白僵菌菌株的ITS序列鉴定

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翻新时间：2023-08-15

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白僵菌菌株的ITS序列鉴定

【摘要】球孢白僵菌是世界范围内害虫生物防治中推广和应用最为成功的昆虫病原真菌之一。我国东北地区，尤其是吉林省多年以来一直利用白僵菌进行玉米螟防治，取得良好的经济效益、生态效益和社会效益。利用分子生物学技术，通过白僵菌ITS序列快速进行种的鉴定，明确菌株的分类地位，为进一步的研究提供准确的研究材料。研究结果表明，8个白僵菌菌株都为球孢白僵菌菌株，其同源性达到99%。

【关键词】球孢白僵菌;ITS分析;分子鉴定

本文以研究室保存的8株白僵菌菌株为研究材料，通过对其ITS序列的鉴定，明确菌株的遗传背景，找出不同菌株间的遗传差异，为进一步的研究提供准确可靠的研究材料。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

随机选取8株于本实验室保存的球孢白僵菌菌株进行实验。其编号分别为Bb01-Bb08。

1.3 球孢白僵菌的DNA提取

参照朱衡等[9]的方法提取菌体总DNA，以0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。

1.4 ITS序列分析

扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，送上海生工生物工程有限公司测序。测序结果经DNAman软件进行多序列比对并建立系统同源树。

2 结果与分析

2.1 实验结果

所提取DNA均在加样孔附近呈现一致密亮带，基本无降解。所提DNA较好，可以用于扩增反应。以提取的白僵菌菌株的DNA为模板，利用上下游引物进行扩增后，对其PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，结果如图1示PCR条带与预期目的条带（600bp左右）大小吻合。

图1 ITS-PCR凝胶电泳图

2.2 ITS序列分析

利用DANMAN的多序列比对，对8个供试菌株的ITS片段进行比对拼接，经NCBI序列比对，证实这8个菌株都为球孢白僵菌菌株。

根据聚类分析构建系统同源树（图2）。结果表明8株球孢白僵菌菌株的ITS序列同源性达到99%。除Bb0

1、Bb08存在较小差异，其他6株球孢白僵菌的ITS序列完全一致。

图2 8株菌株球孢白僵菌株ITS序列的系统同源树

3 讨论

一些球孢白僵菌菌株在形态、生物学等方面非常相似，如何对这些菌株进行鉴定和区分，是检疫实践中面临的首要问题。随着分子生物学技术的发展，尤其是PCR技术的发展，在球孢白僵菌的分子鉴定方面发挥着越来越重要的作用。选择合适的靶序列至关重要。

【参考文献】

[3]Feng MG， Poprawski T J， et al. Production of formulation （下转第248页）（上接第97页）and application of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana for insect control：current status[J]. Biocontrol Science and Technology，1994，4：31-34.

[6]谭志琼，张雯龙，等.寄生椰心叶甲绿僵菌的培养特性及ITS序列鉴定[J].西南大学学报：自然科学版，2008，32

（8）：33-35.

[9]朱衡，瞿峰.利用氯化苄提取适于分子生物学分析的真菌DNA[J].真菌学报， 1994，13

（1）：34-40.