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miRNA研究方法

上传者:廖麟
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上传时间:2015-05-05
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miRNA研究方法


 miRNA 研究方法

 尽管早在1993 年,科学家就发现了第一个microRNA,但直到2003 年以后,
这种小RNA 分子的大作用才不断被发现。研究显示:miRNA 通过与转录本的相
互作用,关闭或抑制基因的表达,影响了 30%的基因。miRNA 在多个组织中,
例如正常和肿瘤组织中差异表达。因此,通过表达谱分析寻找疾病相关 miRNA
并进行发病机理研究,最终应用于肿瘤诊断和治疗,已经成为目前miRNA 研究
的重要方向。在研究中,从深度测序、miRNA 芯片到通过导入化学合成的
mimics/antagomirs 等实现miRNA 过表达和抑制,都是研究中常用的方法。同时,
在miRNA 研究中,生物信息学分析扮演着越来越重要的角色。
 下表介绍了 miRNA 研究和应用中科学家关注的主要科学问题以及目前常用的
研究方法。












 miRNA 主要研究技术
 深度测序 抽提分离小分子(例如18-30nt)RNA,通过RT-PCR 扩增之后,
利用solexa 深度测序,并进行生物信息学分析,获得miRNA 表达谱。深度测序
结合生物信息学分析手段,可以对海量数据进行分析,分别统计出已知的miRNA
(miRNA-known )、新的 miRNA(miRNA-new)以及可能的新 miRNA
(miRNA-cadidate new),并对新发现的miRNA 进行靶基因分析,功能预测等。
通过深度测序的方法,可以发现新的miRNA,为进一步的深入研究奠定基础。
 miRNA 芯片 利用miRNA 芯片(例如Agilent miRNA 芯片),可以高通量
分析miRNA 表达的时空特异性、不同样本(例如癌组织和癌旁组织)中miRNA
的差异表达,进而进行把基因分析,功能注释、通路分析,网络分析等,以了解
miRNA 在疾病发生中的作用。与深度测序不同,miRNA 芯片针对已知 miRNA
进行研究。筛选到的差异miRNA 可以利用q-pCR 进行验证。
 q-PCR q-PCR 技术可 以用来检测miRNA 以及其靶mRNA 和相关mRNA 等
的检测,主要方法有茎环法和加尾法等。前者针对特定miRNA 设计引物,特异
性好,然而成本较高,周期长;后者采用通用引物,时间短,通量较大。
 (欧易生物为您提供以上项目的优质服务,详情请关注:
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 Mimics 以及 Antogomirs 通常基因功能研究常常采用过表达或干涉(抑制、
敲除)等方法,miRNA 研究也不例外。通过导入化学合成的小分子miRNA mimics

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