不同提取方法对麻黄中麻黄碱提取得率的比较研究

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　　南京中医药大学学报

　　2004年5月第20卷第3期

　　210029)沈红,狄留庆,黄耀洲　(南京中医药大学新药及海洋药物研究开发中心,江苏南京　

　　摘要:目的　比较优选麻黄浸提方法。方法　以盐酸麻黄碱为化学成分指标,对中药麻黄5种提取方法(半仿生法、水煎煮法、温浸法、酸性乙醇回流提取法、水蒸气蒸馏法)进行平行比较研究。结果　麻黄碱的提取得率为半仿生法水煎煮法酸性乙醇回流提取法温浸法水蒸气蒸馏法。结论　半仿生法提取效果最好。关键词:麻黄;浸提方法;麻黄碱;提取得率

　　中图号:R284.2　文献标识码:A　文章编号:1000-5005(2004)03-0170-03

　　麻黄为麻黄科植物草麻黄(Ephedrasinica

　　Stapf)、中麻黄(EphedraintermediaetCAMey)或木贼麻黄(EphedraequisetinaBge)的干燥草质茎,是

　　中医临床常用的药物之一,具有发汗解表、平喘、利水等功效,常用于治疗风寒表症。不畅、2.1　麻黄浸提方法,如何提高麻黄2.1.1　半仿生提取方法[1]生物碱在制剂中的提取得率是工艺研究的主要内容之一。有关麻黄中麻黄碱的提取方法文献报道的有半仿生法、水煎煮法、温浸法、酸性乙醇回流提取法、水蒸气蒸馏法。本实验以麻黄碱为标准品,采用HPLC对提取物成分进行含量测定,对中药麻黄5种提取方法进行平行比较研究,为进一步考察麻黄的提取工艺奠定基础。1　仪器及试剂1.1　仪器

　　Waters高效液相色谱仪;600E型输液泵;2487型紫外检测器;CAPULUGSRC2Ⅱ进样器,Millenni2

　　μum32工作站;LichrospherC185m4.6mm250mm

　　柱;YXJ22台式高速离心机;BP211D德国Sartorius电子天平;色谱恒温仪(南京谐和色谱配件研究所)。

　　1.2　试剂及药品

　　盐酸麻黄碱(中国药品生物制品检定所,批

　　收稿日期:2003-12-08;修稿日期:2004-02-08基金项目:江苏省教育厅自然科学基金(99KJB360004)

　　作者简介:沈红(1979-),江苏昆山人,南京中医药大学2001级硕士研究生。

　　号:071429903);甲醇(江苏汉邦科技有限公司,批

　　号);三乙胺(,);(,批号:,经鉴定符合

　　取麻黄20g,平行5份,分别加10倍量水,用盐酸调pH1,浸泡0.5h,煎煮1h,趁热滤过,药渣加8倍量水,NaOH调pH10,煎煮2次,每次0.5h,均趁热滤过,合并3次滤液,取1/3液体,80℃0.08MPa减压薄膜浓缩成浸膏,备用。2.1.2　水煎煮法

　　取麻黄20g,平行5份,加10倍量水浸泡0.5h,煎煮1h[2],趁热滤过,药渣加8倍量水再煎2次,每次0.5h。合并3次滤液,取1/3液体,80℃0.08MPa减压薄膜浓缩成浸膏,备用。2.1.3　温浸法

　　取麻黄20g,平行5份,加10倍量水,先冷浸0.5h,再80℃温浸1h[3],趁热滤过,再加8倍量水,80℃0.08MPa温浸2次,每次0.5h,合并3次滤液,取1/3液体,80℃0.08MPa减压薄膜浓缩成浸膏,备用。

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　　2.1.4　酸性乙醇回流提取法1504.175,r=0.9997,线性范围199.8～999.0

　　取麻黄20g,平行5份,加10倍量70%乙醇,用盐酸调pH1,浸0.5h,回流提取1h,趁热滤过,再加8倍量70%乙醇回流提取2次,每次0.5h,合并3次滤液。取1/3液体,80℃0.08MPa减压薄膜浓缩成浸膏,备用。2.1.5　水蒸气蒸馏法

　　取麻黄100g,先用少量水润湿,用NaOH调pH12,浸0.5h,水蒸气蒸馏得蒸馏液700mL,备用。

　　2.2　麻黄碱的HPLC含量测定方法学研究2.2.1　色谱条件

　　LichrospherC18dp5μm4.6mm250mm色谱

　　μg/mL。

　　2.2.3　精密度

　　取浓度为799.2μg/mL的标准液,连续进样6次,每次20μL。结果RSD=0.83%,符合规定。2.2.4　稳定性

　　取2.1.4项下样品,处理成供试液,每2h进样1次,每次20μL,共6次。结果RSD=2.997%。2.2.5　重现性取2.1.4项下所得溶液的2/3,70℃减压薄膜浓缩成浸膏5.9279g,取0.4g左右,精密称定,用甲醇8mL超声10min,转移至离心管中以3000r/min离心10min,取上清液定容至10mL,高速离心(20000r/min)2min。按以上方法平行取6份,

　　L。结果RSD=1.%,并得到该浸每份进样20μ

　　2.1.18g,平93份为1组,分别加入0.9332mg/mL的标准液1.6mL、2.0mL、2.4mL各3份,分别

　　柱;流动相甲醇20.02mol/L乙酸胺20.5%三乙胺

　　(50∶25∶25)[4];流速为1mL/min;检测波长257nm;柱温30.2℃。

　　2.2.2　麻黄碱标准曲线的绘制

　　精密称取盐酸麻黄碱49.95mg,用甲醇溶解定容至50mL。精密吸取该母液2mL、4mmL、8mL至10mL量瓶中,容,0.1998mg/L、0.6L0.7992m的标准液。每L,按色谱分次,每次进样20μ

　　析条件测定色谱峰面积,以此为纵坐标,标准液浓度为横坐标,得标准曲线:Y=408.6175X-No.123456789

　　加入甲醇8mL超声10min,转移至10mL量瓶中,最后用甲醇定容至刻度。每份进样2次,每次20μL。结果RSD=2.21%,见表1。

　　表1　麻黄碱加样回收率试验

　　含量/μg

　　151.2161.4161.0163.6164.4165.3169.5168.3169.9

　　加标量/μg

　　149.3149.3149.3186.6186.6186.6224.0224.0224.0

　　测得量/μg

　　304.2318.0317.8352.4348.7357.7392.6393.8393.8

　　回收率(%)

　　102.4104.9105.0101.298.8103.199.6100.7100.0

　　平均含量(%)RSD(%)

　　101.72.2

　　2.3　麻黄药材及其不同提取物中麻黄碱的含量

　　μL。结果见表2。

　　表2　麻黄药材中麻黄碱的含量

　　No.含量(%)123

　　0.5270.5200.517

　　0.521

　　0.980

　　测定

　　2.3.1　生药中麻黄碱的含量测定

　　按《中国药典》一部(2000年

　　)[5]麻黄含量测定方法中药材项下的处理方法制备样品3份,挥去溶剂,用甲醇定容至10mL,取2mL加甲醇至10mL,离心,取上清液,每份进样2次,每次20

　　平均含量(%)RSD(%)

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　　2.3.2　不同处理方法所得样品中麻黄碱的含量

　　测定

　　取5种方法所得药液的1/3,减压浓缩成稠

　　提取方法

　　半仿生法水煎法温浸法有机溶媒法

　　浸膏得率(%)

　　47.136.828.539.5

　　膏(水蒸气蒸馏法除外),取稠膏的2/15左右,加甲醇8mL超声10min,定容至10mL,离心后,每份进2次,每次20μL。结果见表3。

　　平均得率(%)

　　94.288.353.987.1

　　RSD(%)

　　P值

　　表3　不同浸提方法浸提麻黄中麻黄碱含量的比较(n=5)

　　麻黄碱含量(%)

　　0.4910.4600.2810.454

　　2.342.591.363.01

　　0.01200.004

　　注:水蒸气蒸馏法所得药液经NaOH调pH后,用氯仿多次萃取后挥去溶剂,最后用甲醇定容,进样后在相应保留时间无峰。

　　结果表明,经q检验,对麻黄中麻黄碱的提取,半仿生法与水煎煮法、温浸法、酸性乙醇回流提取法存在显著性差异,麻黄碱的提取得率为半仿生法水煎煮法酸性乙醇回流提取法温浸法水蒸气蒸馏法,半仿生法提取效果最好。3　讨论

　　点,又有利于用单体成分控制制剂质量。麻黄药

　　材调pH1后,碱性成分成离子态,易溶于水,以盐酸麻黄碱作为定量指标,用HPLC法测得得率较其他方法高。且之后又调pH10可将部分碱性成分游离,脂溶性大,易被人体吸收。故该方法提取麻黄中的有效成分较科学。

　　参考文献:

　　[1],,.由各方法所得样品含量测定结果,经多组样本均数比较(q检验),知半仿生法、煎煮法及有机溶剂法与温浸法相比较均数均有显著性差异,半分析中,,又考虑到活性混和成分,以单体成分做指标和(或)适宜的药理模型做指标,提取活性混合物,这样单体寓于混合物中,即

　　[6]

　　融成一个新的统一体,称之为“活性混合物”。这样做既能充分发挥混合物成分的综合作用特

　　[J(),,.中国实验方剂学杂志,1995,1(2):44.

　　]刘昌美,陶建生.中药麻黄浸提方法的比较研究[J].上

　　海中医药杂志,2000,(4):47.

　　[4]庞磊,李久彤,阎明.高效液相色谱法测定麻黄浸膏粉

　　中总麻黄碱含量[J].新疆中医药,2000,18(1):14.

　　[5]中华人民共和国药典委员会.中国药典(一部)[S].广

　　州:广东科技出版社,2000.262.

　　[6]张瑞亭,张兆旺,孙秀梅.思维方式的转换与中药“半仿

　　生提取法”[J].中国中药杂志,1997,22(9):542.

　　EffectofDifferentExtractionMethodsonEphedrineExtractionYieldSHENHong,DILiu2qing,HUANGYao2zhou

　　(ResearchInstituteofNewDrugsandMarineDrugs,NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanjing,JiangsuProvince,

　　210029,China)

　　ABSTRACT:OBJECTIVE　TocomparebetweendifferentmethodsofextractionofHerbaEphedrae.METHOD　Withephedrinehydrochloridumasthechemicalindex,fivemethodsofextractionofHerbaEphedrae(semi-bionics,decoction,warm-soaking,acidalcoholrefluxextraction,distillation)werecompared.RESULT　Theoptimalextractionmethodsforephedrinewereinthefollowingorder:semi-bionics,decoction,acidalcoholrefluxextraction,warmsoakinganddistillation.CONCLUSION　Semi-bionicsistheoptimalmethodofextraction.

　　KEYWORDS:HerbaEphedrae;extractionmethods;ephedrine,extractionyield