浅要猪链球菌9型钦州株的分离及其cps9H基因序列

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翻新时间：2023-03-30

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浅要猪链球菌9型钦州株的分离及其cps9H基因序列

摘要对临床疑似猪链球菌9型(SS

9)的病料进行实验室诊断。通过实验室检测结果证实,分离菌属于SS9,将其命名为QZ49;扩增其cps9H目的基因长为389 bp;与GenBank上国内外SS9毒株核苷酸同源性介于97.2 %~99.5 %之间。

关键词猪链球菌9型;cps9H基因;分离;序列分析

1材料与方法

1.1标准毒株及主要试剂 1.2引物 1.3细菌培养、纯培养及涂片镜检 1.4细菌的涂片镜检与DNA的抽提

取细菌纯培养物,涂片、革兰氏染色镜检。之后取液体培养物1.5 mL按传统DNA抽提方法抽提DNA,获得的DNA模板用于下一步操作。

1.5cps9H基因扩增 1.6cps9H基因序列分析

PCR阳性产物纯化后送宝生物工程(大连)有限公司测序。应用DNAStar软件将测序获得的SS9毒株cps9H基因序列截短并进行整理,与国内外已发表的SS9 cps9H基因序列进行核苷酸同源性分析,建立系统发育树。

2结果与分析

2.1细菌培养特征

该细菌在鲜血培养基上菌落呈针尖大小,圆形隆起,湿润透明,灰白色,为β-溶血;在血清肉汤中管底混浊呈沉淀状。革兰氏染色为G+菌。初步证实该分离菌属于猪链球菌9型。

2.2PCR扩增结果

扩增产物经10 g/L琼脂糖凝胶电泳,得到单一的约390 bp大小的目的片段(图

1)。

2.3测序结果及核苷酸同源性分析 3结论与讨论

在猪链球菌35个血清型中,cps9H与其他34个血清型的序列同源性都很低,是国内外目前利用PCR技术鉴别诊断猪链球菌9型引物的主要基因组。SS9是继SS2型之后的主要流行血清型,主要流行于澳大利亚、德国、比利时和荷兰[3]。近些年来,在我国各省(市)也有关于SS9的报道[4-6],研究证实了SS9毒株确实已在钦州市的猪群中存在。序列分析结果显示,钦州分离株与国内外其他SS9毒株核苷酸同源性都较高。研究结果表明,钦州市现在流行的SS9毒株与国内外的流行毒株基本一致,没有发生太大的变异,预示在临床上重视控制SS2感染的同时,还应该加强防控SS9,以防在钦州市猪群中形成大规模的流行。

4参考文献 [2] 熊毅,刘棋,覃芳芸,等.猪链球菌亚种及

1、

2、9型四重PCR检测方法的建立[J].广西农业科学,2007,38

(6):681-684.

[3] WISSELINK H J,SMITH H E,STOCKHOFE-ZURWIEDEN N,et al. Distribution of capsular types and production of muramidase-released protEin(MRP)and extracellular factor(EF)of Streptococcus suis strains isolated from diseased pigs in seven European countries[J].Vet Microbiol,2000,74

(3):237-248.

[4] 李立虎.猪链球菌病的研究进展[J].畜牧与饲料科学,2009

(2):173-174.

[5] 陈炜,刘平,郭仕坤,等.六安地区猪链球菌分离鉴定及药敏学试验[J].畜牧与饲料科学,2009

(2):183-184.

[6] 李鹏,刘军,祝令伟,等.猪链球菌2型新毒力相关基因lin缺失菌株的构建[J].中国兽医学报,2010,30

(5):643-646.

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