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麦田猪殃殃对苯磺隆抗药性的快速检测

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麦田猪殃殃对苯磺隆抗药性的快速检测

农药学学报2008,10(3):311-314

ChineseJournal

ofPesticideScience

研究论文

麦田猪殃殃对苯磺隆抗药性的快速检测

彭学岗,

王金信’,

吴翠霞,

(山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018)

摘要:以采自山东、河南、安徽、陕西等地麦田及非农田的10个猪殃殃Galiumaparine生物型为试材,运用单剂量甄别技术对不同生物型对苯磺隆的抗药性进行了检测,并以温室盆栽法及皿内抗性水平测定法验证其可靠性和可行性。结果表明:在甄另1】剂量(有效成分)85mg/L下,猪殃殃不同生物型萌发率存在显著性差异,可以较好区分猪殃殃抗、感生物型;温室盆栽法及皿内抗性水平测定法结果一致,除采自山东泰安和陕西周至的麦田猪殃殃对苯磺隆仍处于敏感状态外。其他3个地区麦田猪殃殃均产生了不同程度的抗药性,且均与皿内单剂量甄别法结果一致,表明皿内单剂量甄别法具有可靠性和可行性。

关键词:猪殃殃;苯磺隆;抗药性;单荆量甄另I】

中图分类号:¥481.4

文献标识码:A

文章编号:1008-7303(2008)03-031l讲

Quick-test

forDetectionofHerbicideResistanceto

Tribenuron-methylinGaliumaparine

PENGXue—gang,

WANGJin-xin’,

WUCui—xia,DuanMin

Province,China)

(CollegeofPlantProtection,Shandong

AgriculturalUniversity,Tai’an271018,Shandong

Abstract:TenbiotypesofGaliumaparineweresampledfromShandong。Henan,AnhuiandShaanxiProvince.AsingleconcentrafiondiscriminationmethodinPetridishfordetectionofGaliumapa—neresistancetOtribenuron—methylwasTheresultsshowedthat

establishedand

validatedbygreenhousepottestsandPetridishtest.

significantdifferenceofgerminationratebetweenresistanceand

susceptible

biotypeswasobtainedunderthediscriminationconcenuation,85

mg(a.f.)/L

pottests

oftribenuron-methyl.

ale

The

resistanceleveltestedbythePetridishbioassayandgreenhouse

singleconcentrationdiscrimination

inaccordancewith

thoseofthebiotypesto

method.The

resistance

ofallthepotentialresistant

Zhouzhi,Shaanxi

tribenuron methyl,exceptthosefromTai’all,ShandongProvince,and

Provincewasdeveloped.Theresultssuggestedthatthissingleconcentrationdiscriminationmethodis

reliableandfeasible.

Keywords:Galiumaparine;tribenuron—methyl;herbicideresistance;singleconcentrationdiscrimination

method

单一连续使用具有单一作用靶标的除草剂,很容易使杂草对其产生抗药性。抗药性的产生给作物生产造成了严重威胁,因此,抗药性检测和监测工作El益迫切。Cirujeda等‘11改进了培养皿种

收稿日期:2008-04.15:修回日期:20084)5-05.

作者简介:彭学岗(1983一)。男,山东临沂人,硕士研究生,从事除草剂抗药性研究,E mall:xgpl9830221@163.corn;’通讯作者(AutIIor

for

子检测法,通过在琼脂培养基中加入赤霉酸GA,以打破种子休眠期,实现了虞美人Papaver

rhoeas

对苯磺隆抗药性的快速检测鉴定。其他生理技术及其改进技术,如分蘖测定法㈨、茎切面再生苗

correspondence):王金信(1962一),男,山东胶南人,理学博士,教授,从事除草剂毒理及应用技术研究.联系电话:0538-8241114;E-mall:wmgix@sdau.edu.cn

基金项目:。十一五”国家科技支撑计划(2006BAD08A09).

312

农药学学报

V01.10

法【3】、花粉粒萌发法H1等在杂草抗药性快速检测鉴定体系中也起到了重要作用。近年来,高通量筛选和聚合酶链式反应(PCR)技术在生理学、生物化学、分子生物学、遗传学、基因工程等领域获得了巨大成功,应用范围逐渐扩大,结合各种生理、生化和分子生物技术,为实现杂草抗药性的经济、快速、有效检测带来了契机【5“J。随着抗药性机理研究的深入以及各种技术的完善,探索构建一套经济、快速、有效的杂草抗药性检测鉴定体系具有重要的实践意义。

苯磺隆(tribenuron—methyl)是一种重要的磺酰脲类麦田除草剂,具有成本低,除草效果好,对人、畜安全的特点,广泛用于冬小麦、春小麦、大麦和燕麦等麦类作物田,可有效防除一年生及多年生阔叶杂草。但由于该类除草剂作用位点单一,易产生抗药性,已成为其致命弱点。猪殃殃Galiumaparine是茜草科猪殃殃属一年生或越年生植物,为北方冬麦区麦田杂草的优势种之一。然而,由于近年来单一连续使用苯磺隆,已发现猪殃殃对其产生了不同程度的抗药性。因此,建立一种快速检测猪殃殃对苯磺隆的抗药性的方法,对指导科学合理用药具有重要的现实意义。

75%苯磺隆水分散粒剂(tribenuron—methyl10个猪殃殃Galiumaparine生物型,采集地点宿州l、2(SZl、SZ2),陕西周至1、2(ZZl、ZZ2),田。

皿内单剂量甄别及抗性水平测定参照min,灭g/L的硝酸钾)平板上,每皿30粒种子,4次重

复,于光照培养箱内培养。芽前培养温度15℃,不予光照;芽后白天20℃,黑夜15℃,每天10h光照,光照强度350ixmol m~ s~。在琼脂培养基中加入苯磺隆,有效成分含量(下同)分别为

79、82、85、88、91

mg/L,以确定适宜的苯磺隆浓度

作为区别抗性和敏感生物型的区别剂量。10d后检查结果,以种子萌发率为指标;播种已催芽露白的种子,每皿10粒,以苯磺隆梯度浓度0.05、

0.25、1.25、6.25、31.25

mg/L进行抗性水平测

定,15d后检查结果,测定主根长,计算抑制率,求回归方程。所有数据使用DPS软件处理。

采用温室盆栽法¨驯验证上述方法的可行性及可靠性。盆口面积100cm2,播种已催芽露白的种子,每盆10粒,4次重复,置于温室内培养。温室温度白天为25oC±5。C,夜间为15℃±5oC,相对湿度为75%±5%。待叶3—4轮,用3WT一1I型定量喷雾塔茎叶喷雾,梯度浓度(0.312

5、0.625、

1.25、5、10、20、40、80

g/hm2)处理。16d后剪取

杂草地上部分,称重,计算鲜重抑制率,使用DPS软件求出回归方程。

从表1可以看出,采自河南许昌的XCl随处理剂量的升高,萌发率呈下降趋势,然而整体变化不大,彼此间不存在显著性差异,而XC2随处理剂量的升高,萌发率急剧下降,差异性显著,苯磺隆处理剂量≥85mg/L时萌发率为0,相同剂量下XCl、XC2生物型萌发率存在显著性差异;河南漯河和安徽宿州的结果与河南许昌趋势基本一致,各地1、2生物型在苯磺隆浓度为85mg/L时萌发率存在较好的区分;而采自山东泰安、陕西周至的1、2生物型在所有处理剂量下均无区分,且萌发率均显著低于其他3个麦田生物型,因此,初步确定

mg/L为甄别剂量,并假定山东泰安、陕西周至

的麦田猪殃殃处于敏感状态。

皿内抗性水平测定试验结果(见表2)表明,河和1.5;而山东泰安、陕西周至麦田生物型未见抗2结果与分析

1材料与方法

2.1甄别剂量的确定

1.1供试药剂及试剂

WG),江苏健神生物农化有限公司;98%苯磺隆原粉,山东华阳科技股份有限公司;试剂均为分析纯。

1.2供试杂草

及编号如下:山东泰安l、2(TAl、TA2),河南许昌1、2(XCl、XC2),河南漯河1、2(LHI、LH2),安徽分别于2007年5月采自各地麦田及非农田(从未使用过除草剂),其中1为麦田生物型,2采自非农

85

1.3试验方法

Cirujeda等…和Durhn.Prado等【91方法进行。选择敏感种群和麦田可能具有抗性种群的种子,用自来水清洗,30%次氯酸钠溶液表面消毒10菌水洗3—5遍。消毒后的种子在无菌条件下播种在琼脂培养基上(含质量分数为1.3%的琼脂和

2.2皿内抗性水平测定对单剂量甄别法的验证

南许昌、河南漯河、安徽宿州猪殃殃麦田生物型对苯磺隆已产生抗药性,抗性倍数分别为2.2、1.5药性,为敏感种群。皿内抗性水平测定试验结果与单剂量甄别结果一致。

NO.3

彭学岗等:麦田猪殃殃对苯磺隆抗药性的快速检测表l苯磺隆对猪殃殃的皿内单剂量试验结果

Table1

Theresultofsingledoseoftribenuron—methytoGaliumaparinbyPe廿idishtest

萌发率Germinationrate(%)

313

地点

Site

生物型BiotyPO

79

The

苯磺隆有效成分浓度

concentrationof82

tribenuron—methy,(a.i.)/(mg/L)

85

8891

注:1为猪殃殃潜在抗性生物型,采自麦田,2为敏感生物型,采自从未使用过除草剂的非农田,下同。表中同行数据(平均值±标准差)具有相同英文小写字母者表示在0.05水平差异不显著;括号内相同英文小写字母表示同一地区1、2生物型相同处理剂量时在0.05水平差异不显著(DMRT法)。

Note:1rep陀∞ntsthebiotypeassumed

that

Bever

as

potentialresistantfrom

data

wheat

field,and2representsthe

the

susceptiblebiotypefromBOll—farminglands

110

applied

herbicides.Followsrange

arethc鞠Inc.The

same

lettersin

inthesame

show

lOW

no

followedby

same

lettersshow

significanceatP<0.05by

under

Duncan3

multiple

test.whilethethe

parenthe∞s

signific∞cebewcenand2biotypesfromthe

s锄e

region

the

sameconcentration.

表2猪殃殃对苯磺隆抗药性水平的皿内测定结果

Table2

TheresistancelevelofGaliumaparinetotribenuron—methybyPetridishtest

注:’生物型1的Ic∞与当地生物型2的Icjo的比值。‘TheratioofIC50ofbiotype

and

2.3温室盆栽法对单剂量甄别法的验证

温室盆栽法结果(见表3)表明,河南许昌、河南漯河、安徽宿州猪殃殃麦田生物型对苯磺隆已产生抗药性。抗性倍数分别为4.3、2.9和2.8;而山东泰安、陕西周至麦田生物型未见抗药性,为敏感种群。温室盆栽试验结果与单剂量甄别结果一致。

讨论

温室盆栽法作为检测杂草抗药性的常用方

法,虽然能够提供杂草交互抗性或多抗性等方面的信息,指导轮换用药,但是劳动量大,费时长,不能及时快速反映农田杂草的抗药性情况。皿内抗性水平测定也是一种常用的杂草抗药性测定方法,虽与温室盆栽法相比更省时省力,然而要快速

314

农药学学报

表3

Table3

V01.10

猪殃殃对苯磺隆抗药性水平的温室盆栽法测定结果

TheresistancelevelofGaliumaparinetOtribenuron-methyinpottest生物型

Biotype

地点

Sitc

回归方程

RegressionequationY=4.03l

0+1.623

9x

GRso

C相关onel系数ation

cocfficient

篡黧

胁tor

4.3

(95%CL)/(pg/mL)

3.950

河南许昌XCl

Henan

9(1.9495~14.207)0.9483

3)0.9625

Xuchang

XC2Y=5.0208+0.6375xY=4.2329+1.390

Y=4.942Y=4.947

5x7x2x

0.9277(0.2308—3.5493.5621.2431.203

1.047

河南漯河LHI

HenanLuohe

LIt2

0(1.8869—10.231)0.96402(0.2913—6.4091)0.9611

2.9

3+0.6104+O.654

山东泰安TAl

ShandongTai7趵TA2

6(0.8228~1.7984)0.99282(0.7493—1.4693)0.994l5(0.993l一18.308)0.94192(0.4409—2.2506)0.9617l(0.5112一1.4896)0.9649

9)0.9966

2.

1.1

y=4.9860+0.7003xY=4.6074+0.8866xl,=5.01)13+1.0673Jr:5.0166+1.455

7x

安徽宿州

AnhuiSuzhou

SZI

2.7720.9970.974

2.8

sz2ZZlZZ2

陕西周至

Shaa:nxi

Zhouzhi

0.9

Y=4.9883+0.6722x

ratio

1.0410(0.8074~1.344ofGR∞of

biotypc1

注:’生物型l的GR50与当地生物型2的GR,0的比值。’The

and

实现大批量潜在抗药性生物型的抗性监测仍显困难。本文旨在建立一种麦田恶性杂草猪殃殃对苯磺隆的抗药性快速检测的皿内单剂量甄别法。

在确定甄别剂量时,一方面要使敏感生物型的萌发率尽量低;另一方面在保证敏感生物型萌发率低的前提下,抗药性生物型的萌发率尽可能高。综合考虑各地敏感种群的耐药性差异,本研究确定苯磺隆有效成分85mg/L为甄别剂量。从培养皿抗性水平测定和温室盆栽法的结果可以看出,虽然供试猪殃殃的抗药性水平不高,温室盆栽法抗性倍数为2.8—4.3倍,培养皿抗性水平测定法的为1.5—2.2倍,但这两种常规方法得到的供试杂草猪殃殃对苯磺隆的抗药性趋势是一致的,且均与单剂量甄别法的结果相一致,表明皿内单剂量甄别法具有可靠性和可行性,在抗性水平较低时就可以很好区分抗、感生物型。

在皿内单剂量甄别检测出抗药性的基础上,结合皿内抗性水平测定,就可实现杂草抗药性的快速检测,从而克服哑内抗性水平测定和温室盆栽法劳动量大、费时长的缺点。然而此法也存在一定缺陷,即须同时获得麦田潜在抗药性生物型和敏感生物型,否则会影响到结果的可靠性,而敏感种群的获取有时存在困难。这种皿内单剂量甄别法的建立,结合皿内抗性水平测定,能够实现大批量供试猪殃殃对苯磺隆的抗药性的快速检测,对监测我国麦田恶性杂草猪殃殃对苯磺隆的抗药性和指导科学合理用药有着重要的现实意义,对建立快速检测和监测其他杂草抗药性的生物测定方法也具有借鉴意义。

[9][8][7][6][5][4][3】[2]

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(Ed.JIN

H)

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麦田猪殃殃对苯磺隆抗药性的快速检测

作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):被引用次数:

彭学岗, 王金信, 吴翠霞, 段敏, PENG Xue-gang, WANG Jin-xin, WU Cui-xia,Duan Min

山东农业大学,植物保护学院,山东,泰安,271018农药学学报

CHINESE JOURNAL OF PESTICIDE SCIENCE2008,10(3)1次

参考文献(10条)

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4. 王一专.李贵 HA对麦田主要除草剂品种控草效果的影响[期刊论文]-江苏农业科学2009(6)5. 吴小虎 山东部分市县麦田杂草麦家公对苯磺隆抗性初步研究[学位论文]20116. 刘君良 中国北方部分地区麦田杂草荠菜对苯磺隆的抗性研究[学位论文]20117. 骆传启.吴照喜 竹叶柴胡与猪殃殃的鉴别[期刊论文]-时珍国医国药2004,15(11)

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