翻新时间:2015-07-31
发掘与筛选食品中沙门氏菌分子检测靶点
关键词:沙门氏菌 PCR技术 靶点 筛选 评价
沙门氏菌是一类在自然界中存在数量较大的致病性细菌,根据国际上的统计,因食用被沙门氏菌造成食物中毒的情况非常多,占据了食物中毒中的首位。并且因沙门氏菌能够给人们带来两大类疾病,其中包括伤寒类疾病和急性胃肠道炎症等。一般情况下,在肉类食品、奶制品以及蛋制品中出现沙门氏菌污染的情况较多,而这些均是人们日常生活中食用较多的食品种类,因此,必须要加大对食品致病菌安全检测工作的力度,寻找更加敏感和准确的沙门氏菌检测剂。
1 材料及方法
1.1 实验材料
1.3 引物特异性的评价方法
从44株沙门氏菌和22株非沙门氏菌中提取的DNA靶点进行实验,利用PCR扩增仪建立反应体系,并利用各组引物对靶点进行PCR的扩增,同时将对照引物进行反应,以此作为对照数据。
1.4 引物灵敏度的评价方法
在实验过程中,对特异性较好的引物进行灵敏度的检测实验,将其与纯细菌培养物进行反应,并以对照组引物进行对比。其具体方法为:从沙门氏菌的基因组中踢出去一定的基因组,并将其进行10倍的稀释,没进行1倍稀释剂提取5的样品进行PCR的扩增处理。而对于灵敏度的评价则是将纯沙门氏菌培养物进行为期6h的培养,然后同样进行10倍的稀释,并分别选择稀释6、7、8倍时的样品,将其提取稀释后的样品各5进行PCR扩增。
1.5 污染食品样本的检验方法
2 结果
经过对27对引物检测性的分析,发现其中检测性最好的是FS23,采用这一对引物对菌株进行PCR扩增,在44株沙门氏菌中能够扩增出492的特异性片段,而在其余非沙门氏菌株实验中无法扩增特异性片段,以此作为引物检测沙门氏菌的林敏性达到了11.9,对于细菌纯培养物的灵敏度达到了4.9。对被沙门氏菌污染的牛奶进行检测,当其菌落浓度在100时,只需要5h时的时间即可以检测出沙门氏菌。
3 讨论
PCR技术是一种能够进行靶点检测和引物敏感性、特异性检测的重要技术,其在现代食品安全检测工作中的应用十分广泛。而对于引物来说,其能够被应用在PCR检测过程中,其最大的关键在于引物本身的特异性,因此在本次实验当中首先对相关引物进行了筛选,发现其中FS23的特异性最佳,并以其为中心进行了后续研究,了解了这种引物在对沙门氏菌检测上的特异性和灵敏性。
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