生理生化实验论文—连

《植物生理学研究法》

（设计实验方案、实验报告、课程论文）

专业年级 2011级生物科学

姓 名 连伟波 学 号任课教师 柯 玉 琴 教授 开课时间 2013~2014学年第2学期

生命科学学院《植物生理与分子生物学实验室》

《植物生理学研究法》

(课程实习)

论文题目：水杨酸对低温胁迫下花生种子的

萌发及生理活性的影响

目 录

一、《植物生理学研究法》实验设计方案 .......................... 2 二、 生理指标预习报告 ....................................... 4 实验一 种子发芽率的统计 ................................. 4 实验二 苯丙氨酸解氨酶活性的测定 ......................... 4 实验三 愈创木酚法测定过氧化物酶活性 ...................... 6 实验四 氮蓝四唑法测定超氧化物歧化酶活力 ................... 7 实验五 淀粉酶活性的测定 .................................. 9 实验六 丙二醛含量的测定 ................................. 11 实验七 植物组织中可溶性蛋白质含量的测定................... 12 三、 实验现象观察记载及原始数据记录表 ....................... 13 四、撰写科技论文 ........................................... 22

一、《植物生理学研究法》实验设计方案（10分）

实验设计：

参考文献：

张凤银，雷

刚，张

萍，孙彩云.水杨酸对低温胁迫下藜豆种子萌发和幼苗生理特性的影响[J].西北农林科技大

学学报，2001, (4)40

唐月异，王传堂，高华援，等.花生种子吸胀期间耐低温性及其与品质性状的相关研究[J].核农学报，2011, 25(3):0436~ 0442

张浩，张雅君，丁艳，等.花生发芽过程中主要生理指标及蛋白质代谢变化[J].食品科学，2013,19:311~316罗虹,周桂元,黄斐，等.水杨酸对花生种子及幼苗几种酶活性的影响[J].花生学，2002, 31( 2): 7~ 9王学奎.植物生理生化实验原理和技术[M],北京：高等教育出版社，2006.5:172-173

需要测定的生理指标及方法

实验一实验二实验三实验四实验五实验六实验七

统计发芽种子数量，计算发芽率测定不同浓度 SA处理花生种子苯丙氨酸解氨酶活性测定不同浓度 SA处理花生种子过氧化物酶(POD)活性测定不同浓度 SA处理花生种子超氧物歧化酶(SOD)活性测定不同浓度 SA处理花生种子淀粉酶活性测定不同浓度 SA处理花生种子丙二醛(MDA)含量测定不同浓度 SA处理花生种子可溶性蛋白含量

指导老师对实验设计方案的意见：

指导老师签名： 3

年

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二、生理指标预习报告

实验一 种子发芽率的统计

(一) 原理：

植物种子的发芽温度可以从0-40℃的范围，但每一种植物都有其发芽适温，也就是最适合于发芽的温度。植物的发芽适温因原产地而异，一般而言，温带植物以15-20℃为最适，亚热带及热带植物以25-30℃为适。而本次采用的花生种子的发芽温度为15-25℃之间。探究温度对花生发芽率的影响在实际生产应用中具有重要的意义。

(二) 植物材料：不同浓度SA处理的花生种子

(三) 仪器设备：

1、可控温度箱； 2、小篮子； 3、 塑料袋； 4.、烧杯； (四) 试剂配制：

1、 2.5mmol/L的水杨酸母液：0.3453g用少量的乙醇溶解后，配制成1000mL体积。

(五) 实验步骤及注意事项：

1、采用0、0.5、1.0、1.5、2.0mmol/L的水杨酸浸泡花生种子，每个浓度100颗，浸泡时间5h，温度13℃。

2、将每组浸泡完的种子分为3篮放置于13℃的温度条件下培养7d后转移室温下培养5d。 3、洗净花生表面的沙子，统计花生的出芽状况，计算花生的出芽率。 （六）实验计算：

种子发芽率=（发芽种子数/供测试种子数）×100%

实验二 苯丙氨酸解氨酶活性的测定

(一) 原理：

苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonialyase，PAL）催化苯丙氨酸的脱氨反应，使NH3释放出来形成反式肉桂酸。此酶的在植物体内次生物质（如木质素等）代谢中起重要作用。根据其产物，反式肉桂酸在290nm处吸光度的变化可以测定该酶的活性。

(二) 植物材料：不同浓度SA处理的花生种子

(三) 仪器设备：

1、 紫外分光光度计； 2、 冷冻高速离心机； 3、 研钵； 4.、移液枪； 5、试管； 6、试管架 ； 7、枪头

(四) 试剂配制：

1、 pH 8.8 的0.05mol/l硼酸盐缓冲液（2500ml）： A液: 0.05mol/l硼砂（2000ml）：38.14g硼砂用蒸馏水定容至2000ml； B液：0.2mol/l硼酸（1000ml）：12.37g硼酸用蒸馏水定容至1000ml。 A液取1750ml + B液750ml 即为pH 8.8 的0.05mol/l硼酸盐缓冲液。 2、 0.6mmol/L苯丙氨酸：0.6mmol/L×0.5×165.19=0.0496g/L

称取0.0496g L-苯丙氨酸溶于500ml上述缓冲液中。

3、提取液：预冷的 0.1mol·L – 1 硼酸- 硼砂缓冲液[pH 8. 8,含1 mmol·L - 1 EDTA、5 mmol/L 巯基乙醇、1% (体积分数) PVP]

4、提取液配法：2000ml pH 8.8 0.05mol/l的硼酸钠缓冲液中加入：巯基乙醇0.703ml、EDTA0.292g、