鱼回鱼鱼皮胶原的提取及性质研究

鲴鱼鱼皮胶原的提取及性质研究

鲍士宝１，王

璋２，许时婴２

１（江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡，２１４１２２）２（江南大学食品学院，江苏无锡，２１４１２２）

摘要利用醋酸及胃蛋白酶从鲴鱼鱼皮中提取了胶原，并对其物理与化学特性进行了探讨研究。结果表明：

提取的胶原属于典型的Ｉ型胶原，胶原的三股螺旋分子组成为［口。（Ｉ）］：讹（Ｉ）。氨基酸组成及变性温度的分析说明提取的鲴鱼皮胶原由于其自身亚氨基酸含量的特征，使得它的稳定性远远高于其他鱼类的皮胶原，但仍然比大多数哺乳类动物皮胶原稳定性要弱。紫外扫描光谱、傅立叶红外光谱及圆二色性研究结果证明提取的胶屎三股螺旋结构保持完整。

关键词

鱼回鱼鱼皮，胶原，提取，性质

胶原是自然界普遍存在的一类蛋白质，是结缔组织的重要结构蛋白，起着支撑器官、保护机体的功能［１’２］。同时作为动物体内含量最多、分布最广的一类蛋白质，它们被广泛应用于食品、化妆品及制药工业［３￣６］。随着胶原需求量的越来越大及食品安全等因素，传统的从牛、猪等哺乳类动物获取的胶原已经不能满足人们的需要，近年来，对水产动物胶原的研究越来越引起人们的关注。鱼类的皮、骨、鳞等部位含有丰富的胶原蛋白，而在鱼产品加工生产过程中会产生大量的皮、骨及鳞等下脚料，从这些下脚料中提取胶原加以利用，既可以提高鱼产品加工业的经济效益，又可以减少下脚料废弃物造成的环境污染。

斑点叉尾鱼回鱼是大型的淡水鱼类，我国于１９８６年由湖北省从美国引进并养殖成功。近几年中国斑点叉尾鱼回鱼养殖产量急剧上升，但国际市场上斑点叉尾鱼回鱼加工产品仍然供不应求，２００７年１～４月份，仅美国从中国进口的斑点叉尾鱼回鱼就已达到６

８５６

有限公司），丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、溴酚蓝及过硫酸铵都是电泳纯，冰乙酸、无水乙醚、盐酸、乙二醇甲醚及氯胺Ｔ等化学试剂均为分析纯。

ＪＢ３００～Ｄ型强力电动搅拌器（上海标本模型厂），ＤＤＳ—ＩＩＣ电导率仪（上海精密科学仪器有限公司），４Ｋ１５型冷冻离心机（ｓｉｇｍａ公司），ＬＧＪ一１０型冷冻干燥机（北京四环科学仪器厂），垂直板电泳仪（美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司），ＨＰｌｌ００氨基酸分析仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司），ＰＹＲＩＳ一１型差示扫描量热仪（英国

Ｐｅｒｋｉｎ

Ｅｌｍｅｒ公司），ＵＶ—１１００型紫外可见分光光

度计（北京瑞利分析仪器公司），Ｎｅｘｕｓ型傅立叶变换红外光谱仪（美国ＴｈｅｒｍｏＥｌｅｃｔｒｏｎ公司），Ｊ７１５型圆二色光谱仪（日本ＪＡＳ—Ｃ０公司）。

１－２实验方法

１．２．１

原料的预处理

解冻鱼皮用刀刮去表皮粘质及残留碎肉，然后用冷水冲洗干净，放人绞肉机中绞成约ｏ．２

ｅｍ×０．２

ｔ，随着国内养殖产量的继续攀升，加工中将会产

生大量的皮、骨、鳞等下脚料。本文以斑点叉尾鱼回鱼鱼皮为原料，采用酸溶与酶促溶的方法提取鱼皮胶原并对其性质进行了研究，旨在为鱼圊鱼鱼皮的利用提供基础资料。

１

ｃｍ的碎块。用无水乙醚：鱼皮（ｍＬ：ｇ）一１０：１于４℃条件下冷浸脱脂４８ｈ，再用冷水冲洗干净。取１０ｇ脱脂后的皮块用１００

ｍＬ０．１ｍｏｌ／Ｌ

ＮａＯＨ溶液在

４℃下浸泡３ｈ，搅拌，脱去杂蛋白等非胶原物质，去杂蛋白结束用去离子水反复冲洗，去除皮块表面残留碱液。

１．２．２胶原提取

将预处理过的１０ｇ鲴鱼鱼皮浸于２００ｍＬ提取２４ｈ后，用纱布过滤，滤液在１０

０．５

材料与方法

１．１材料与仪器

斑点叉尾鲴鱼鱼皮由武汉德炎水产品有限公司

提供，一２０℃保存；胃蛋白酶（１：１００００，Ｓｉｇｍａ公司），牛跟腱工型胶原蛋白标准品（上海博蕴生物科技

第一作者：博士研究生（王璋教授为通讯作者）。收稿１３期：ｚ００８一０５一１４，改回日期：２００８－－０７－－１ｉ

ｍｏｌ／Ｌ醋酸溶液中，４＂Ｃ条件下搅拌提取可溶性胶原，

０００

ｇ、４℃条件

下冷冻离心。过滤及离心所得残渣用０．５ｍｏｌ／Ｌ醋

８４

２～０８Ｎｏ—．９（Ｔｏｔａｌ

Ｖ０１．３４

酸溶液在相同条件下再提取１２ｈ，提取结束后于

１００００

ｇ、４＂Ｃ条件下冷冻离心。合并２次离心清液，

２４９）

用浓ＮａＯＨ溶液盐析沉淀胶原；沉淀出的胶原复溶

于０．５ｍｏｌ／Ｌ醋酸溶液中，冷冻离心，弃去不溶物，上

清液用质量分数３０％的ＮａＯＨ溶液盐析沉淀；以上操作重复至沉淀出的胶原能够完全溶解于０．５ｍｏｌ／Ｌ醋酸溶液中为止，得到的最后沉淀物用去离子水在４℃透析，直至用电导率仪检测透析外液的电导率接近去离子水的电导率时透析结束，透析后的胶原样品冷冻干燥即为酸溶胶原（ＡＳＣ）。２次酸提取后的离心残渣悬浮于适量０．５ｍｏｌ／Ｌ醋酸溶液中，加入０．１％的胃蛋白酶于４℃作用２４ｈ，其后操作步骤与酸提取操作相同，所得的胶原即为酶促溶胶原

（ＰＳＣ）。

１．２．３常规成分分析

蛋白含量测定：ＧＢ／Ｔ５００９．５—２００３；脂肪含量测定：ＧＢ／Ｔ５００９．６－－２００３；灰分测定：ＧＢ／Ｔ

５００９．４

—２００３；糖含量测定：ＧＢ／Ｔ５００９．７—２００３。羟脯氨酸含量测定：将样品置于水解管中，加入６

ｍＬ６

ｍｏｌ／Ｌ盐酸，真空封管，１１０℃水解２４ｈ，蒸干盐酸，稀释，定容得水解液，采用ＷｏｓｓｅｎｅｒＩ法［７］测定水解液中羟脯氨酸含量。

胶原含量／％一（羟脯氨酸含量／１４．３）×１００

１．２．４

ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳

采用Ｔｒｉｓ—ＳＤＳ—ＰＡＧＥ不连续电泳系统，分离胶浓度８％，浓缩胶浓度５％，胶厚０．７ｍｍ，电泳条件

１０ｍＡＥ８｜。

１．２．５氨基酸组成分析

取适量提取胶原用６ｍｏｌ／ＬＨＣｌ，１１０℃真空水解２４ｈ，蒸干ＨＣｌ，定容得水解液。采用Ａｇｉｌｅｎｔｌｌ００高效液相分析仪分析氨基酸组成。高效液相色谱仪条件：Ｃ１８柱，４．０ｍｍ×１２５ｒａｍ；柱温，４０℃；流速，

１．０

ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长，３３８

ｎｍ，２６２

ｎｍ（Ｐｒｏ）；流动

相Ａ：２０ｍｍｏｌ醋酸钠液，Ｂ：２０ｍｍｏＶ（醋酸钠液）：

ｙ（甲醇）：ｙ（乙腈）＝１：２：２。

１．２．６

变性温度测定

将冷冻干燥的样品溶于０．５ｍｏｌ／ｍＬ醋酸中制成０．３ｇ／ｍＬ的胶原溶液，取１０弘Ｌ密封于液体坩锅内，置于差示扫描量热仪内，在２０～５０℃温度范围内扫描，升温速度１℃／ｒａｉｎ。

１．２．７

紫外扫描

将适量的冷冻干燥样品溶于０．５ｍｏｌ／ｍＬ醋酸中，在２００＂－－４００ｎｍ波长范围内进行紫外扫描，分辨摩０．５ｎｍ。

１．２．８傅立叶变换红外扫描

将冷冻干燥的１ｍｇ样品与１００ｍｇ纯ＫＢｒ粉末研磨均匀，置于模具中，在油压机上压片，采用傅立叶红外变换光谱仪在４

０００＂－－４００

ｃｍ叫波数范围内测

定吸收光谱，扫描次数３２次，分辨率４

ＣｌＴＩ一。

１．２．９

圆二色性

将冷冻干燥的样品溶于０．００ｌｍｏｌ／ｍＬ醋酸中配制成２０ｍｇ／Ｌ的胶原溶液，温度２５℃，比色皿光径

１

ｍｌｌｌ，分辨率１．０ｎｍ，扫描速率１００ｎｍ／ｍｉｎ，扫描５

次，测定２５０－－－１９０１１１１１范围的圆二色光谱图。

２

结果与讨论

２．１胶原的提取率及常规成分分析

脱脂去杂后的鱼皮脂肪含量低于１％，杂蛋白含量低于８％，胶原损失率低于２％。两步酸法提取的胶原量占到总胶原量的２０％，而后继步骤中利用胃蛋白酶可以完全促溶酸提后的鱼皮残渣，使难溶于稀醋酸溶液的胶原全部溶出。冷冻干燥后的最终胶原样品中，ＡＳＣ与ＰＳＣ的胶原纯度分别达到９２％和９６％，常规成分分析结果为：脂肪含量１％，总糖含量１．８％，灰分０．６％，总蛋白含量９６．６％。

２．２

ＳＤｓ－ＰＡＧＥ电泳分析胶原分子量分布

ＡＳＣ与ＰＳＣ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图显示，２种方

法提取的胶原与工型胶原标准品出带一致，至少存在２条不同的ａ链，其中１条ａ链分子质量略高于１１６ｋｕ，另１条ａ链的分子量在９０～１１０ｋｕ；在ｐ区有１条带出现，可能是其中２条Ｑ链的聚合物，分子量约为２００ｋｕ。另外，从图１中Ｑ。链与的ａ。链泳带的光密度可以发现，前者约是后者的２倍，根据已报道的对Ｉ型胶原分子结构的描述［９￣１１｜，推断ＡＳＣ与ＰＳＣ的分子组成应为［ａ，（Ｉ）］。Ｃｔ。（Ｉ）。

（１为高分子量标准蛋白，２、４为ＰＳＣ，３为ＡＳＣ，

５为牛跟腱Ｉ型胶原标准品）

图１

ＡＳＣ与ＰＳＣ的ＳＤ争ＰＡＧＥ电泳图谱

２．３胶原的氨基酸组成分析

２００８年第３４卷第９期（总第２４９期）ｌ

’’—‘。。’‘‘１。。’——１‘‘。＋１１。。‘。’１。—‘。‘——。。’。’—。。。。’—’‘。———’‘‘、‘’‘。‘。。’。—１‘——ｌ

８５

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表１ＡＳＣ与ＰＳＣ的氨基酸组成（残基数／１０００）

氨基酸猪皮胶原

草鱼皮胶原

天冬氨酸飘一７谷氨酸３

丝氨酸７

组氨酸６甘氨酸Ｏ苏氨酸４精氨酸４丙氨酸８酪氨酸蛇钉∞５弘孔＂弘Ｚ胱氨酸５缬氨酸７蛋氨酸３苯丙氨酸２异亮氨酸２亮氨酸１赖氨酸Ｚ

羟赖氨酸Ｏ羟脯氨酸１

脯氨酸亚氨基酸总量

ｇ；ｍ啪

６叮ＡＳＣ与ＰＳＣ的氨基酸组成分析结果见表ｌ，其中含量最高的甘氨酸分别占到３２％和３２．６０Ａ；丙氨酸含量较高，分别占到１１．８％和１１．５％；而作为胶原的特征氨基酸的亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）总量分别占２０．７％和２１．４％，低于猪皮胶原中的亚氨基酸含量，但比草鱼鱼皮胶原中的含量高［１２’”］。ＡＳＣ、ＰＳＣ中脯氨酸的羟化度分别为４８．８％和４９％，低于猪皮胶原中脯氨酸的羟化度５５．９％，但又远高于草鱼鱼皮胶原中脯氨酸的羟化度３４．９％。胶原氨基酸组成的另一大特点是芳香族氨基酸含量较少，ＡＳＣ与ＰＳＣ中芳香族氨基酸含量总和低于１．５％，且没有检出色氨酸。不同胶原氨基酸组成上的差别归因于胶原的来源、组织、生长环境以及生长年龄等因素的差异，而这种组成上的差别将会使得它们的某些物理化学性质产生变化，例如，胶原纤维的致密度、胶原的热稳定性、胶原的相对分子质量等。２．４胶原的热稳定性分析

图２是ＡＳＣ的差示量热扫描（ＤＳＣ）扫描图，从图２中可以看出，ＡＳＣ的变性温度为３４．３。Ｃ，高于一般鱼类皮胶原的变性温度，而仅比猪皮胶原的变性温度低４。Ｃｔｌ４￣１引。ＰＳＣ的ＤＳＣ扫描图与ＡＳＣ的结果一致。胶原分子的３股螺旋结构主要由氢键维持，这些氢键主要由甘氨酸、脯氨酸及羟脯氨酸参与形成，而其中脯氨酸、羟脯氨酸参与形成的氢键对维持三股螺旋结构的贡献最大［１７￣１９１，所以氨基酸组成中亚氨

８６

２００８Ｖｏｌ３４

Ｉ—。。。。‘。‘。。‘１。。’‘。‘。‘。。’。’‘。。１。’。。。。。。。‘。。。。。。。。。。。。。’。。’—。。——

Ｎｏ

９（Ｔｏｔａｌ２４９）

基酸含量及脯氨酸羟化度将决定胶原分子的稳定性。ＡＳＣ、ＰＳＣ、猪皮胶原以及草鱼鱼皮胶原的热稳定性与它们各自的氨基酸组成相符合。

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图２

ＡＳＣ的差示扫描量热图

２．５胶原的紫外吸收特性

图３是ＰＳＣ的紫外扫描图，ＡＳＣ的扫描结果与之基本相同。由于蛋白质分子中含有能吸收一定波长紫外光的生色基团，如芳香族氨基酸酪氨酸、色氨

酸、苯丙氨酸基团等，各种紫外生色基团的紫外吸收加和使得蛋白质溶液在紫外区存在着一定的吸收。芳香族氨基酸在２５０～２９０ｎｍ范围内有最大吸收，但ＰＳＣ与ＡＳＣ中芳香族氨基酸含量很少，所以吸收并不明显；从图３上可见，ＰＳＣ和ＡＳＣ在２００～２８０ｎｍ范围内都有一定的吸收，但在２３３ｎｍ处有最大吸收，这是胶原的特征吸收峰，主要是由肽键Ｃ＝Ｏ

的一７ｃ。跃迁所致ｎ，９］。

趔累督

图３ＡＳＣ的紫外扫描图

２．６胶原的二级分子构象分析２．６．１红外光谱分析

图４是ＡＳＣ与ＰＳＣ的傅立叶变化红外扫描图谱，两者的各特征吸收频率几乎完全一样，仅仅在某些特征频率上存在吸收强度的差别。其主要吸收带为酰胺Ａ（３３１６．８５

ｃｍ一１）、酰胺Ｉ（１

６５３．１５ｃｍｌ）、酰胺１Ｉ（１

５５７．３０

ｃｍ－１）和酰胺Ⅲ（１

２４１．０６ｃｍｌ），

分别反映了Ｎ—Ｈ的伸缩振动、Ｃ＝Ｏ的伸缩振动、Ｎ—Ｈ的弯曲振动和Ｃ—Ｈ的伸缩振动［２０｜。在３

０８０

～３１００ｃｍ＿１范围内没有出现酰胺Ⅱ的费米共振即

酰胺Ｂ特征吸收，但在２

９２６．６４

ｃｍｌ存在着ｖａｓ（ＣＨ。）的特征吸收，这是胶原分子不同于其他一般蛋白质分子的特异之处。由于Ｎ—Ｈ基团与其他基团形成的氢键的影响，使得胶原的酰胺Ａ带出现在３

３１６．８５

ｃｍ～，较一般蛋白质的３４００～３

４５０

ｃｍ－１发

生了移动；酰胺Ⅱ带位置出现在１５５７．３０

ｃｍ～，可能

是水分子的影响，使得其在１

５３０ｃｍ．１～１５７０ｃｍ．１

范围内移动Ｅｚｌ，２ｚ］。酰胺Ｉ带与酰胺Ⅲ带与蛋白质的二级结构密切相关，实验制取的ＡＳＣ与ＰＳＣ的ＦＴ—ＩＲ图谱与其它报道的胶原的ＦＴＩＲ图谱相比较，可以证明ＡＳＣ与ＰＳＣ保存有比较完整的三股螺旋结

构‘９’１０ ２３『。

堡解鬟鲴

Ｆ

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０００

３０（砌

２（１００

ｌ０００

波数］ｃｒｎ－１

图４

ＡＳＣ与ＰＳＣ的傅立叶变换红外扫描图谱

２．６．２

圆二色光谱分析

图５是ＡＳＣ与ＰＳＣ的圆二色光谱图。由图５

可见，ＡＳＣ与ＰＳＣ在２２１ｎｍ都存在最大的正Ｃｏｔ—ｔｏｎ效应（蛋白质分子对左、右圆偏正光吸收的差值），在１９８ｎｍ都存在最大的负Ｃｏｔｔｏｎ效应，这是胶原三股螺旋分子的特征谱图［１３’２４矗５１。ＡＳＣ与ＰＳＣ相比，负的Ｃｏｔｔｏｎ效应要大，这可能与其末端非螺旋区占得比重大有关。表２是圆二色分析仪给出的ＡＳＣ曲所占的摩尔百分比以及Ｒｐｎ值（正Ｃｏｔｔｏｎ效应与负Ｃｏｔｔｏｎ效应的比值，反映了胶原分子中螺旋区域与非螺旋区域的相对含量）［２引。由表２的结果，可以看出ＡＳＣ与ＰＳＣ的二级结构相似，但由于ＰＳＣ末端

图５

ＡＳＣ与ＰＳＣ的原二色光谱图

肽非螺旋区被胃蛋白酶水解切去从而使得其Ｒｐｎ值较ＡＳＣ的要大。ＡＳＣ与ＰＳＣ的圆二色光谱证明了２种方法提取的胶原具有３股螺旋结构的明显特征。

表２

ＡＳＣ与ＰＳＣ中各构象摩尔百分比及Ｒｐｎ值

３

结论

利用０．５ｍｏｌ／Ｌ醋酸和胃蛋白酶从斑点叉尾鲴

鱼鱼皮中提取了酸溶胶原（ＡＳＣ）与酶促溶胶原

（ＰＳＣ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果表明，ＡＳＣ与ＰＳＣ是典型的Ｉ型胶原，其分子至少含有２种不同的ｄ链，分子组成可能为［ａ，（工）］。ａ。（Ｉ），分子质量约为３００ｋｕ。氨基酸分析结果显示，ＡＳＣ与ＰＳＣ含有丰富的甘氨酸，其次是丙氨酸，而芳香族氨基酸含量较少；亚氨基酸含量分别为２０．７％和２１．４％，脯氨酸的羟化度分别为４８．８％和４９％，均低于猪皮胶原中亚氨基酸含量和脯氨酸的羟化度，但远高于草鱼鱼皮胶原中亚氨基酸含量和脯氨酸的羟化度。胶原的氨基酸组成决定了其分子的热稳定性，从它们的热变性温度可以看出，胶原分子３股螺旋结构的稳定性与亚氨基酸的含量及羟化度有强的相关性。ＡＳＣ与ＰＳＣ的变性温度在３４７３℃，低于猪皮胶原的变性温度和牛皮胶原的变性温度，但高于大多数鱼类皮胶原的变性温度。

利用紫外扫描、傅立叶变换红外扫描、圆二色光谱扫描研究了ＡＳＣ与ＰＳＣ的分子结构，结果显示实验制取的ＡＳＣ与ＰＳＣ具有明显的胶原３股螺旋的

结构特征，说明了在制备的ＡＳＣ与ＰＳＣ中３股螺旋

结构得到了很好地保存。

以上结果说明了鲴鱼皮胶原在鱼类来源的胶原中具有接近哺乳类胶原的物理化学性质，如氨基酸组哺乳类胶原的应用安全性及广泛可接受性，这使得鲴鱼鱼皮胶原可以作为哺乳类胶原在某些应用上的很参考文献

２００６．１～４

ＶａｎｄｅｒＲｅｓｔ

Ｍ，ＧａｒｒｏｎｅＲ．Ｃｏｌｌａｇｅｎｆａｍｉｌｙｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓ

２００８年第３４卷第９期（总第２４９期）Ｉ８７

与ＰＳＣ二级结构中ａ螺旋、Ｂ折叠、ｐ转角和无归卷成、热稳定性；而其作为鱼类来源的胶原又具有优于好的替代品。

１蒋挺大．胶原与胶原蛋白ＥＭ３．北京：化学工业出版社，

２

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ｂａｎｄｆｏｒ

ｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎｔｈｅｃｏｌｌａｇｅｎ

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ｆｒｏｍ

ｅｔ

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ｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｙＳｕｒｆａｃｅｓ

ｔｙｐｅ

Ｉ

ｃｏｌｌａｇｅｎａｇａｉｎｓｔｅｏｌｌａｇｅｎａｓｅｓ（ｔｙｐｅＩ）ａｎｄｔｈｅｒｍａｌ

ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｕｓｉｎｇｉｒｏｎｃｏｍｐｌｅｘ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｏｒｇａｎｉｃ

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ＲｉｇｂｙＢＪ．Ａｍｉｎｏ－ａｃｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｍａｌｓｔａｂｉｌｉｔｙ

ＥｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＣｏｌｌａｇｅｎ

ｆｒｏｍＣｈａｎｎｅｌＣａｔｆｉｓｈＳｋｉｎ

Ｂａｏ

Ｓｈｉｂａ０１，Ｗａｎｇ

Ｚｈａｎ９２，ＸｕＳｈｉｙｉｎ９２

１（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＪｉａｎｇｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＷｕｘｉ，２１４１２２，Ｃｈｉｎａ）

２（Ｓｃｈｏｏｌ

ｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ

Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉａｎｇ

ｎａｎ

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４１２２，Ｃｈｉｎａ）

ＡＢＳＴＲＡＣＴ

Ａｃｉｄ－ｓｏｌｕｂｌｅｃｏｌｌａｇｅｎ（ＡＳＣ）ａｎｄｐｅｐｓｉｎ。——ｓｏｌｕｂｌｅｃｏｌｌａｇｅｎ（ＰＳＣ）ｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｃｈａｎｎｅｌ

ｃａｔｆｉｓｈｓｋｉｎａｎｄｐａｒｔｉａｌｌｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ．Ｔｈｅｃｏｌｌａｇｅｎｆｒｏｍｔｈｅｓｋｉｎｏｆｃｈａｎｎｅｌｃａｔｆｉｓｈｈａｄｓｐｅｃｉａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｍａｋｅｉｔｍｕｃｈｍｏｒｅｓｔａｂｌｅｔｈａｎａｎｙｏｔｈｅｒｆｉｓｈｓｋｉｎｃｏｌｌａｇｅｎ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，ＣＤ，ＵＶ—ＶｉｓａｎｄＦＴＩＲｓｐｅｃｔｒａｏｆｃｈａｎｎｅｌｃａｔｆｉｓｈｓｋｉｎｃｏｌｌａｇｅｎｗｅｒｅｃａｒｒｉｅｄＰＳＣｗｅｒｅｔｙｐｉｃａｌｔｙｐｅＩｃｏｌｌａｇｅｎｗｉｔｈｉｎｔｅｇｒａｌｉｔｙｏｆｔｒｉｐｌｅ—ｈｅｌｉｘ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ

ｃｈａｎｎｅｌｃａｔｆｉｓｈｓｋｉｎ，ｃｏｌｌａｇｅｎ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ

ｏｕｔ

ａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔＡＳＣａｎｄ

２００８Ｖ０１．３４Ｎｏ．９（ＴｏｔｏＩ２４９）