌损害越重,心肌中TNF-α表达越强,反之亦然。TNF-α的表达与炎性反应密切相关。TNF-α介导的炎症反应是导致脓毒症心肌损害的重要机制之一。及早干预阻断炎症传导的信号通路对治疗脓毒症心肌损害及降低病死率至关重要。4 参考文献

1 苏翠靖,马志宇,马 涛,等畅p38丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对脓

毒症早期大鼠心肌中炎性因子和细胞凋亡蛋白表达的影响〔J〕.中国医科大学学报,2012;41(5):422-6畅

2 陈 辉,马 超,张育先,等畅脂联素通过激活p38MAPK信号通路

?3684?

调节大鼠肝星状细胞MMP-13及TIMP-1表达〔J〕.首都医科大学学报,2010;31(3):33-4畅

3 KochL,FritzschingB,FrommholdD,etal畅Effectofpenehyclidinehydro-

chlorideonexpressionsofMAPKinmicewithCLP-inducedacutelung4 GentileG,MelesE,CarboneC,etal畅Unusualcaseofmyocardialinjury

74(1):40-3.

inducedbyecherichiacolisepsis〔J〕.MonaldiArchChestDis,2010;injury〔J〕.MolBiolRep,2010;16(9):154-7畅

8 McDonoughKH,GangCH,SpitzerJJ畅Depressedfunctionofisolated

241-51畅

heartsfromhyperdynamicsepticrats〔J〕.CircShock,2008;12(4):

9 庄海舟,沈潞华畅脓毒症时心肌损伤发生机制研究进展〔J〕.实用医

学杂志,2008;24(24):4313-5畅

10 金国强,吴 丹,符 翔畅辛伐他汀对脓毒症大鼠心肌保护作用的

实验研究〔J〕.南昌大学学报(医学版),2011;51(6):13-6畅11 海 舟,沈潞华畅脓毒症时心肌损伤发生机制研究进展〔J〕.实用

医学杂志,2008;24(24):4313-5畅

12 冼海涛,阮少川,蔡立华,等畅辛伐他汀对内毒素所致脓毒症大鼠

肾组织NF、NO表达的影响〔J〕.广东医学院学报,2010;28(1):14-7畅

13 FujitaM,IkegameS,HaradaE,etal.TNFreceptor1and2contribute

indifferentwaystoresistancetoLegionellapneumophila-inducedmor-talityinmice〔J〕.Cytokine,2008;44(2):298-303.

〔2013-06-13收稿 2013-10-10修回〕

5 WangYX,XuXY,RuanCP,etal畅Activationandclinicalsignificanceof

Res,2010;161(1):119-25畅

p38MAPKsignalingpathwayinpatientswithseveretrauma〔J〕.Surg

6 乐 胜,张舜玲,刘志红畅p38丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对脓毒症

鼠心肌损伤的保护作用〔J〕.中国医药,2009;4(5):324-6畅

7 O'SullivanAW,WangJH,RedmondHP,etal畅NF-kappaandp38MAPK

inhibitionimprovesurvivalinendtoxinshockandinacercalligationandRes,2009;152(1):46-53畅

puncturemodelofsepsisincombinationwithantibiotictherapy〔J〕.Surg

(编辑 赵慧玲)

鹿茸多肽对大鼠乳腺癌骨转移模型肿瘤生长及破骨细胞的影响

杨吉利 景年财 郭环宇 孙守坤 王 军 杨明权 张 越 (吉林省肿瘤医院,吉林 长春 130012)

  〔摘 要〕 目的 探讨鹿茸多肽对乳腺癌骨转移大鼠模型肿瘤生长及破骨细胞的影响。方法 40只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、唑来膦酸组和鹿茸多肽组,每组10只。假手术组在大鼠胫骨内注射生理盐水,其他三组通过胫骨内注射乳腺癌细胞(MRMT-1)建立乳腺癌骨转移模型,各组分别给予对应药物,模型组造模后不予处理,给药20d。在造模后第21天处死大鼠取材,测定瘤体的体积,采用TRAP法染色计数瘤体内破骨细胞数量,测定骨密度(BMD)和矿物质含量。结果 与模型对照组相比,鹿茸多肽组骨矿物质含量升高,破骨细胞减少,肿瘤体积明显减小(均P<0畅05)。结论 鹿茸多肽能抑制破骨细胞的过度激活,并可以减少骨吸收和保护骨质,维持成骨作用和破骨作用的平衡,从而抑制肿瘤的生长。

〔关键词〕 乳腺癌;中药;鹿茸多肽;骨转移

〔中图分类号〕 R737  〔文献标识码〕 A  〔文章编号〕 1005-9202(2014)13-3684-02;doi:10畅3969/j畅issn畅1005-9202畅2014畅13畅081

  乳腺癌是一种女性多发的恶性肿瘤,约有70%的乳腺癌患者发生骨转移,骨转移后所导致的并发症严重影响患者的预后和生活质量

〔1〕

1 材料与方法

1畅1 试剂与材料 鹿茸多肽是从梅花鹿茸中提取的多肽类生物活性物质,白色冻干粉,由长春中医药大学研究中心提供。注射用唑来膦酸(择泰),购自瑞士诺华公司(批号为:S0353)。大鼠乳腺癌细胞(MRMT-1)由吉林省肿瘤研究所提供。SPF级重约140~150g的雌性SD大鼠40只,购自长春生物制品研究所。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色试剂盒为SIGMA公司产品。

1畅2 细胞培养 造模前复苏MRMT-1细胞并传代扩大培养,配制成浓度为1×10/ml的细胞悬液,置于冰盒上备用。1畅3 动物造模 将40只雌性SD大鼠按照体重分层,随机分成四组:模型对照组、唑来膦酸组、鹿茸多肽组和假手术组,每组10只。动物模型通过大鼠胫骨注射MRMT-1细胞(假手术组注射生理盐水)实现

〔8〕6

。传统中医理论认为,骨骼病变的发生发展与肾

〔2~4〕

的虚损关系密切。有研究发现,补肾壮骨中药对大鼠乳腺癌骨转移具有一定疗效

。鹿茸为补肾壮阳、强筋健骨的重要药

〔5〕

物,临床研究发现鹿茸可以促进骨折愈合和抗肿瘤方面具有明显作用,且对骨质疏松也有治疗作用性

〔6〕

。另有研究证实,鹿茸

治疗骨质疏松机制为抑制破骨细胞数量,提高成骨细胞的活

。因此,设想鹿茸提取物鹿茸多肽可能对恶性肿瘤骨转移

〔7〕

具有一定的效果。本研究旨在探讨中药鹿茸提取物鹿茸多

肽对乳腺癌骨转移大鼠模型破骨细胞的影响,为鹿茸多肽在肿瘤骨转移方面的研究应用提供证据。

基金项目:吉林省中医药管理局中医药科技项目(No.2012-161)1 松原市中医院

通讯作者:张 越(1965-),男,硕士生导师,主任医师,主要从事中西医

结合肿瘤内科疾病诊治研究。

第一作者:杨吉利(1979-),男,主治医师,主要从事中西医结合肿瘤内

科疾病诊治研究。

,腹腔注射戊巴比妥钠溶液(0畅4%)

将大鼠麻醉,将右后肢经剪毛和消毒后,切开皮肤和肌肉,暴露左胫骨靠近干骺端骨面,而后在骨皮质钻孔,用微量注射器将癌细胞悬液(3μl,细胞数约为3×10)注入胫骨髓腔内。针孔用骨蜡密封后缝合皮肤。假手术组注入同体积生理盐水。1畅4 动物给药 造模当天为0d,造模后第1天开始给药,每

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肿瘤坏死因子-α在脓毒症大鼠心肌损害中的表达及作用机制作者:

作者单位:

刊名:

英文刊名:

年,卷(期):张文伟, 魏威, 曹红, 金辉张文伟,曹红,金辉(辽宁医学院附属第三医院心血管内科,辽宁 锦州,121000), 魏威(南方医科大学生物技术学院)中国老年学杂志Chinese Journal of Gerontology2014(13)

本文链接:http://wendang.chazidian.com/Periodical_zglnxzz201413081.aspx

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