稻草秸秆中木质素_纤维素测定方法的研讨
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稻草秸秆中木质素_纤维素测定方法的研讨
《上海畜牧兽医通讯》 2001年第2期
·15·
稻草秸秆中木质素、纤维素测定方法的研讨
薛惠琴 杭怡琼 陈 谊
(上海市农业科学院畜牧兽医研究所 201106)
测定木质素、纤维素含量的方法很多,如纤维素含量的测定方法有浓酸水解定糖法、硝酸乙醇法、氯化法等;木质素含量的测定方法有浓酸水解法、紫外分光光度法、红外光谱定量分析法和同位素标记法。由于红外光谱法和同位素标记法对实验室要求较高,所以应用并不普遍。。、2MHCl法、72%H24水解及运用,、纤,3h,。现将方法介绍如下:
2 结果与讨论
本测定方法是在原有方法基础上加以改进,按照王玉万(1987)半纤维素、纤维素、木质素系统定量分析程序方法,纤维素测定前两步同上面方法(1.3.1、1.3.2,1.3.3)采用丙酮洗2次,60℃干燥,然后置入100ml烧杯,加入10ml72%H2SO4,20℃水解3h,然后加入90ml蒸馏水,室温过夜,次日用已称恒重的3号砂芯坩埚过滤,水洗残渣至pH6.5,将滤液经适当稀释,取1ml稀释液加4ml蒽酮试剂,100℃保温10min,于620nm测OD由葡萄糖标准曲线求出糖量,乘上系数0.9,求得纤维素,将残渣80℃烘干,干燥器冷却30min,称重;在550℃马福炉中灰化4小时,干燥器冷却30min,称重,前者称重数减去后者称重数即为木质素含量。而经我们改进后的方法就直接按上面方法(1.3.3,1.3.4),所测结果见表1。
表1 三个菌株在不同培养时间的木质素 和纤维素的含量 (单位:%)
菌株木质素纤维素
0天
7天
14天21天28天35天42天49天
1 材料与方法1.1 材料
稻草经机器粉碎成1cm长细秸,粉碎成1cm长稻草粉分别经Z17、921和1024三种白腐真菌菌株发酵,每周取样一次,共7周。
1.2 主要试剂
中性洗涤剂:按VanSoest方法配制;
2M盐酸溶液:167ml浓盐酸(比重1.19)用蒸馏水定溶至1000ml;
72%浓酸溶液:665mlH2SO4(比重1.84)加入300ml水中,冷至20℃,补加水至1000ml。
Z1716.6313.7612.7812.0111.5911.0210.349.8992116.6314.0413.1912.6811.9811.1810.7310.3102416.6314.4313.5812.5912.0511.4211.0210.87Z1730.3528.7426.9625.8624.9924.2923.9223.1292130.3528.7326.5625.2124.2623.8523.4222.72102430.3528.6227.5627.0626.6225.8825.525.03
1.3 方法
取经80℃3h烘至衡重的三个菌株各5g。
1.3.1 取1.0000g样品置于100ml碘瓶中,加入70ml中性洗涤剂,之后放入已沸的高压锅,100℃保温40min,115～121℃保温20min,取出用3号30ml沙芯坩埚过滤至pH6.5～7.0,依次用95%乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤2次,将残渣置真空干燥器中,干燥20min。1.3.2 将残渣连同坩埚置于100ml烧杯中,加入70ml2M盐酸溶液,然后放入已沸的高压锅,100℃保温50min,过滤至中性,依次用95%乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤2次,残渣80℃烘至衡重为W1。
1.3.3 将残渣连同坩埚置于150ml烧杯中,加入10ml致冷的72%硫酸,20℃降解4h,后加入90ml蒸馏水,室温过夜,次日用蒸馏水洗残渣至pH6.5,烘干至衡重为W2,W1-W2为纤维素的含量。
1.3.4 将残渣在550℃马福炉中灰化,干燥器中平衡,W3 三个菌株的木质素由接种前含16.63%经49d培养分别减少至9.89%、10.30%、10.87%,纤维素含量由接种前含30.35%经49d培养后分别减少至23.12%、22.72%、25.03%,说明木质素、纤维素含量都明显减少,同我们以往所做的分析结果基本相似。并且有以下几方面优点:(1)节约试剂:按照王玉万(1987)方法,纤维素含量的测定需要蒽酮试剂,并且蒽酮试剂需要现配现用,相对来说我们的方法比较简便,同时减轻了工作量;(2)减少人员,节约电源:王玉万的方法灰化需要4h,现在只要3h就可灰化好。而且所测结果同以往我们所做的分析结果基本相似。说明在不考虑酸溶木质素含量和不需了解培养物中木质素、纤,
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