鸡士从菌培养特性的初步研究

第２６卷第３期２００７年５月

食品与生物技术学报

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

Ｖ０１．２６Ｎｏ．３２００７

Ｍａｙ．

文章编号：１６７３—１６８９（２００７）０３—００９０—０５

鸡拟菌培养特性的初步研究

龙正海１，

曾大兴２

（Ｉ．浙江医药高等专科学校药学系，浙江宁波３１５１００；２．深圳职业技术学院，广东深圳５１８０５５）摘

要：采用固体培养和液体培养方法研究了鸡枞菌的培养特性以及培养基、ｐＨ值、酵母膏对其

茵丝生长的影响。结果表明：鸡士５Ｌ菌在普通固体培养基中生长缓慢，茵落较小，在培养后期，菌株间存在３种明显的茵落类型即“茵丝型”、“孢子型”、“中间型”，产孢量和形态也有较大差异。在液

体培养条件下鸡枞菌的生长较快，培养基、ｐＨ值、酵母膏浓度对液体茵丝生长存在很大影响。各

供试菌株在液体摇床培养中的最佳培养条件基本一致：即最适ｐＨ值为４．５；酵母膏最佳质量浓度

为０．２ｇ／ｄＬ；理想培养基为ＰＳＤＹＢ。

关键词：鸡士扶茵；培养特性；培养基；酵母膏中图分类号：

文献标识码：Ａ

ＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＳｔｕｄｙ

ｏｎ

ＣｕｌｔｕｒａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＴｅｒｍｉｔｏｍｙｃｅｓｓｐｐ．

ＬＯＮＧＺｈｅｎｇ－ｈａｉｌ，ＺＥＮＧＤａ－ｘｉｎ９２

（１．ＺｈｅｊｉａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｎｉｎｇｂｏ３１５１００，Ｃｈｉｎａｔ２．ＳｈｅｎｚｈｅｎＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ５１８０５５，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｈｉｓｍａｎｕｓｃｒｉｐｔ，ｔｈｅｃｕｌｔｕｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＴｅｒｍｉｔｏｍｙｃｅｓｓｐｐｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｉｎｓｏｌｉｄａｎｄｓｕｂｍｅｒｇｅｄｃｕｌｔｕｒｅ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ．

ｎｏｕｒｉｓｈｍｅｎｔａｎｄ

ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａ１

ａ

ｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．．ｔｈｅｔｈａｔｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｓｕｂｍｅｒｇｅｄｓｓｐｐｅｃｇｒｏｗｔｈｙｍｏｔｉｍｒｅＴｒＣｏｍｐａｒｅｄｏｆ，ｗｉｔｈｓｎｏｉｏｆｔｉｄｎｏｃ

ｖｅｒｙ

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ｒａｔｅ

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ｏｎ

ｓｏｌｉｄ

ｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ

ｆｏｒ

Ｔｅｒｍｉｔｏｍｙｃｅｓｓｐｐｇｒｏｗｔｈｉｎｆｌａｓｋｗｅｒｅｆｏｌｌｏｗｓ：ｐＨ４．７；ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔＫｅｙｗｏｒｄｓ：Ｔｅｒｍｉｔｏｍｙｃｅｓ；ｃｕｌｔｕｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ；ｍｅｄｉｕｍ；ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ

０．２％；ｍｅｄｉｕｍ

ＰＳＤＹＢ．

鸡拟菌属又称蚁巢伞属（Ｔｅｒｍｉｔｏｍｙｃｅｓ），是

Ｈｅｉｍ（１９４２）针对白蚁（Ｔｅｒｍｉｔｅ）共生的伞菌提出来的［１１，Ｈｅｉｍ（１９７７）在其专著《Ｔｅｒｍｉｔｅｓ

ｅｔ

总氨基酸量的３７．６０％［５］，超过其它很多种类食用菌菌丝体或子实体，水溶性多糖含量也与野生子实体接近［６］。中医认为，其性平味甘，有益胃、清神、治痔等功效。近年来医学研究表明其中的多糖、麦角甾醇等活性成分尚具有抗肿瘤、降血脂、调节免

Ｃｈａｍｐｉ—

ｇｎｏｎｓ））中共描述了２８个种［２］，目前我国已报道近

２０多个种嘲；其中鸡拟菌（ｔａｌｂｕｍｉｎｏｓｕｓ）和粗柄鸡拟菌（Ｔ．ｒｏｂｕｓｔｕｓ）在我国的分布最广、产量最

大［‘１。

疫机能等作用［７］。因此，鸡拟菌在食品、医药领域

颇具开发价值。

但由于该菌只能生长在白蚁巢上，与白蚁之间的共生关系相当复杂，商业化人工栽培仍处于摸索

鸡拟菌子实体味道鲜美，营养丰富，其菌丝体

蛋白质含量高达２８．２８％，８种人体必需氨基酸占

收稿日期：２００６—０５—１５．

作者简介：龙正海（１９６３一），男，贵州锦屏人，副教授，微生物学硕士研究生．Ｅｍａｉｌ：ｌｏｎｇｚｈ＠ｍａｉｌ．ｚｐｈｃ．ｎｅｔ

第３期

龙正海等：鸡士ＩＬ茵培养特性的初步研究

９１

阶段‘引。鉴此了解鸡拟菌菌丝的生长条件和培养特性具有十分重要的意义。本文用子实体分离菌株对其生长特性及培养条件进行初步研究，为进一步开发利用这种珍稀食用兼药用真菌资源提供一定的科学依据。

１材料与方法

１．１

菌种

鸡拟菌（Ｌ

ａｌｂｕｍｉｎｏｓｕｓ）Ｔｂ一２１３、Ｔｂ－２１４菌株

及粗柄鸡拟菌（ｆｒｏｂｕｓｔｕｓ）Ｔｒ－７０２菌株均系作者

从贵州省兴义市采集的野生子实体中分离。１．２培养基

１．２．１

固体培养基采用ＰＤＡＹ培养基，即在

ＰＤＡ培养基中加质量浓度０．２ｇ／ｄＬ酵母膏配制而成，用柠檬酸调ｐＨ值至４．５。

１．２．２液体培养基ＰＤＹ培养基成分（ｇ／ｄＬ）：２０马铃薯汁，２葡萄糖，０．２酵母膏；ＰＤＹＢ培养基：

ＰＤＹ＋ＶＢｌ３０ｍｇ／Ｌ＋ＶＢ６

６０ｍｇ／Ｌ；ＰＳＤＹ培养

基：１５马铃薯汁，２５豆汁，２葡萄糖，０．１酵母膏；

ＰＳＤＹＢ培养基：ＰＳＤＹ＋Ｖ　

Ｂ１

３０ｍｇ／Ｌ＋ＶＢ。６０

ｍｇ／Ｌ；Ｃｚａｐｅｋ培养基：３蔗糖，０．３硝酸钠，０．０５氯化钾，０．１磷酸氢二钾，０．００１亚硫酸铁，０．０５硫酸镁；上述培养基均用柠檬酸调ｐＨ值至４．５。１．３培养方法

固体培养采用９ａｍ培养皿２５℃恒温培养，液体培养采用２５０ｍＬ三角瓶装入５０ｍＬ培养液，用分生孢子液（１×１０６／ｍＬ）接种，接种量为１ｍＬ／每瓶，置２５℃下１２０ｒ／ｍｉｎ恒温摇床培养。

１．４孢子萌发观察

用无菌水以斜面或摇瓶培养物制备孢子悬浮液（１×１０６／ｍＬ），在装有培养基的试管或三角瓶中接入适量孢子悬浮液，２５℃静置或摇床培养，分别

于２４ｈ和４８ｈ取样观察孢子萌发情况，及时做好

记录并计算孢子萌发率。１．５菌丝干重测定

各种培养液经４层纱布过滤，将得到的湿菌丝体烘干至恒重后，用电子天平称重，取各处理的平均值即可。

２

结

果

２．１鸡撖菌的培养特性

２．１．１鸡执茵的固体培养特征实验观察了鸡拟

菌若干菌株的固体培养特征，发现各菌株在ＰＤＡ

斜面和固体平板上生长极慢，在ＰＤＡＹ上生长有所加快，但仍然十分缓慢。在ＰＤＡＹ斜面培养基上，２５℃培养，多数菌株１２－－－１５ｄ后可长满斜面，但有部分菌株接种后仅局限在斜面的中央部位生长，菌苔不扩大，不能长满整个斜面。

固体斜面培养：菌苔初期纯白色，后颜色逐渐加深至黄色或灰褐色。不同菌株的菌苔在生长初期形态较一致，后期因产孢量不同，形态差异较大。根据这些差异，初步可分为３种类型：（１）菌丝型：

菌苔后期仍然保持纯白色或微黄，形成大量气生菌丝，产孢量少，菌苔表面绒状，少数菌株属此种类型。（２）孢子型：菌苔气生菌丝少，菌丝后期聚集成颗粒状或粉状，菌苔部分隆起，产孢量大，大部分菌株属此种类型；（３）中间型：气生菌丝和产孢情况介于上述两种类型之间，挑取后期菌苔进行镜检，可见很多着生于分生孢子梗上的球形、椭圆形或卵形链状细胞，分生孢子一般位于链状细胞前端，呈卵圆形、球形等多种形态（见图１（ａ））；包括Ｔｂ－２１３、Ｔｂ－２１４、Ｔｒ－７０２在内的部分菌株则属于这种类型。

１．分生孢子梗２．链状孢子３．分生孢子（ａ）Ｔｂ＿２１３菌株分生孢子梗及分生孢子

１．萌发孢子２．芽管３．未萌发孢子

（ｂ）Ｔｂ－２１３菌株的分生孢子萌发图１

Ｔｂ－２１３菌株的分生孢子及孢子萌发

Ｆｉｇ．１

Ｔｈｅｃｏｎｉｄｉａａｎｄ

ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＴｂ－２１３ｓｔｒａｉｎ

固体平板培养：由于鸡拟菌在人工培养基上普

遍生长缓慢，因此在ＰＤＡＹ平板上，多数菌株的菌

９２

食品与生物技术学报第２６卷

落扩展也较慢，大多数局限生长，２５℃培养１０ｄ，菌落可生长５

ｍｍ＇－－３５

ｍｍ（直径），多数菌株仅生长５

ｍｍ～１５ｍｍ；菌落特征与斜面培养相似，也存在３

种类型。菌丝型的菌落生长相对较快，菌落较大，而孢子型的菌落生长缓慢，菌落较小，菌落后期的产孢情况及孢子形态与斜面培养的情况基本一致。

２．１．２鸡枞茵的液体培养特征上述固体培养所

采用的各菌株，在摇床培养条件下，多数接种２～３ｄ后，开始形成纯白色的微菌丝球，菌丝球中部紧密，边缘疏松，菌丝粗细均匀，较细，直径约ｌ弘ｍ～１．５肛ｍ，边缘菌丝向外呈辐射状生长，未见分生孢子产生。４＂－５ｄ后，长成４ｍｍ～８ｍｍ大小的菌丝球，菌丝球边缘菌丝变粗变短，直径约２ｐｍ～３肛ｍ，其顶端开始产生分生孢子，分生孢子形态与固体培养相似，菌丝球颜色加深为淡黄色或黄褐色。

５～６ｄ后，菌丝球一般不再增大，开始大量产孢，培

养液变浑浊。观察还发现：在摇床培养条件下，鸡

拟菌的产孢时间与产孢量受多种因素影响，一般而

言，“孢子型”菌株比“菌丝型”菌株产孢早，产孢量大，中间型则位于二者之间。此外，当接种量较大

和培养温度高于３０℃以上时，产孢量明显增加。

而各菌株静置培养时，则均在培养液的表面形成一层菌丝膜，初期白色，逐渐加深至黄色或灰褐色，也形成相当数量的分生孢子。但此时“孢子型”、“菌丝型”、“中间型”菌株间培养特征的差异性不够明显。

综上所述，由于“菌丝型”菌株产孢量较小，用于液体深层培养时接种量不好控制，而“孢子型”菌株产孢量虽大，但不易形成菌丝球。因此，作者选择了产孢量适中，在液体培养时相对容易形成菌丝球的３个中间型菌株即Ｔｂ一２１３、Ｔｂ－２１４、Ｔｒ－７０２作为后续实验的主要研究材料。２．２鸡士５ｌ菌的孢子萌发特征

将Ｔｂ－２１４的孢子悬浮液分别接入无菌水、Ｃｚａｐｅｋ、ＰＤ和ＰＤＹ中，２４ｈ、４８ｈ后观察，结果见表１所示。２４ｈ后观察，在无菌水和Ｃｚａｐｅｋ中未见孢子萌发，萌发率为０；在ＰＤ和ＰＤＹ中孢子的萌发率分别为９４％和９６％。孢子萌发时不膨大，大多从孢子两端长出２根芽管（见图１（ｂ）），偶见３＂－－４根；多数孢子仅长出较短的芽管，少数芽管已长成较长的菌丝。４８ｈ后观察，孢子萌发率几乎没有变化，仅是芽管不断伸长，而在无菌水和Ｃｚａｐｅｋ中未萌发的孢子开始自融。实验中还观察到，静置和摇床培养对孢子萌发率无影响。Ｔｂ－２１４在无菌水和Ｃｚａ－ｐｅｋ中不能萌发的原因，可能是其营养不能满足孢

子萌发的需要。

２．３酵母膏浓度对鸡拟菌菌丝生长的影响

本实验以ＰＤＹ培养基研究了不同酵母膏质量

浓度对鸡拟菌菌丝生长的影响，结果见图２．所示。

实验结果表明：酵母膏质量浓度对３个菌株菌丝生长的影响是一致的，当酵母膏浓度为０．２ｇ／ｄＬ时，各菌株的菌丝产量达到最高，此后，随着浓度的升高，菌丝产量逐步下降，当质量浓度升至０．６ｇ／ｄＬ后，各菌株的菌丝产量下降至对照水平；预试验还证实酵母膏质量浓度超过０．７ｇ／ｄＬ后，会明显地抑制菌丝生长。因此，鸡拟菌菌丝生长的最佳酵母膏质量浓度为０．２ｇ／ｄＬ。

表１鸡士ＩＩ菌Ｔｂ．２１４菌株分生孢子在不同培养基质

中的萌发率ｎ＝５，工

Ｔａｂ．１

Ｔｈｅ

ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｃｏｎｉｄｉｕｍｆｒｏｍＴｂ－

２１４ｓｔｒａｉｎｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｕｍ

图２酵母膏对鸡士５【菌菌丝生长的影响

Ｆｉｇ．２

ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔＯｌｌ

ｍｙｃｅｌｉｕｍｇｒｏｗｔｈｂｙ

Ｔｅｒｍｉｔｏｍｙｃｅｓ

’

２．４

ｐＨ值对鸡拟菌菌丝生长的影响

以ＰＤＹ为培养基，初步比较了ｐＨ值对３个供

试菌株生长的影响，结果见图３。试验说明偏酸性环境适合供试菌株的菌丝生长，各菌株的最佳ｐＨ值均为４．５，但是当ｐＨ值小于３．５或大于５．５时，菌丝体生长受到抑制。

２．５培养基组成对鸡撖菌菌丝生长的影响

比较了ＰＤ、ＰＤＹ、ＰＤＹＢ、ＰＳＤＹ和ＰＳＤＹＢ等

培养基对鸡拟菌菌丝生长的影响，结果见表２。实

第３期龙正海等：鸡枞茵培养特性的初步研究

９３

验结果表明：不同种的两个菌株在ＰＤ中的生长量最小，在添加酵母膏或大豆汁后的ＰＤＹ或ＰＳＤＹ培养基上其生长量可提高２～３倍；在进一步添加２种维生素的ＰＤＹＢ或ＰＳＤＹＢ培养基上，菌丝的生长量仅有少量提高。说明酵母膏及大豆汁所含有的丰富的Ｂ族维生素已基本满足供试菌株对维生素的需要，两个供试菌株在ＰＳＤＹＢ培养基中都生长最好，不存在明显的种问差异。

３讨论

本实验发现，固体平板或斜面培养，鸡拟菌菌

株间均存在菌丝型、孢子型、中间型三种明显的菌苔（落）类型，大部分菌株属于孢子型，少数是菌丝

型，部分菌株为中间型。鸡拟菌种间和种内菌株间

培养特征的显著差异性在大型高等真菌中并不多见，其规律性值得进一步研究。

鸡拟菌作为共生菌，需要许多生长因子，据报

道玉米浆、酵母膏（粉）、黄豆粉、麦麸浸汁、多种维

鼬、

生素等均能促进鸡烈菌生长［７。９］，本实验也说明大

豆汁、酵母膏、ＶＢ。、ＶＢ：对该菌生长具有很大的促进作用。由于大豆汁、酵母膏本身就含有丰富的Ｂ族维生素，在ＰＤＹ、ＰＳＤＹ中加入ＶＢ。（３０ｍｇ／Ｌ）、

ＶＢ６（６０ｍｇ／Ｌ）两种Ｂ族维生素，产量的提高并不

栅

Ｈ－

蛙裁１楹

明显，表明酵母膏中的维生素已能较好满足菌丝生长的需要。在ＰＤＹ中加入豆汁后，菌丝产量进一

图３

Ｆｉｇ．３

ｐＨ值对鸡枞菌菌丝生长的影响

ＯＲ

步提高，但应注意调节培养基的碳氮比（Ｃ／Ｎ），加入豆汁后培养基氮源增加，因此，我们在配制时相应减少了马铃薯汁和酵母膏在培养基配方中的用量。

ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｐＨｍｙｃｅｓ

ｍｙｃｅｌｉｕｍｇｒｏｗｔｈｏｆＴｅｒｍｉｔｏ－

表２不同培养基对鸡拟菌菌丝生长的影响ｎ＝５。ｘ

Ｔａｂ．２

ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｕｍａｍｇｒｏｗｔｈｏｆＴｅｒｍｉｔｏｍｙｃｅｓ

ｏｎ

关于鸡拟菌菌丝生长适宜的ｐＨ值范围有关报道存在一定差异，赵呈裕等曾报道鸡拟菌菌丝体

深层发酵的最适起始ｐＨ值为６～７［１０。，本文的实验结果与朱必凤等‘７］及陈宛如等‘８３的报道比较一致，

ｍｙｃｅｌｉ—

菌丝体干重／ｇ

培养基

Ｔｂ－２１３

Ｔｒ－７０２

我们认为鸡拟菌菌丝最适宜的ｐＨ值范围在４．Ｏ～

４．７之间。

有关鸡拟菌属生活史Ｅｎ，１２３及其分生孢子Ｄｓ，１４］、

小白球等无性阶段［８３的研究报道较多，然而对于分生孢子萌发特征和萌发影响因子方面未见详细报

道。本实验中鸡拟菌分生孢子在Ｃｚａｐｅｋ等普通的

合成培养基中不能萌发，添加马铃薯浸汁、酵母膏等成分后萌发率都接近９５％，说明其分生孢子萌发也需要某些刺激因子或适宜的营养条件。

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ＣＨＥＮ

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