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miRNA研究方法

上传者：廖麟
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上传时间：2015-05-05
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miRNA研究方法


 miRNA 研究方法

 尽管早在1993 年，科学家就发现了第一个microRNA，但直到2003 年以后，
这种小RNA 分子的大作用才不断被发现。研究显示：miRNA 通过与转录本的相
互作用，关闭或抑制基因的表达，影响了 30%的基因。miRNA 在多个组织中，
例如正常和肿瘤组织中差异表达。因此，通过表达谱分析寻找疾病相关 miRNA
并进行发病机理研究，最终应用于肿瘤诊断和治疗，已经成为目前miRNA 研究
的重要方向。在研究中，从深度测序、miRNA 芯片到通过导入化学合成的
mimics/antagomirs 等实现miRNA 过表达和抑制，都是研究中常用的方法。同时，
在miRNA 研究中，生物信息学分析扮演着越来越重要的角色。
 下表介绍了 miRNA 研究和应用中科学家关注的主要科学问题以及目前常用的
研究方法。












 miRNA 主要研究技术
 深度测序 抽提分离小分子（例如18-30nt）RNA，通过RT-PCR 扩增之后，
利用solexa 深度测序，并进行生物信息学分析，获得miRNA 表达谱。深度测序
结合生物信息学分析手段，可以对海量数据进行分析，分别统计出已知的miRNA
（miRNA-known ）、新的 miRNA（miRNA-new）以及可能的新 miRNA
（miRNA-cadidate new），并对新发现的miRNA 进行靶基因分析，功能预测等。
通过深度测序的方法，可以发现新的miRNA，为进一步的深入研究奠定基础。
 miRNA 芯片 利用miRNA 芯片（例如Agilent miRNA 芯片），可以高通量
分析miRNA 表达的时空特异性、不同样本（例如癌组织和癌旁组织）中miRNA
的差异表达，进而进行把基因分析，功能注释、通路分析，网络分析等，以了解
miRNA 在疾病发生中的作用。与深度测序不同，miRNA 芯片针对已知 miRNA
进行研究。筛选到的差异miRNA 可以利用q-pCR 进行验证。
 q-PCR q-PCR 技术可 以用来检测miRNA 以及其靶mRNA 和相关mRNA 等
的检测，主要方法有茎环法和加尾法等。前者针对特定miRNA 设计引物，特异
性好，然而成本较高，周期长；后者采用通用引物，时间短，通量较大。
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 Mimics 以及 Antogomirs 通常基因功能研究常常采用过表达或干涉（抑制、
敲除）等方法，miRNA 研究也不例外。通过导入化学合成的小分子miRNA mimics

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