动物细胞培养技术Word

　　第二 动物细章胞养技术培

　　第节一 动细物培养胞本基识知一(前)言(二培)养细胞的特(三性培)养细胞长的条件生

　　四)(胞细培养室设的、设备及置备准作工五()细培胞养液及用养培基

　　一()前言

　　细 胞培与养组培织动养细胞与组物培养是织动从体物取内出胞或者细织组模 ，体拟的内生理环境，在无菌适、温丰和富营的养件下条 使，体细胞离或者织生存组、长生并维持构和功能结的一门 技。是动物细术胞程的基础工。

　　组织养是指把活培的体一片组织小于底物上置育孵细，自胞 周围移其出并生。长 细胞养培指是取得的组把用织械机或消的方法化散分成单 细个悬液胞然，后进培养行 。二实际者区别大不，器与官养相区培别。

　　组织或胞细养的培主优点：要

　　(1)究研象对是活胞细 (2研)究条件可人为控 (3)制研究样本达到相对可均性 一()4究内容研便于观察、检测记和录 (5)究研范较广 (6围)究研对较相经济

　　外培养体胞与细体内存在异差细胞离体，后去了失神经体液的和调，节形其态功和能 发会生定改一变因。,培养此中的胞可视细为一种在 特定件下的条细胞群体它们既，保持了体内原细 一定的胞状又性一有不些于体同细胞内的性状。细胞一旦被置于体外养培后差异就开始，生：分发 化现减象，弱态功形趋于能单化一生，一段存间时后衰 退死；或亡发生化转变连续成细系胞。

　　虽然体培养外的细与胞内细胞体有差异存， 并但未去失研的究义。其有意许多状仍与性 内相体，同从细胞遗传学(ytoC-egetncsi)的 度看，离体细角仍带有全胞的套二体倍基因 细。胞在培中的表现，只不养过是应相基因 闭/关启引起开的象现这并，是绝对缺 非。陷恰恰反相，在养的细胞中培某些特功 定的能失丧可为该，因的基表与达调控供线 提索

　　。()培养细胞二特性的

　　培细养胞生长方的式及型类按其生长方式可分为附贴型悬浮和型两大 贴附类型为附着底于物面表长的细生，胞外体养培的 大多数细以贴胞附方生式。又有长以4下型：

　　纤成维细胞：型体呈梭胞型或不则三规角形中央，有卵圆核， 生形长时呈射状。凡由放胚中层充质间起的细胞属源此型。 上皮胞细：型细胞呈扁平不则规多形，中角央圆形有，核胞 彼此细密紧连成相层单。来源于外胚层膜和内层的细胚属胞此型 。游走细型胞：散呈在生长，般不连成一片胞质常突，起呈， 跃游走或活变运动形，向方规则。类似不巨细胞样的噬征特 。型细胞多型有：些细一胞如，神经胞，难细以确其定律和稳规定的形态 可统归于，此类。

　　3

　　T3

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　　海马神经

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　　悬浮型见于少数胞类细，体型培外时养附不于着底，悬物在培养浮液生中长。括包些血、一脾骨或的细髓 及胞白病血胞。细这类胞细易容大繁量、传代殖方便、易 收集。

　　培养胞细生的特长点贴附和伸 接触抑展制生和的长密度抑制

　　培细胞的养长生过程原培养与传代培养 代胞系与细胞细株原培养代pri(mry aclture):是u指培养将放物置在体 外养，培中途不分割培养物过的程即 。从内体出取组织接到第一种次传的代阶段。传 代养(sub培culute ro pasrags):是指e当细 胞殖到一增密定后，需要分度出部一细分并胞 换培养液更过的。程问题：上以“代的与”细胞代世(genertioa)n的代”“同相

　　细胞系cell(l ien)原：代养培的胞细经一传成代功即为成细胞系 一般正常细胞。系的寿命只能持一定维期限，为称 限有胞系细f(iitencell l ne)i其长短取。于决细胞的来 以及源养条培。件 以连可传代续的连为细续胞系(cnoinuotu sclleline)

　　胞细株(ecl strlian)从原代：培养物或胞细系获得的中有具殊特性或标质的细胞称为细胞株。志特其殊性质 或志标须必整在个养期培间始终存在。传代后

　　代每细胞生的过长程可分三为阶 段(1滞留期)包：括悬浮(期游离)期及 潜伏期，一为2般496~时小，连续细胞系可小 于4小2。时( 2指数)生期：(对数长生期)长此细期 胞殖增盛，活旺最力佳可维，3~5天持 (3)。台平：(期长生止期)此停不期增 殖，再即达生到长和饱密度，及应传代时

　　。外体培养胞的寿细命过程分为三个阶段可

　　1(原)代或初代培养期一般为1:~周， 通4为异质常，细胞移动较性跃，有细活胞 分裂不但盛，细胞旺体内相应与胞 的细状性相。似( )2代传：细胞增殖旺期盛。 ()3衰期退有：限细系在胞此仍存期但 活殖很增缓慢至直完停止，全而退进化、死亡 。

　　培细养的胞生长件营养条(1基)本营养物 (质2促生)长因等物子质环 境(1)度温 (2)p及H气 (3)渗相透压

　　无染污无毒、

　　细培胞养的室置设、备设培养基及标准的细胞养培应包室括备室、缓冲准室 培和室养

　　设置

　　备 超设台净、培养箱、置相差显倒镜微冰箱、、离心机、 冷冻贮存置装、水化装置纯、细胞计数板 pH计、、天、平高蒸汽消毒装置压 、干燥、箱滤过除装菌及培置养用器皿的具() 等

　　无菌室超净 台

　　置倒显镜微解与镜剖

　　PH

　　计天

　　平

　　菌灭

　　离心机

　　锅液氮罐

　　胞培养细箱

　　纯仪水

　　胞细养培瓶

　　等

　　养用培液包括培养(基液、)冲液缓平衡盐溶液、、化消液等。水 体 培外细胞养水对的质量很敏感培养用的，必须水经过纯化， 应选三蒸用水或超水。

　　纯缓液冲体外养培用的冲缓液一般要求Hp.7~7.2。 最常用4 的冲剂缓碳是氢钠。酸平衡盐溶液(albanec sadtl slutoino ,BS)S兼具维持透压渗、冲溶缓酸液度，同时供碱能给 量和无离机子的用 。作