水中细菌总数测定方法的改进

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翻新时间：2023-08-07

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水中细菌总数测定方法的改进

【摘要】通过实验来比较水中细菌总数测定的三种培养方法，筛选出更灵敏的接种方法――双层培养法，该方法简便，实用性强，便于推广使用。

【关键词】水中细菌总数；测定；改进

0.前言

水是微生物广泛分布的天然环境，水中微生物种类及数量因水源不同而异。当水体受到污染时，水中微生物的数量可大量增加。但直接检查水中的各种病原微生物，方法较复杂，有的难度大。所以，在实际工作中经常以测定细菌总数来判断水的污染程度。细菌作为水体中主要的微生物类群，在表征水体污染程度等方面发挥着重要作用。但笔者发现测定细菌总数，在37℃培养24小时开始菌落计数，发现计数结果总是偏低。通过多次实验，认为从以下几方面加以改进，可以提高细菌检出率，减少不确定度。

1.材料与试剂

材料：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、恒温水浴箱、电热干燥箱、冰箱、灭菌三角瓶、灭菌的具塞三角瓶、灭菌平皿、灭菌吸管、调温电炉。

试剂：营养琼脂培养基、灭菌水。

2.原理

细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异氧菌密度的方法。因为细菌能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在。本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数，通过计数在一定的培养基平板上生长的菌落数，来获得水中细菌的总数。细菌总数是指lmL或1g检样中所含细菌菌落的总数，它反应了水样中活菌的数量。

3.实验方法

3.1水样的稀释

选择适宜的稀释度，以期在平皿上的菌落总数介于30～300之间。稀释方法如下：以无菌操作方法吸取10mL充分混匀的水样，注入盛有90mL灭菌水的三角烧瓶中，混匀制成1：10稀释液。吸取1：10的稀释液lmL注入盛有9mL灭菌水的三角烧瓶中，混匀制成1：100稀释液。按同法依次稀释成其他的稀释倍数。传统的混匀稀释液的方法是用吸管反复吹吸数次来完成的。而笔者采用的是振摇的方法，即在三角烧瓶中放入灭菌玻璃珠然后振摇稀释液，以使其充分混匀。而不必用吸管上吹下吸，这样即省时又省力。

3.2操作方法

（3）双层培养法首先制作营养琼脂平板作为底层培养基：平皿内加入适量营养琼脂，冷却凝固后备用；然后吸取不同稀释度水样1mL，注入上述平板，倾倒少量融化的营养琼脂作为上层培养基，转动平板使混合均匀，待水样渗透、琼脂凝固后翻转平板培养。其优点是：克服了倾注法和涂布法的各自缺点，综合了两者优点。

4.实验部分

三种方法检测结果如下

注：采样点为崔东河。

5.结果与分析

三种培养方法比较：双层培养法比涂布法容易，比倾注法灵敏，方法简便，实用性强，便于推广使用。细菌总数多寡反映水体有机物污染程度，检验意义极大。通过实验筛选出更灵敏的接种方法―双层培养法，优化稀释方法可以最大限度促进活菌生长，得到比较全面的菌落总数，真实反映水体状况，为水质评价提供可靠依据。 [科]