腔镜及开腹阑尾切除术对阑尾穿孔腹膜炎脓毒症患儿血清IL-6、TNF-α及IL-10的影响
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腔镜及开腹阑尾切除术对阑尾穿孔腹膜炎脓毒症患儿血清IL-6、TNF-α及IL-10的影响
中华小儿外科杂志2014年6月第35卷第6期ChinJPediatrSurg,June2014,Vot.35,No.6457
临床研究
腔镜及开腹阑尾切除术对阑尾穿孔腹膜炎脓毒症患儿血清IL一6、TNF一仪及IL一10的影响周诗琼蒋鲲梅红叶国刚段栩飞
【摘要】目的探讨腹腔镜(LA)及开腹(OA)手术对阑尾穿孔、脓毒症患儿血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子一a(TNF-a)及白细胞介素10(IL,1())的影响。方法采用双抗体夹心ELISA法测定腹腔镜手术组(LA组)36例及开腹手术组(OA组)31例OA患儿术前及术后不同时间点血清中1L-6、TNF-a及IL-10的含量,比较血清中IL一6、TNF—Q及IL一10水平在LA组及OA组的差异。结果LA组术前血清IL-6、TNF—Q及]L-10水平为(148.3±19.())pg/ml、(81.4±10.7)pg/ml、(156.9±39.5)pg/ml,术后第1、3、7天血清1L-6水平为(172.7±23.2)pg/ml、(8().1±11.3)pg/ml、(23.9±4.9)pg/ml,TNF-a水平为(97.3±12.7)pg/ml、(52.4±9.3)pg/ml、(23.7±6.8)pg/ml,IL-IO水平为(215,3±57.9)pg/ml、(145.3±32.6)pg/ml、(47.8±8.4)pg/ml;OA组术前血清IL-6、TNF-a及IL一10水平为(144.2±22.1)pg/ml、(80.5±8.9)pg/ml、(156.8±42.3)pg/ml,术后第1、3、7天血清IL6水平为(184.5±26.8)pg/ml、(135.3±19.2)pg/ml、(65.2±16.4)pg/ml,TNF-a水平为(102.8±11.4)pg/ml、(84.5±11.7)pg/ml、(48.3±9.5)pg/ml,IL-10水平为(179.1±48.9)pg/ml、(114.4±26.7)pg/ml、(52.7±12.3)pg/ml。术前两组患儿血清ID6、TNF-a及IL-10水平差异无统计学意义(P>().05);LA组术后第1、3、7天血清II。一6、TN卜a水平均较OA组低且差异有统计学意义(P<0.05);LA组术后第1、3天血清IL,1()水平均较OA组高且差异有统计学意义(P<0.1)5),术后第7天LA组较OA组低,但两者比较差异无统计学意义(P>0.05);LA组与OA组比较,血清IL-6、TNF-a水平术后升高缓慢,幅度小,下降迅速,血清1L-10水平升高迅速,幅度大,下降迅速。结论LA可减少阑尾穿孑L腹膜炎、脓毒症患儿血清中炎性因子IL-6及TN卜a水平,增加血清中抗炎性因子IL-10水平,LA能减轻机体的应激反应、炎性反应,增强机体抗炎反应。
【关键词】阑尾切除术;腹腔镜检查;白细胞介素类;肿瘤坏死因子
Effectsofserumlevelsofinterleukin-6,tumornecrosisfactoralphaandinterleukin-10betweenlaparoscopicandopenappendectomyinchildrenwithperitonitisandsepsissecondarytoappendicitisperforationZhouShiqiong,JiangKun,MeiHong,YeGuogang,D眦行Xu知i.DepartmentofGastroenterology,眠hanMedical&HealthCenterforWomen&Children,W讪an430016,ChinaCorrespondingauthor:JiangKun,Emaif:12162543574@gq.co*r/
[Abstract]ObjectiveToevaluatetheeffectsoflaparoscopicappendectomy(LA)andopenappendectomy(0A)onserum1evelsofpro-inflammatorycytokineinterleukin-6(ID6),tumornecrosisfactoralpha(TNF-a)andanti—inflammatorycytokineinterleukin-10(IL-10)inchildrenwithperitonitisandsepsissecondarytoappendicitisperforation.MethodsAtotalof67patientswererecruitedtoundergoeitherLA(n=36)orOA(n=31).TheserumlevelsofIL一6,TNF-aandIL-10weremeasuredwithenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)atpreoperationanddifferenttimepointspostoperation.AndthedifferencesofserumlevelsofIL,-6,TNF-aandIL一10inlaparoscopicgroupandopengroup.ResultsIntheLAgroup,thepreoperativeandpost—operativeDay1,3and7serumlevelsofID6,TNF-aandILl()were(148.3±19.()),(81.4±10.7)&(156.9±39.5)pg/ml,(172.7±23.2),(8().1±11.3)&(23.9±4.9)pg/ml,(97.3±12.7),(52.4±9.3)&(23.7±6.8)pg/mland(215.3±57.9),(145.3±32.6)8L(47.8±8.4)pg/ml;FortheOAgroup,(144.2±22.1),(80.5±8.9)&(156.8±42.3)pg/ml,(184.5±26.8),(135.3±19.2)&(65.2±16.4)pg/ml,(102.8±11.4),(84.5±11.7)&(48.3±9.5)pg/mland(179.1±48.9),
DOI:l{I.376{}/cma.j.issn.02533{}06.2014.()6.()14
作者单位:430016武汉市妇女儿童医疗保健中心消化内科(周诗琼、梅红),呼吸内科(蒋鲲),普外科(叶国刚、段栩飞)
通信作者:蒋鲲,Email:12162543574@qq.corn万方数据
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(114.4±26.7)&(52.7±12.3)pg/mlrespectively.Theirpreoperativelevelswerenotdifferentbetweentwogroups(P>0.05).TheserumlevelsofID6andTNF_aatDay1,3and7post-operationinthelaparoscopicgroupwerelowerthanthoseintheopengroup(P<O.05).TheserumlevelsofIL-10atDay1and3post-operationinthelaparoscopicgroupwerehigherthanthoseintheopengroup(P<0.05).AtDay7,theserumlevelsofIL-10inthelaparoscopicgroupwerelowerthanthoseintheopengroup.Howeverthedifferencehadnostatisticalsignificance(P>0.05).TherisesofIL-6andTNF-Qinthelaparoscopicgroupwereremarkablylessandslowlythanthatthoseintheopengroup.Andthedeclineweremorerapidinthelaparoscopicgroup,theriseofIL-10wasmarkedwhileitsdeclinewasmorerapidinthelaparoscopicgroupthanthoseintheopengroup.ConclusionsLAcandecreasetheserumlevelsofpro-inflammatorycytokinesIL-6andTNF!aandincreasetheserumlevelsofanti—inflammatorycytokineIDl0.Anditcanreducestressandinflammatoryresponsesandenhanceanti-inflammatoryresponseforchildrenwithperitonitisandsepsissecondarytoappendicitisperforation.
[Keywords]Appendectomy;Laparoscopy;Interleukins;Tumornecrosisfactor随着腹腔镜技术和器械的不断完善,腹腔镜手书进行操作。术的适应范围也在不断地拓宽,已广泛用于多种感三、统计学处理染性腹部外科疾病的治疗,如急性胆囊炎、急性阑尾应用SPSS17.0统计软件对结果进行统计学处炎、消化道穿孔等。但目前,腹膜炎时腹腔镜及C02理,数据结果以均数±标准差表示;两组间计量资料气腹是否适用尚有争议。穿孔性阑尾炎是儿童急腹比较采用t检验或秩和检验,计数资料采用72检验,症中常见病之一,常伴有重症腹膜炎、脓毒血症。本P<0.05为差异有统计学意义。研究通过对阑尾穿孔腹膜炎、脓毒症患儿手术前、后
不同时间点血清中促炎性细胞因子白细胞介素6结果(IL-6)、肿瘤坏死因子一a(TNF-a)及抗炎性细胞因一、两组患儿手术前、后血清IL_6水平的变化子白细胞介素lO(IL-10)的变化来了解腹腔镜和开(表1)腹手术对腹膜炎、脓毒症患儿应激反应及炎性反应术前两组患儿血清IL-6水平差异无统计学意的差异。义(P>().05)。LA组术后第1、3、7天血清IL一6水
资料与方法平均较OA组低且差异有统计学意义(P<0.05)。
两组患儿术后第1天血清IL-6水平均升高,与术前
一、研究对象比较,差异有统计学意义(P<0.05),随后逐渐下取我院2010年1月至2012年12月普通外科降。LA组IL-6水平术后第3天与术前比较,差异病房经手术确诊穿孑L性阑尾炎、腹膜炎伴脓毒症患有统计学意义(P<o.05);OA组术后第3天与术前儿67例为研究组,所有患儿均经病理检查证实。腹
腔镜手术组(LA组)36例,其中女15例,男21例;比较,差异无统计学意义(P>0.05)。LA组与OA年龄2.8~14岁;体重15~42组比较,IL-6水平升高缓慢但下降较快。
kg。开腹手术组(OA
组)31例,其中女12例,男19例;年龄2.5~16岁;表1两组患儿手术前、后IL-6水平的变化b±5,pg/m1)体重13~48kg。所有患儿近期均无感染和慢性疾
病病史,且排除免疫相关性疾病,两组患儿性别、年
龄、体重、发病时间、麻醉方式、手术时间、麻醉时间
差异均无统计学意义(P均>0.05)。
二、研究方法注:与术前比较,aP<0.051.标本采集所有研究对象入院后术前2h、术
后第1、3、7天均取静脉血2ml,以1500转/min,离二、两组患儿手术前后血清TNF-a水平的变化心10min(离心半径13.5cm),取血清置一20℃冰(表2)箱内保存待测。术前两组患儿血清TNF-a水平差异无统计学
2.细胞因子测定采用双抗体夹心ELISA法意义(P>0.05),LA组术后第1、3、7天TNF-a水测定血清中IL-6、TNF_a及IL_10的含量,试剂盒平均较OA组低且差异有统计学意义(P<0.05)。由深圳达科为生物技术有限公司提供。严格按说明两组患儿术后第1天血清TN卜a水平均升高,与术万方数据
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前比较差异有统计学意义(P<().05),随后下降。
LA组TNF_a水平术后第3天与术前比较,差异有
统计学意义(P<o.05);OA组术后第3天与术前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。LA组与OA组
比较,TNF.a水平升高缓慢但下降较快。
表2两组患儿手术前、后1I_.-6水平的变化(于±5,pg/m1)
注:与术前比较,6P<(】.05
三、两组患儿手术前后血清II,10水平的变化(表3)
术前两组患儿血清IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。LA组术后第1、3天血清IL-10水平均较OA组高且差异有统计学意义(P<0.05);
术后第7天LA组较OA组低,但两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。LA组血清IL-10水平在
术后第1、3天升高,术后第7天迅速下降,与术前比较,差异有统计学意义(P<0.05);OA组血清IL-10水平在术后第1天升高,术后第3天升高,术后第7天缓慢下降。
表3两组患儿手术前、后IL-6水平的变化(彳±5,pg/m1)
注:与术前比较,。P<().【)5
四、两组患儿血清IL_1()/TNF—a值的变化(表
4)
术前两组患儿血清IL-10/TNF—a值差异无统计学意义(P>0.05),LA组术后第1、3、7天IL-1()/TNF-a值均较OA组高且差异有统计学意义(P<
0.05)。LA组术后第1、3天与术前比较,比值有明显上升,且差异有统计学意义(P<o.05),但第7天时比值下降。OA组术后IL_10/TNF—a比值呈下降趋势,且术后第7天时与术前比较,差异已有统计学意义(P<0.05)。
讨
论
IL-6是组织损伤早期和敏感的标记物,其升高值与手术创伤及伴随的损害成正比,现在已经成为
万方数据
评价创伤应激反应严重程度的主要指标,Cuschieri
等[1]研究显示,血清中IL-6水平在严重创伤中均有不同程度升高,其可作为创伤后预测预后的生物指
标。本研究中术前两组患儿血清IL-6水平差异无统计学意义(P>o.()5),LA组术后第1、3、7天血清IL一6水平均较OA组低且差异有统计学意义(P<
0.05),表明LA组与OA组比较,患儿术后应激反应小,组织损害小。Luk等[2]用小鼠实验也证实,腹腔镜手术组血清和肠黏膜中IL-6水平均较开腹组
低,与本组结果类似。张建萍等[3]报道妇科手术后
24
h和48h患儿血清IL-6升高的水平腹腔镜手术
组显著低于开腹组(P<0.01),表明腹腔镜手术引
起的机体应激反应轻,免疫系统得到较好的保护。
C02气腹减低血清IL-6水平的可能机制为降5]:①
C02具有抑菌或杀菌作用,可使大肠杆菌和葡萄球菌生长变慢;②C02气腹使腹膜细胞酸化,从而抑制巨噬细胞释放多种炎性介质和炎性细胞因子的释放;③C02气腹对巨噬细胞超氧阴离子释放及线粒体功能具有短暂可逆性抑制作用,从而减轻炎性反
应。
表4两组患儿血清IL-10/TNF-a值的变化(彳±s)
注:与术前比较,6P<().【)5
本研究中,LA组与OA组比较,术后血清IL-6水平升高缓慢,但下降较快。LA组术后第3天IL-6
水平已下降,与术前比较,差异有统计学意义(P<
0.05);而0A组术后第7天IL-6水平与术前比较,差异有统计学意义(Pd0.05)。表明LA和OA都
可引起患儿术后应激反应,但LA组术后应激反应相对小,术后应激反应消失快。Masoomi等[6]回顾
分析比较了LA组与OA组阑尾穿孔腹膜炎患儿住院时间及肠功能恢复时间,发现LA组较OA组住院时间短、肠功能恢复快(P<0.01)。本实验结果对上述发现从理论上进行了解释。
TNF—a是机体受到有害刺激后最初分泌并起关键始动作用的促炎性细胞因子,其核心作用是在炎症反应中激活细胞因子级联反应,直接反应了炎症反应的强烈程度[73;TNF_a可激活各种免疫细
胞,增强自然杀伤(NK)细胞活性,激活、诱导巨噬细胞杀肿瘤的活性,激活多形核白细胞,早期检测体内
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2011,!型:!!,塑!:!
血清TNF-口有助于判断重症腹腔炎症的严重程
度[8|。我们的结果显示,术前两组患儿血清TNF_a
水平差异无统计学意义(P>o.05);LA组术后第1、3、7天血清TNF_a水平均较OA组低且差异有统计学意义(P<0.05);LA组与OA组比较,术后血清TNF-u水平升高缓慢,但下降较快;LA组术
后第3天TNF-a水平已下降,与术前比较,差异有统计学意义(P<0.05),而OA组术后第7天TNF-仅水平与术前比较差异有统计学意义(P<
0.05)。腹腔镜手术能减轻炎症反应,C02气腹被认为是其中的重要原因。Montalto等[9]用盲肠结扎穿刺法复制大鼠重症腹腔炎症模型,发现腹腔镜组肝脏和肺组织中TNF.Q蛋白较开腹组明显减少,认为CO:气腹通过促炎细胞因子表达的降低减少炎症级
联反应,阻止败血症的发生。Hanly等[10]将LPS注
人大鼠腹腔,建立腹内感染动物模型,比较C02气腹
组、He气腹组及开腹手术组,发现C02气腹组血清中TNF.a水平为He气腹组1/3,为开腹手术组
1/6,认为C02气腹可通过调高血清中IL-IO水平下调TNF.d水平,从而降低死亡率。
IL-10是Th2细胞产生的强效抗炎细胞因子,
可从源头上抑制IL一6、TNF_口等促炎性细胞因子的释放,从而阻止脓毒症病情持续恶化和远处脏器损伤[11]。本研究结果显示,LA组术后第1、3天血清IL-IO水平均较OA组高且差异有统计学意义(P<0.05);LA组术后第1、3天血清IL-IO水平升高幅度和绝对值均较OA组高。提示C02气腹能通过增
加抗炎细胞因子对抗炎性细胞因子,从而减少炎性
反应。Hanly等[12]模拟气腹条件下探讨腹膜酸化
对炎症因子的影响,结果显示,炎症条件下腹膜因气腹酸化,导致1I.-10的释放显著增加(P<0.015),IFN一丫的释放明显减少,认为气腹条件下腹膜酸化
能减少炎症条件下的炎症应答,减轻脓毒血症术后
的炎症反应。
在本研究中我们还发现,术后第1、3天,LA组血清IL-IO水平较OA组高且差异有统计学意义(P
<0.05),但在第7天,LA组血清IL-10水平却较
OA组低。分析其原因,我们认为可能与OA组术后腹腔残余炎症有关,由于腹腔残余细菌或毒素不断刺激机体免疫功能,使Th2细胞持续分泌IL-IO,
致其血清水平升高。
有研究报道,IL-10主要参与减轻炎症肝损伤,
延缓肝再生反应,通过减少胶原形成及胶原酶来减
低TNF-a水平,脓毒症时适量抗炎递质释放能够抑
万方数据
制炎症反应,增强机体抗炎反应[t3|。IL-10作为一
种有效的抗炎物质,一方面能抑制促炎性细胞因子
(IL一6、TNF-a等)的过度表达,另一方面能控制由促
炎性细胞因子引发的、过度的炎症瀑布反应对机体的损害,但其水平若持续升高,则可抑制机体免疫功能,可能加重病情。因此,IL厂10/TNF—a值维持在一定升高程度,有利于机体抗炎能力[14I,Goncalves
等[153的研究显示,正常无感染成人I卜1o/TNF-a值维持在1.3~1.9。我们的研究结果显示,I。A组术
后第1、3、7天ILlo/TNF~Q值(1.99~2.59)较OA
组(1.2~1.99)高且差异有统计学意义(P<0.05),
表明LA组术后第1、3、7天患儿机体均有较强抗炎能力;OA组术后第3天IL_10/TNF_q值正常,术后
第7天IL-10/TNF—a值较正常值偏低,提示OA组患儿术后第3天后机体抗炎能力较差。LA组IL-10/TNF-a值较OA组升高迅速,下降缓慢,表明腹腔镜手术能抑制阑尾穿孔患儿术后炎症反应,增
强患儿机体抗炎反应,提示C02气腹有利于脓毒症患儿机体对细菌及毒素的清除,更好地保护机体的
正常免疫功能。王刚等[16]的研究显示,在细菌性腹
膜炎疾病中,C02气腹不会造成炎症扩散,C02气腹
在毒血症腹膜炎时可使炎症趋于局限,减少细菌播
散。Grabowski等[17]将J774株鼠类巨噬细胞在
pH
6.o和pH7.4的环境下培养3h,加入荧光标记
的细菌微粒,用荧光计分析巨噬细胞的吞噬作用,发现酸性条件下培养的巨噬细胞的吞噬能力较对照组
明显增强,认为炎症条件下腹腔镜手术气腹灌注有利于机体对细菌的清除,降低术后感染的发生率。Chatzimavroudis等¨8]用盲肠结扎穿刺法复制兔重
症腹腔炎症模型,比较白细胞计数、C反应蛋白及降
钙素等指标,结果显示常规气腹压力组较其他组能明显减轻毒素水平,提高生存率,认为重症腹腔炎症应用C0:气腹有利于对重症炎症的抑制。
有研究显示,CO:气腹的压力、流量及手术时间长短等气腹相关因素对炎性因子有一定影响。杜江等[19]通过研究不同的CO:气腹压力、气流量以及时间对大鼠腹腔炎性因子的影响,发现腹腔炎性反应与CO。气流量及时间有关,与CO。气腹压力无关。但Schietroma等[20J通过比较6~8mmHg和12~
14
mmHg两组不同c02气腹压力对患儿术后炎性
因子的影响,发现6~8mmHg的CO:气腹压力能减少患儿术后炎性反应及避免患儿出现免疫抑制。本研究中LA组患儿术中C()2气腹的压力、流量、手术时间及麻醉时间对术后炎性因子的影响,有待于
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我们更深入的研究。
总之,LA能减少阑尾穿孔腹膜炎、脓毒症患儿
血清中炎性因子IL一6及TNF—Q水平,增加血清中抗炎性因子II,1()水平,减轻对患儿机体的应激反应、炎性反应,增强机体抗炎反应。
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