分子生物学论文

猪附红细胞体的分子生物学诊断的研究进展

摘要：附红细胞体病( eperythrogoonosis)是由附红细胞体(Eperythrozoon)感染机体而引起的人畜共患传染病， 按其主要特征应属于血液病.1928年，由Dingen和Schlling从啮齿动物血液中首次发现附红细胞体(Eperythrozoon).至今，附红细胞体病已流行于30多个国家和地区，该病属于人畜共患病，可感染包括人、猪、马、羊、牛、鸡在内的多种动物，因此该病也具有重要的公共卫生学意义.附红细胞体是寄生于细胞表面、血浆及骨髓中的一群微生物， 目前国际上广泛采用1984 年版《伯杰氏细菌鉴定手册》进行分类， 将附红体列为立克次氏体目、无形体科、血虫体属也称附红细胞体属( Eperythrozoon) 迄今已发现和命名的附红体有14种，在不同动物中寄生的附红体各有种名，如人附红体(E.humanus) 、绵羊附红体(E.ouis)、温氏血虫体( E.wenyoni)、猪附红体(E.suis) 、牛附红体( E.teganodes)等.本文就猪附红细胞体的分子生物学诊断做以简述.

关键词：附红细胞体，PCR,分子生物学，人畜共患病

1、附红细胞体病的分布和危害

附红细胞体病为人畜共患病，该病不仅危害人类健康，同时存在非常普遍，也引起动物的发病和死亡，给畜牧业带来了很大的经济损失，已开始受到各国畜牧兽医界，外贸界的高度关注，同时这种人畜共患病对人类的危害也正受到医学界的注意人感染附红细胞体以后虽然不出现临床症状，但却增加了对其它疾病的易感性，同时人感染本病后通过输血和垂直传播途径引起其它人群和胎儿感染，随着人附红细胞体病临床病例的增多，近几年家畜附红细胞体病的爆发和流行从公共卫生的角度也引起了人们极大的重视.

猪附红细胞体病己被广泛报道,包括北美和南美,非洲,欧州和亚州，目前世界各人洲的30多个国家和地区均有发生和流行,资料表明目前附红细胞体病已广泛分布于世界各地,先后已有美国、南非、阿尔及利亚、肯尼亚、伊朗、法国、挪威、英国、芬兰、澳大利亚、前苏联、日本、荷兰、马达加斯加、葡萄牙、尼日利亚、西班牙、奥地利、比利时、印度#以色列、朝鲜、新西兰、埃及、南斯拉夫、阿根廷、巴基斯坦、匈牙利、爱尔兰、德国、占巴、意大利、丹麦、捷克、莫桑比克、巴西、中国等国家和地区报道本病，从90年代末期开始有关附红细胞体病的报道日渐增多至今,我国很多省市都陆续报道了绵羊、山羊、牛、马、骡、驴、猪、犬、鼠、兔、鸡、骆驼、猫、狐、貂等多种动物的附红细胞体病,证明这种病在我国广泛存在,其中关于猪的报道占绝大多数,在山东、山西、宁夏、甘肃、云南、江苏、辽宁、河北、广东、陕西、内蒙、江西、上海、浙江、广西、湖南、湖北、江西、河南、新疆、安徽、天津、北京等省市都有关于附红细胞体病的报道,1254/9]近年来,我国猪附红细胞体病的发生和流行呈明显的上升趋势,有些省份为爆发性流行,尤其是对仔猪的危害更为严重,许多猪场损失很大,给养猪业的发展造成了很大的经济损失.

2、猪附红细胞体的诊断方法的研究进展

目前对附红细胞体病最常用诊断的方法是血液涂片染色镜检和直接血液压滴镜检方法，较为直观，对仪器要求不高.然而这种方法有一定的局限性，因为病原体存在于外周血液中的现象有一定的周期行和暂时性，常常有受到诸如血液里的一些相近病原体、不明微生物、非病原微生物、染料颗粒等非特异性因素的干扰.

分子生物学诊断:1990年obesrtRD等用umbdagtll构建了一个猪附红细胞体的基因组文库,从该文库克隆的DNA片段ksu一2被鉴定后作为一个诊断探针ksu一2探针与纯化的.Eusis生物体和来自于寄生Eusis的脾切除猪血样杂交十分明显1156、1990年obesrt.RD

等分离到高质量的纯的猪附红细胞体DNA,用全基因组DNA作为杂交探针来检测被寄生的猪,可以区分没有感染的和对照及感染寄生虫的三种猪血样1993年owaltneysM等将E.suss的基因组从感染E.suis的猪血中抽提出来,通过PCR产生了一个492bp长度的扩增产物；这个扩增的产物成功地和上述DNA探针进行了杂交,并从该探针中筛选出引物序列；敏感性研究表明,总Esuis的基因组在低达450pg的量的情况下可以进行PCR产物的扩增当用PCR对脾切除的感染Eussi的猪血样进行扩增时,可以检测到早达2h4内感染的样品这个研究初步表明PCR可作为一个有效的检测猪Eusis感染的方法llooj1994年GwatlneysM等用一个改进的PCR方法测定了实验感染未切除脾的猪血中Eusis的DNA,这种方法利用以前描述的Eusis特异性引物和一个专有的DNA释放剂,用2步循环扩增492bp的DNA片段用这种PcR方法从所有感染后的猪血样和感染前猪血样中成功地扩增到了血液中Esuis的DNA,表明以前存在自然感染l.1999年MessikcJB等对E.suis的165rNRA用特异性引物进行了扩增,扩增出165rRNA的1394bp,690bp和839bp的片段,并通过定量竟争PCR估计Eusis检测限为57一800个生物体,用这种方法可以很好地检测E.sulsll.212003年LuwdgiE等基于新的DNA序列建立一种新的PcR方法来鉴定E.suis感染的猪,用DNA测序分析证实了DNA片段的特异性,用该方法仅仅从Eussi中扩增出78bp大小的PCR产物；通过斑点杂交证实了PCR结果,Esuis的特异性片段从所有急性病例的样品中都得到了扩增,同样从潜伏感染的携带动物样品中也得到了扩增11581,表明该方法是一种很有效的检测方法.

3、猪附红细胞体的分子生物学检测人展望

结合实际情况,对猪附红细胞体的检测要求具有高敏感性、高特异性,以保证其能有效针对各种程度和类型的感染做出准确的检测,此外基于猪附红细胞体病常集中于基层养殖场高发的状况,还需要考虑对检测的成本及耗时进行压缩,以便于应用和推广.PCR-ELISA检测技术将聚合酶链反应与酶联免疫吸附检测有机地结合在一起,综合了 PCR能扩增放大基因信号和ELISA可准确客观读取结果的优点,在保证特异性的前提上,在敏感度和安全性上都更优于常规PCR方法,并且其单次检测量大,检测成本适中,是适于猪附红细胞体检测的良好方法.

参考文献：

[1]贾杏林，猪附红细胞体分子诊断与致病机理的研究[J],中国农业大学.

[2]于文政，猪附红细胞体病PCR检测方法的建立[J],延边大学.

[3]曹建华，猪分子生物学数据库的建立及其初步应用[J]，华中农业大学.

[4]蒋明德，曾维政，分子生物学技术[J],成都军区总医院消化内科.

[5]郑岩，猪附红细胞体的体外增殖及分子生物学诊断的建立与应用

课程论文作业

姓名：谢若维

学号：

专业：草业科学

学院：动物科技学院 112014328040030