翻新时间:2023-01-22
两种凝血酶原提取方法的比较研究
毕业论文
【关键词】 凝血酶原; 凝血酶; 等电点沉淀法; 柠檬酸钡吸附法
Comparative Analysis of Two Extraction Methods of Prothrombin
LAI Yi,WU Minlu,DAI Juan,CHEN Man,DUAN Jiahui,LIU Yang* 毕业论文网 论文网
(Department of Lab Medicine,Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China)
【Key words】 prothrombin; thrombin; method of precipitating at isoelectricpoint; adsorption method with barium citrate
1 材料与方法
1.1 材料
柠檬酸钠抗凝的新鲜猪血浆。
纤维蛋白原和凝血酶标准品购自美国SIGMA公司,Bradford蛋白质定量检测试剂盒购自美国BioRad。其余试剂均为国产分析纯。
1.3 主要仪器
GE GeneQuant 1300核酸蛋白分析仪。
1.4 方法
1.4.1.1 等电点沉淀法 猪血浆用蒸馏水稀释10倍,用5 %冰乙酸将其pH调至5.3,4℃静置过夜,3 000 r/min离心15 min,弃上清,沉淀用生理盐水溶解,过滤备用。
1.4.3 凝血酶比活性测定 根据文献[4]提供的方法配制0.1 %纤维蛋白原溶液。
根据文献[6],采用Bradford法测定样品的蛋白质浓度,以牛血清白蛋白为标准品,每个样本平行测2次,取平均值。根据公式:酶比活性=酶效价/溶液蛋白质浓度,计算凝血酶溶液的比活性。
2 结果与分析
以凝血酶标准品溶液效价 (U/mL)为X,对应的凝固时间(sec)为Y进行直线回归处理,并求得直线回归方程,所得方程式为:Y=62.9135.994X,r≈0.994 8.将凝血酶样品的凝固时间代入回归方程,即可计算得出样品的凝血酶效价(见表1、图1)。
3 讨论
从血浆中提取的凝血酶可应用于临床,作为局部止血的首选药物,具有止血快、无副作用的优点。同时,凝血酶也是纤维蛋白原定量检测试剂盒的主要成分,应用于出凝血疾病和血栓性疾病的临床检测[7]。由于人血浆资源的限制性,目前国内采用猪血浆提取凝血酶的报道较多,等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法是两种主要的凝血酶原提取方法,凝血酶原经单独的钙离子激活即可得到凝血酶。表1 两种提取方法所得到的凝血酶比活性
等电点沉淀法根据蛋白质在溶
[1]
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