长叶点地梅叶片愈伤组织诱导影响因子分析

关键词：长叶点地梅；愈伤组织诱导；影响因子

Key words： Androsace longifolia； callus induction； impact factor

愈伤组织是指在培养或自然条件下，植物细胞脱分化不断增殖所产生的主要由薄壁细胞构成的组织。其诱导成功与否影响到组织培养后续的研究。研究表明，愈伤组织的形成除了与创伤有关外，还主要与植物内源或外源的激素有关[13]。因此，在愈伤组织诱导的过程中，植物生长调节剂的种类和浓度最为重要，研究最完善。然而，影响外植体愈伤诱导的因素诸多且少有系统分析，尤其忽略了大量元素、琼脂浓度、碳源及暗处理等条件在愈伤诱导过程中的影响。本研究探讨植物生长调节剂、大量元素 、琼脂浓度、碳源及暗处理对长叶点地梅叶片诱导愈伤组织的影响，以期进一步完善长叶点地梅组培快繁技术体系。

1 材料和方法

1.1 材 料

长叶点地梅无菌实生苗。

2 结果与分析

大量元素是生物生长所需的必备元素，不同植物对大量元素含量的要求不同，大量元素对叶片诱导愈伤具有重要影响。试验结果表明，长叶点地梅叶片诱导愈伤的最适培养基为MS（图4）。随着大量元素浓度的降低，叶片愈伤组织的诱导率呈下降趋势。在MS培养基上诱导率达95%，产生的愈伤最多，愈伤组织呈淡绿色，质量大于0.6 g，长势最好；1/4MS培养基上的叶片愈伤组织诱导率仅为50%，愈伤组织质量小于0.3 g，长势最差。

2.3 碳源、琼脂、暗处理对叶片诱导愈伤的影响

培养基中的琼脂除有固化作用外，也会吸附外植体的代谢产物，因此不同浓度的琼脂对外植体的生长有不同程度的影响。结果（图5）表明：琼脂浓度对诱导率有较大的影响，愈伤组织诱导率在一定琼脂浓度内升高，当琼脂浓度达到8.0 g・L-1时，诱导率达到最大值95%。启动期不受琼脂浓度的影响，随着琼脂浓度变化，叶片愈伤的启动期均保持在13～15 d。形态指标上，当琼脂浓度为5.0 g・L-1时，培养基呈半固体状态，愈伤组织质地疏松，长势不佳。随着琼脂浓度逐渐增加，愈伤组织的长势越来越好，琼脂浓度为8.0 g・L-1时，愈伤组织呈浅绿色，长势最好。当琼脂浓度为9.0 g・L-1时，愈伤组织颜色加深，质地相对紧实，长势不佳。这表明琼脂在高浓度的条件下，培养基硬度加强，不利于外植体对营养物质的吸收。因此，长叶点地梅叶片诱导愈伤最佳琼脂浓度为8.0 g・L-1。

不同植物材料对碳源的吸收状况不同，因此对碳源种类的要求也不同。培养基上添加浓度均为3%的麦芽糖、葡萄糖，结果（图6）发现：蔗糖作为碳源时诱导的愈伤最佳，诱导率达90%，愈伤组织的生长状况最好，产生愈伤组织较多。诱导率最低的为葡萄糖，产生的愈伤较少。3种碳源的混合效果与单一碳源的作用效果相差不大。在各组合中，愈伤诱导效果最佳的是50%蔗糖与50%麦芽糖混合，诱导率为61.0%，比单一使用麦芽糖、葡萄糖时有较小程度的提高，但低于单独使用蔗糖时的诱导率，因此长叶点地梅愈伤组织诱导蔗糖为最佳碳源，不宜使用混合碳源。

3 结论与讨论

以上研究结果表明，生长调节剂、琼脂浓度及暗处理，不仅对长叶点地梅叶片诱导愈伤的数量有影响，而且也影响所诱导愈伤的质量。愈伤组织的质量是影响长叶点地梅再生的关键性因素，一般情况下，淡绿色疏松的愈伤组织质量较好，分化能力较强，而其他因子只对诱导率即愈伤组织的数量有较大的影响。本研究通过对生长调节剂、大量元素 、琼脂浓度、碳源及暗处理等因子影响长叶点地梅叶片诱导愈伤的的探索，为进一步完善长叶点地梅组培快繁体系奠定了基础。

参考文献：

[2] 李承花， 殷志琦， 黄晓君， 等. 点地梅的化学成分[J]. 中国天然药物， 2008， 6（2）： 123.

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