西洋参根及茎叶皂苷提取物中12种主要皂苷成分的分析研究_薛燕

药物分析杂志ChinJPharmAnal2009,29(1)??79??

西洋参根及茎叶皂苷提取物中12种主要皂苷成分的分析研究

薛燕,闻莉12

(1.中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所,北京100050;2.首都医科大学北京同仁医院,北京100730)

摘要目的:测定西洋参根及茎叶皂苷提取物中12种单体人参皂苷的含量。方法:采用WatersAlliance2690液相色谱仪,配Waters996型-PDA检测器,XTerraRP18色谱柱(3??9mm??150mm,5??m),乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱[0min(20%A)??20min(20%A)??25min(25%A)??45min(26%A)??55min(27%A)??70min(32%A)??80min(47%A)??85min(53%A)??90min(53%A)],流速为1??0mL??min-1,检测波长203nm,柱温40??。结果:12种人参皂苷Rg1、Rg2、Rg3、Re、Rd、Rh1、Rh2、Rf、Rc、Rb1、Rb2和Rb3浓度在其各自的线性范围内,与峰面积呈良好的线性关系,r值均>0??99(n=6);回收率在91??0%~100??4%范围内。结论:本方法精密度和重现性良好,适用于西洋参根及茎叶皂苷提取物中的单体人参皂苷的分析研究,可用于控制西洋参根及茎叶皂苷提取物的质量。

关键词:西洋参;单体皂苷;RP-HPLC

中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:0254-1793(2009)01-0079-03

RP-HPLCdeterminationoftwelveginsenosidesinextract

ofroot,andstemandleaffromPanaxquinquefoliusL.

XUEYan,WENLi12

(1.InstituteofMateriaMedica,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Beijing100050,China;

2.BeijingTongRenHospitalCapitalMedicalUniversity,Beijing100730,China)

AbstractObjective:ToestablishanRP-HPLCmethodfordeterminationofthecontentsoftwelveactiveconsti-tuentsginsenosideRg1,Rg2,Rg3,Re,Rd,Rh1,Rh2,R,fRc,Rb1,Rb2andRb3,inextractofroo,tandstemandleaffromPanaxquinquefolius.Method:TheseparatingwasperformedonaXTerraRP18column(3??9mm??150mm,5??m)??Themobilephasewasacetonitrile(A)-water(B),withgradientelution[0min(20%A)??20min(20%

A)??25min(25%A)??45min(26%A)??55min(27%A)??70min(32%A)??80min(47%A)??85min(53%A)??90min(53%A)]ataflow-rateof1??0mL??min.Detectionwasat203nm,andthecolumntem-peraturewassetupat40??.Results:Rg1,Rg2,Rg3,Re,Rd,Rh1,Rh2,R,fRc,Rb1,Rb2andRb3hadgoodlinearre-lationintheirlinearranges(r??0??99),theaveragerecoverieswerebetween91??0%-100??4%.Conclusion:Thismethodisaccurateandreproducibleaswellasspecificandcanassessthequalityofextractofroo,tandstemandleaffromPanaxquinquefolius.

Keywords:extractofPanaxquinquefoliusL.;ginsenoside;RP-HPLC

西洋参是五加科PanaxquinquefoliumL.的干燥

根,原产北美地区,近年来在我国不少地区引种成

功。研究表明,西洋参中含有的多种人参皂苷,具有

镇静、镇痛、抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、调节免疫功

[1]能等多方面的药理活性,而人参皂苷作为人参类

[2]保健食品的功能成分已得到了广泛的认同。西

洋参是多年生草本植物,地下根的采集一般以4~5

年为好,而每年枯萎的地上部分因含丰富的人参皂

??Eai:lim-1苷同样可以被充分利用。本文采用乙腈-水梯度洗脱,将不同来源的11批西洋参根及茎叶的皂苷提取物进行了比较分析,为其质量评价提供了依据。1仪器、试药HPLC系统:WatersAlliance2690液相色谱仪,配Waters996型PDA检测器,Millennium32色谱管理软件,T680H超声清洗器(Elma公司)。

??80??药物分析杂志ChinJPharmAnal2009,29(1)

对照品:人参皂苷Rg1、Rb1由中国药品生物制

品检定所提供,Rg2、Rg3、Re、Rd、Rh1、Rh2、Rf、Rc、Rb2、Rb3(纯度均在98%以上),由吉林大学基础医学院提供。

试剂:乙腈、甲醇均为色谱纯(美国B&G公司),水为重蒸水。被测样品西洋参根及茎叶的皂苷提取物共11批(皂苷含量均在80%以上),购自吉林省不同厂家。2色谱分析条件

色谱柱:XTerraPR18(3??9mm??150mm,5??m);流动相:乙腈(A)-水(B),梯度洗脱[0min(20%A)??20min(20%A)??25min(25%A)??45min(26%A)??55min(27%A)??70min(32%A)??80min(47%A)??85min(53%A)??90min(53%A)];流速1??0mL??min;检测波长203nm;柱温40??;进样量:10??L。33??1

溶液制备

混合对照品储备液

精密称定对照品人参皂

-1

苷Rg1、Rg2、Rg3、Re、Rd、Rh1、Rh2、R、fRc、Rb1、Rb2和Rb3适量,置10mL量瓶中,用甲醇溶解并定容,制成上述12种人参皂苷浓度分别为1??47,0??95,0??97,1??375,1??48,0??965,0??98,1??41,1??48,1??48,

-1

1??435,1??335mg??mL的混合对照品储备液。3??2??供试品溶液

参考文献[3]制备供试品溶液:

取样品粉末2g,精密称定,置于10mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,超声(250W,40kHz)处理30min,放至室温,用甲醇补足至刻度,滤过,即得。4

色谱峰的归属

成分(component)

Rg1Rg2Rg3

图1Fig1

对照品(A)、茎叶提取物7号样品(B)、根提取物10号样品HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A),No??7ginsenosides

(C)色谱图

extractofstemandleaf(B),andNo??10ginsenosidesextractofroot(C)

表1

Tab1

12种人参皂苷的线性关系

Thelinearequation,correlationcoefficientandthelinearrangeofthetwelveginsenosides

线性范围

方程(linearequation)Y=6??25??103X+652Y=3??84??104X-2??4??104Y=2??96??103X-5??99??103Y=3??5??104X-1??3??104Y=3??61??103X-5??02??103Y=4??74??103X-3??43??103Y=3??93??103X+6??11??103Y=4??21??103X-1??49??104Y=2??66??103X-4??39??104Y=2??3??103X-2??15??103Y=2??67??103X+3??22??104Y=3??06??103X-3??39??103

r

(linearrange)/??g??mL-0??99940??99900??99950??99930??99950??99910??99940??99940??99960??99930??99870??9994

1

利用上述色谱条件,获得对照品溶液及供试品

溶液的色谱图(见图1)。由图可见,从对照品溶液中可以检出12个单体人参皂苷,供试品溶液中待检的单体人参皂苷也能和其他的杂峰分开。5方法学考察

5??1线性关系的考察

取混合对照品储备液适

1470~29??4950~19??0970??5~19??41375~27??51480~29??6965~19??3980~19??61410~28??21480~29??61480~29??61435~28??71335~26??7

ReRdRh1Rh2RfRcRb1Rb2Rb3

量,加甲醇倍比稀释制成6个浓度的对照品稀释液后进样10??L,记录峰面积,以峰面积Y为纵坐标,浓度X(??g)为横坐标,绘制工作曲线,结果见表1。

5??2??精密度试验取10号样品,按??3??2??项下方法操作,取10??L进样测定,重复5次,峰面积的RSD均小于1??9%。

5??3??重复性试验取10号样品5份,按??3??2??项下方法操作,取10??L进样测定,结果除人参皂苷Rg2、Rh2峰面积的RSD值为4??3%和3??3%以外,其5??4稳定性试验取10号样品,按??3??2??项下方

,h

药物分析杂志ChinJPharmAnal2009,29(1)??

回收率测定结果(n=5)

81??

定,结果除人参皂苷Rg1、Rb1峰面积的RSD值为

3??3%和3??1%以外,其余的峰面积的RSD均小于2??2%。

5??5??回收率试验精密称取已知人参皂苷含量的10号样品5份(约1g),精密称定,加入混合对照品储备液0??5mL,加甲醇补足到10mL后,按??3??2??项下方法操作,取10??L进样测定,计算平均加样回收率,结果见表2。

5??6??含量测定取不同来源的11批西洋参根及茎叶的皂苷提取物样品,按??3??2??项下方法操作,取10??L进样测定,以外标法计算样品中Rg1、Rg2、Rg3、Re、Rd、Rh1、Rh2、Rf、Rc、Rb1、Rb2和Rb3的含量,测定结果见表3。

表3

Tab3

样品类型(type)茎叶提取物(extractofstemandleaf)

序号(No??)1234567

根提取物(extractofroot)

891011

来源(source)辉南(Huinan)靖宇(Jingyu)永吉(Yongji)靖宇(Jingyu)抚松(Fusong)新宾(Xinbin)辉南(Huinan)靖宇(Jingyu)永吉(Yongji)辉南(Huinan)抚松(Fusong)

表2

Tab2

Rg1Rg2Rg3ReRdRh1Rh2RfRcRb1Rb2Rb3

Therecoveryofthetwelveginsenosides

回收率(recovery)/%

94??593??591??094??591??294??1100??496??199??295??693??593??2

RSD/%3??53??64??63??63??04??44??81??63??02??83??42??9

成分(component)

吉林不同来源样品中12种皂苷的含量测定结果(%)

ThetestresultsofginsenosidesinthesamplesfromdifferentsourcesofJilin

Rg11??750??874??610??680??961??811??281??184??691??180??94

Rg20??950??741??260??740??871??391??121??1312??991??390??55

Rg31??211??600??691??011??801??261??640??220??701??830??66

Re9??476??1516??888??146??748??667??070??7817??3110??028??37

Rd9??579??957??038??9210??6710??4910??875??707??287??966??08

Rh10??70??0??96????0??450??48??0??890??61??

Rh20??0050??0050??0670??170??0020??160??120??230??091??230??22

Rf??????????????0??640??320??780??72

Rc2??371??843??021??911??772??362??2611??623??051??4012??47

Rb10??850??791??26??1??141??031??2818??361??1825??2019??92

Rb24??324??123??023??814??624??564??965??433??236??356??06

Rb312??9815??250??9914??936??0312??0614??841??871??012??341??82

6讨论Rb1、Rb3的含量差异最大,Rb1甚至能差30倍,另有一半的提取物中找不到Rh1。由于人参二醇组皂苷和三醇组皂苷的药理作用侧重点不同,而西洋参是多年生草本植物,茎叶是一年一收,其根一般要生长3~4年才能采收,提取物中人参皂苷的组成和其含量会直

接影响到它的临床疗效,所以在实际使用时,对西洋参的根和茎叶的皂苷提取物应该有所选择。

参考文献

1??WANGJun-mo(王筠默).Recentadvancesonthepharmacological

activitiesofPanaxquinquefoliusL.(西洋参药理作用研究的最新进展).PharmacolClinChinMaterMed(中药药理与临床),2001,17(4):6

2??WagnerH,FarnsworthNR.EconomicandMedicinalPlantResearch.Vol5.NewYork:AcademicPress,1991.253

3??SUJian(苏建),LIHai-zhou(李海舟),KONGLing-yi(孔令义),etal.HPLCanalysisofsaponinsAmericanGinsengproducedindifferentareas(不同产地西洋参皂甙成分的HPLC分析).NatProdResDev(天然产物研究与开发),2004,16(6):561

2008月6??1本文建立了西洋参根及茎叶皂苷提取物中12

种人参皂苷的含量测定方法,本方法简便、准确,流动相配制方便,重复性好。

6??2??本文对流动相的组成系统进行了比较研究。由于人参皂苷的结构中缺少发色团,紫外吸收较差,需要在低波长的范围内进行检测,因而在进行分离时以乙腈-水进行梯度洗脱为最好,若改用甲醇等溶剂作为流动相,会因在低波长的范围内引起分离度的下降或背景噪音增高,造成检测的灵敏度下降。本方法中乙腈的起始比例为20%,梯度洗脱,12种人参皂苷在此条件下能够得到很好的分离。6??3??本文测定了不同产地的11批西洋参的根及茎叶的皂苷提取物中12种人参皂苷的含量,从总体来看,根的提取物中人参皂苷Rb1和Rh2含量较高,Rf只存在于根的提取物中;茎叶提取物中以Rb3含量较高。另外,从测定结果可以看出,不同产地人参皂苷,