浅谈基因改造中快速PCR定点突变方法及研究
翻新时间：2022-08-02
浅谈基因改造中快速PCR定点突变方法及研究
1 材料
11 菌株与质粒 E.coli DH5α，由本实验室保存。质粒pESOD(含hCu，Zn-SOD基因、Ampr基因以及EcoRI酶切位点，整个质粒约33kb)由本实验室构建，并转化于E.coli DH5α保存。
12 主要试剂 Pfu高保真DNA聚合酶(深圳晶美生物工程有限公司)；DpnI酶(河南华美生物工程有限公司);小量质粒快速抽提纯化试剂盒(上海博亚生物技术有限公司);DNA Marker,T4DNA连接酶，Eco RI等常规酶(上海Sangon公司)。
13 pESOD质粒提取及鉴定 用质粒快速抽提纯化试剂盒从含pESOD质粒的E.coli DH5α转化菌里提取pESOD质粒，取部分质粒用EcoRI酶切后琼脂糖电泳鉴定，另取部分质粒送上海博亚生物技术有限公司测序。
14 定点突变
143 转化 用Dpn I限制性内切酶处理PCR反应产物，直接转化感受态的E.coli DH5α，涂布培养后随机挑3个菌落并提取相应质粒，由上海博亚生物技术育限公司测序，测序引物P3：5′ACTCAGGTACTGGGAGTG 3′。
2 结果
21 提取的质粒经EcoRI酶切后琼脂糖电泳 质粒大小为3300bp左右，证明所提取的质粒就是pESOD质粒，见图1。
图1 pESOD质粒经EeoRI酶切后琼脂糖电泳（略）
22 PESOD质粒测序的部分结果 所测序列与文献
下载文档
版权声明：此文档由查字典文档网用户提供，如用于商业用途请与作者联系，查字典文档网保持最终解释权！
网友最新关注
- 梦中的春游
- 三个小伙伴
- 土笋冻
- 春天的歌
- 欢度“六一”
- 我的数学老师病了
- 吃“梅子”
- 美丽的四仙子
- 捉知了
- 狡猾的狐狸
- 有趣的中国地图拼图
- 参观苏中七战七捷纪念碑
- 田忌第二次赛马之后
- 我家的小白鼠
- 成绩
- 军事支出预算执行绩效审计研究
- 内部审计外部化理论的几点思考
- 论审计需求对审计质量的影响
- 社保基金监管应做到五管齐下
- 社保基金审计中应把握的重点及基本方法
- 现代风险导向审计理论及应用研究
- 风险导向内部审计的探讨
- 现代企业制度下内部审计的思考与研究
- 电子政务下广东省计算机审计评估体系研究
- 乡镇财政审计发现的问题及审计建议
- 审计失败的成因分析与防范措施
- 注册会计师审计风险的成因与对策探析
- 审计失败的规避措施研究和探讨
- 科学提升审计机关审计项目质量监控水平的思考
- 审计功能的管理学基础研究
- 李大钊：《“今”》
- 《艰难的国运与雄健的国民》课文评点
- 《艰难的国运与雄健的国民》习题精选
- 李大钊：《壮别天涯未许愁》
- 《艰难的国运与雄健的国民》反思体验
- 《艰难的国运与雄健的国民》词语解释
- 《艰难的国运与雄健的国民》习题精选
- 李大钊：《狱中自述》
- 《艰难的国运与雄健的国民》仿写例文
- 《艰难的国运与雄健的国民》同步练习
- 我也要有铮铮傲骨──读《艰难的国运与雄健的国民》有感
- 李大钊：《时间浪费者》
- 李大钊：《五峰游记》
- 《艰难的国运与雄健的国民》读后感
- 《艰难的国运与雄健的国民》词义辨析