高等植物绿色组织特异表达启动子研究进展

中国农业科技导报，２０１０，１２（２）：３３—３７

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

高等植物绿色组织特异表达启动子研究进展

王

淼１”，王旭静２，

唐巧玲２，

王志兴２，王育青１

（１．中国农业科学院草原研究所，呼和浩特０１００１０；２．中国农业科学院生物技术研究所，北京１０００８１）摘要：为实现同的慕因的定点、定时表达，组织特异性启动子的开发和应用成为植物基因工程中的研究热点。绿色组织特异启动子驱动外源基因在茎叶等绿色组织中特异表达，并且启动子的组织特异性是由其上存在的正负调控元件相互作用而决定的。综述ｒ绿色组织特异启动子的种类及调控元件，并对其在植物基因ｒ程中的应用前景进行了展望。

关键词：启动子；绿色组织特异性；调控元件ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓａｎ．１００８－０８６４．２０１０．０２．０７中图分类号：Ｑ７５６

文献标识码：Ａ

文章编号：１００８－０８６４（２０１０）０２－００３３－０５

ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓ

ｏｎ

ＰｌａｎｔＧｒｅｅｎＴｉｓｓｕｅＳｐｅｃｉｆｉｃＰｒｏｍｏｔｅｒ

ＷＡＮＧＭｉａ０１”，ＷＡＮＧＸｕ－ｊｉｎ９２，ＴＡＮＧＱｉａｏ—ｌｉｎ９２，ＷＡＮＧＺｈｉ．ｘｉｎ９２，ＷＡＮＧＹｕ．ｑｉｎ９１

（１．Ｇｒａｓｓｌａｎｄ

Ｒｅｓｅａｒｃｈ

Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙ

ｏｆ

ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｏｈｈｏｔ０１００１０；

２．ＢｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１，Ｃｈｉｎａ）

ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｉｓｓｕｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｍｏｔｅｒｈａｓｂｅｅｎａｈｏｔｓｐｏｔｉｎ

ｏｒｄｅｒｔｏｅｘｐｒｅｓｓｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅｓｃｏｒｒｅｃｔｌｙ，ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ．Ｇｒｅｅｎｔｉｓｓｕｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｍｏｔｅｒｓＣａｎｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅｓｉｎｇｒｅｅｎｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｔｉｓｓｕｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｍｏｔｅｒｓｉｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｉｎｔｅｒａｅ—

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ

ｐｌａｎｔ

ｇｅｎｅｔｉｃ

ａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｌｅｍｅｎｔｓ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｅｘｐｏｕｎｄｓｔｈｅｋｉｎｄｓｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｍｏｔｅｒｓａｎｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ

ｐｒｏｓｐｅｃｔｓｉｔｓｆｕｔｕｒｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｒｏｍｏｔｅｒ；ｇｒｅｅｎｔｉｓｓｕｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ；ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｌｅｍｅｎｔ

ｔｉｏｎｏｆｐｏｓｉｔｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｓ．Ｉｔａｌｓｏ

在植物基因工程研究中，为使外源基因在受体中高效表达，必须借助于高活性的启动子，有时

为避免基因产物对受体及环境产生副作用，需使

件进行综述，并对其在植物基因工程中的应用前景进行了展望。

ｌ

外源基因只在特定的组织或器官中表达。绿色组

织是植物进行光合作用的场所，目前已发现一些

绿色组织特异性启动子的种类

光合作用相关基因的启动子表现出在绿色组织中特异或优势表达的特性，如捕光叶绿素ａ／ｂ蛋白复合体（ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ

ａ／ｂｂｉｎｄｉｎｇ

１．１植物捕光叶绿素ａ／ｂ蛋白复合体（ｃｈｌｏｒｏ－

ｐｈｙｌｌａ／ｂ

ｂｉｎｄｉｎｇ

ｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＡＢ）基因启

ｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＡＢ）基ｓｕｂｕｎｉｔ，ｒｂｃＳ）

ｚｉｐｐｅｒ）启

动子

因启动子、核酮糖二磷酸羧化酶小亚基（ｆｉｂｕｌｏｓｅ

１，５－ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｓｍａｌｌ

植物捕光叶绿素ａ／ｂ蛋白复合体基因（ｃａｂ）是一类典型的光诱导型基因。目前已从梨、小麦

和水稻等植物中分离得到了ｃａｂ基因¨咱１。研究表明，植物中的ｃａｂ启动子同时具有光诱导和组织特异表达的特性＂］。ｃａｂ基因的表达是在转录

基因启动子、ＰＰＤＫ（ｐｙｒｕｖａｔｅｏｒｔｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｉｋｉ—

ｎｉｌｌｅｕ

ｎａｓｅ）启动子和ＰＮＺＩＰ（Ｐｈａｒｂｉｔｉｓ

动子等，并且启动子的组织特异性是由其上存在

的正负调控元件相互作用而决定的。

本文对绿色组织特异启动子的种类及调控元

收稿日期：２００９一１１—１１；修回日期：２００９－１２－２１

水平上进行调控的，而且其表达与不同光受体

有关‘８｜。

基金项目：国家８６３计划项目（２００７ＡＡｌ００５０５；２００７ＡＡｌ０２１８２）；国家自然基金项目（３０６７１３３７）；转基因生物新品种培育科技重大

专项（２００８ＺＸ０８００５－００３，２００８７ＺＸ０８０１０－００３，２００８ＺＸ０８０７０－００１）资助。

作者简介：王淼，硕＿｛：研究牛，研究方向为植物基因工程。Ｔｅｌ：０１０－８２１０９８６６；Ｅ．ｍａｉｌ：ｗｉｎ０５１０＠１２６．ｔｏｍ。通讯作者：王志兴，研究

员，主要从事植物抗病、虫基因工程研究。Ｆａｘ／Ｔｅｌ：８６—１０－８２１０６１０２：Ｅ．ｍａｉｌ：ｗａｎｇｃｏｔｔｏｎ＠１２６．ｃｏｒｎ

中国农业科技导报

１２卷

研究发现，ｃａｂ基因的表达调控元件位于基因的５’非翻译区。用烟草作为检测系统，已经证

明豌豆、烟草、小麦、矮牵牛及拟南芥等植物的

ｃａｂ启动子表现出光依赖性和绿色组织表达特异性¨１。Ｓｉｍｐｓｏｎ等一。证明梨ｃ曲基因上游４００

ｂｐ

的启动子序列能驱动ｇｕｓ基因在转基因烟草叶片

录起始点…３５７

中的特异表达。单子叶植物小麦ｃａｂ－１启动子转

８９片段与ＣａＭＶ３５Ｓ基本元件

连接，转化烟草证明，２６８ｂｐ的ＤＮＡ片段是一个光反应和叶片表达特异性的增强子，由三个不同的元件组成＂１。拟南芥ｃａｂｌ基因５’上游１

３９６

ｂｐ中至

少存在三个光依赖性的顺式作用元件，其中两个近

端的分别位于转录起始位点一２５３一一１５８及一３２１～一２５３，前者对维持启动子特异性是必需的，后者具有增强ｃａｂ启动子活性的作用。另一个位于远端一１３９６～一７６６，也负责启动子特异性应答。序列分析发现，在该启动子中存在一个与ｃａｂｌ表达光调控有关的Ｚ－ＤＮＡ形成序列（５＇－ＡＴＡＣＧＴＧＴ一３’）¨ｏＩ。李为民等¨¨从金华中棉中克隆了光诱导基因Ｃ，ａｃａｂ的启动子（１

００９

ｂｏ），转化烟草证明

Ｇａｃａｂ全长启动子能够驱动ｇｕｓ基因在转基因烟草叶片中的特异表达，是一种光诱导型启动子。不同长度的缺失试验表明，只有全长的启动子为绿色组织特异表达启动子，而５０４ｂｐ的表达活性最高，表达水平明显高于ＣａＭＶ３５Ｓ启动子¨“。

１．２

核酮糖１。５－二磷酸羧化矽加氧酶小亚基

（ｒｉｂｕｌｏｓｅ

１，５－ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ

ｃａｒｂｏｘｙｌａ鼬

ｓｍａｌｌｓｕｂｕｎｉｔ，ｒｂｃＳ）基因启动子

核酮糖１，５－二磷酸羧化酶存在于所有高等植物和自养细菌中，是所有光合生物进行光合碳同化的关键酶，也是光合植物叶片中含量最丰富的蛋白质，约占可溶性总蛋白的５０％。核酮糖二磷酸羧化酶由大小两种亚基构成，在高等植物中两种亚基的比例大约为ｌ：１，其中大亚基由叶绿体基因组编码，小亚基（ｒｂｃＳ）由核基因组编码。由于大亚基的表达受ｒｂｃＳ表达的调控，所以对于核酮糖二磷酸羧化酶小亚基的研究更受人关注。

由核基因编码的ｒｂｃＳ表达受光调控，并具绿

色组织表达特异性。目前已经证明水稻、梨、番茄、玉米、拟南芥、马铃薯、烟草等植物的ｒｂｃＳ启动子是绿色组织特异表达的启动子。如Ｋｙｏｚｕｋａ等（１３１发现番茄ｒｂｃＳ启动子驱动ｇｕｓ基因在转基因水稻中表达时，ＧＵＳ活性具有组织特异性，只

在绿色组织中检测到。刘巧泉等¨刮证明番茄

Ｒｕｂｉｓｃｏ小亚基ｒｂｃＳ３Ａ基因的启动子可驱动ｇｕｓ在转基因的茎和叶组织中高效表达，而在根和种子等器官中不表达或表达活性极弱，表现出绿色

组织特异表达的特性。黄海群等¨纠利用ＰＣＲ法

克隆了水稻日本晴的核酮糖．１、５－二磷酸羧化酶小亚基基因（ｒｂｃＳ）５７上游调控区，命名为Ｐｏｓｒｂｃｓ。将Ｐｏｓｒｂｃｓ与ｇｕｓ基因融合，并通过农杆菌介导转入水稻中花ｌｌ（Ｏｒｙｚａ

ｓａｔｉｖａ

ｓｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）中。对

转基因水稻植株中ＧＵＳ活性进行定性与定量分析，结果表明，Ｐｏｓｒｂｃｓ启动子可驱动ｇｕｓ基因在转

基因水稻植株的叶片、叶鞘、茎杆及颖壳中特异性

表达，定量分析结果显示，Ｐｏｓｒｂｃｓ片段愈短，ＧＵＳ活性愈低；进一步的光诱导实验结果显示，光能明显提高ｇｕｓ基因表达活性，并且随诱导活性降低以及光诱导表达时间后移。卢碧霞等¨刮进行了类似的实验，定量测定结果表明，ｒｂｃＳ启动子可驱动ｇｕｓ报告基因在转基因水稻植株叶片中特异性表达，表达水平高于ＣａＭＶ３５Ｓ组成型启动子。荷兰Ｗａｇｅｎｉｎｇｅｎ大学国际植物研究中心的研究表明，菊花ｒｂｃＳ启动子在转基因烟草叶片中的表达效率是ＣａＭＶ３５Ｓ启动子的８倍，绿色荧光蛋白（ｅＧＦＰ）的表达量达叶片可溶性总蛋白的２４％ｍＪ。

研究发现，ｒｂｃＳ在Ｃ３植物和Ｃ４植物中的表达模式有所不同，在Ｃ３植物中，ｒｂｃＳ主要在叶肉

细胞中表达，在Ｃ４植物中则在维管束鞘细胞中

特异表达。Ｎｏｍｕｒａ等¨副发现Ｃ３植物水稻的ｒ６ｃｓ启动子驱动ｇｕｓ基因在转基因玉米中表达时，报告基因ｇｕｓ主要在叶肉细胞中表达，在维管束鞘细胞中的表达相对较低；而ｃ４植物玉米的ｒｂｃＳ启动子驱动的ｇｕｓ基因主要在转基因玉米的维管束鞘细胞中表达。

１．３丙酮酸正磷酸双激酶（ｐｙｒｕｖａｔｅ．ｏｒｔｈｏｐｈｏｓ－

ｐｈａｔｅｄｉｋｉｎａｓｅ，ＰＰＤＫ）启动子

丙酮酸正磷酸双激酶（ｐｙｒｕｖａｔｅ，ｏｒｔｈｏｐｈｏｓ－ｐｈａｔｅｄｉｋｉｎａｓｅ，ＰＰＤＫ）是Ｃ４植物光合反应中的一个叶绿体酶，但在Ｃ３植物中也同样存在。研究发现ＰＰＤＫ具有一个双元启动子系统，这两个启动子的区别在于起始密码子和拼接方式的差异。

玉米中的Ｃ４Ｐｄｋ启动子驱动ＰＰＤＫ转录成较长

的ｍＲＮＡ，基因产物定位在叶绿体中；细胞质Ｐｄｋ启动子在ＰＰＤＫ基因的第一个内含子中，驱动ＰＰＤＫ转录成较短的ｍＲＮＡ，它所编码的蛋白质定位于细胞质中，故称为细胞质Ｐｄｋ启动子。

Ｃ４Ｐｄｋ启动子是受光诱导的强启动子，驱动基因

２期王淼等：高等植物绿色组织特异表达启动子研究进展

３５

在玉米叶肉细胞中特异表达；而细胞质Ｐｄｋ启动子是个弱启动子，且不具有组织特异性¨引。在

Ｃ３植物水稻中，ＰＰＤＫ基因同样具有两个启动

子，形成两种类型的转录本，其中较长的转录本主要存在于叶片中，而较小的转录本存在于小穗

中Ⅲ】。Ｐａｒｓｌｅｙ和Ｈｉｂｂｅｒｄ【２ｕ发现拟南芥中的胆

ＤＫ基因也具有两个启动子，驱动基因形成两种类型的ｍＲＮＡ，一个启动子位于第一个外显子的上游，驱动ＰＰＤＫ转录成较长的ｍＲＮＡ，在叶片中这类ｍＲＮＡ非常丰富；另一个位于第一个内含子内，驱动ＰＰＤＫ转录成短的ｍＲＮＡ。将这两类基

因与曲基因融合，利用ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动融

合基因在烟草叶片中表达，结果发现，较长ｍＲＮＡ

翻译成的蛋白质定位在叶绿体中，其中第一个外显子作为信号肽起作用，较小的蛋白质则位于细

胞质中。

１．４

ＰＮＺＩＰ启动子

杨予涛等【２２。从裂叶牵牛（Ｐｈａｒｂｉｔｉｓｎｉｌ）中分

离到一个ＰＮＺＩＰ基因，编码一种含有亮氨酸拉链结构的蛋白质，原位杂交证明该基因特异地在叶片中表达。他们利用接头ＰＣＲ技术克隆了长度为ｌ

４１５

ｂｐ的ＰⅣｚ，Ｐ启动子，发现它驱动ｇｕｓ基

因在转基因烟草叶片中特异表达，且其表达强度

是组成型启动子ＣａＭＶ３５Ｓ的９倍。肖守华等旧’

证明ＰⅣｚ，Ｐ启动子能驱动小麦抗真菌１－硫堇蛋白（＾ｙ—Ｔｈｉｏｎｉｎ）基因在甜瓜叶片组织中表达。利

用ＰＬＡＣＥ数据库对该启动子的顺式元件进行分

析，发现启动子中存在Ｇ．Ｂｏｘ、Ｂｏｘ－ＩＩ和类ＡＴ－

ｌｂｏｘ，此外还发现了在数据库中不存在的２个新的保守元件ＧＡＡＡＴＡ元件和ＧＡＴＡＣＴ元件。２

个ＧＡＴＡＣＴ元件存在于～２７８和一５５ｂｐ处，４个ＧＡＡＡＴＡ元件分别存在于一１００７，一９４３，一４４６

和一３

１８４

ｂｐ处，分段缺失及转基因的研究表明

这两个元件有可能参与基因的表达调节Ⅲ１。

１．５叶绿体核糖体蛋白Ｌ２１（ｒｐｌ２１）基因启动子

叶绿体核糖体蛋白Ｌ２１基因是Ｌａｇｒａｎｇｅ

等旧１从菠菜中克隆的一种基因。此基因具有两

种长短不同的转录本。这两种转录本的区别在于其转录起始的差异。两种转录本的起始位点分别被Ｐ１和Ｐ２启动子所驱动，瞬时表达分析表明：

Ｐ２启动子是组成型表达；ＰＩ启动子只在叶中特

异性表达。Ｌａｇｒａｎｇｅ等此后的工作还表明，一８９到＋３８ｂｐ区段为Ｐ１启动子的核心启动子，可以驱动基因高效表达。其上游具有一个正调控结构

域（一３２８ｂｐ一一２０４

ｂｐ）和一个负调控的结构域

（一２０４

ｂｐ～一８９

ｂｐ），正调控结构域中的顺式作

用元件ｓ２（５’一ＡＴＡＣＡ－３’）通过与叶特异性核因子

Ｓ２Ｆ结合来调控基因在叶中的特异表达圆瑚】。

转基因烟草实验证明Ｐ１的绿色组织特异性表达与光诱导无关¨川。

２绿色组织特异启动子中的调控元件

如上所述，大多数绿色组织特异性启动子为光诱导启动子，同时具有光诱导活性，因而大多数

绿色组织特异启动子都包含若干个光应答元件

（１ｉｇｈｔ

ｒｅｓｐｏｎｓｅ

ｅｌｅｍｅｎｔ，ＬＲＥｓ），如Ｇ盒、ＧＴｌ元件

（或ＧＡＴＡ元件）、ＡＴ富含元件及Ｚ—ｂｏｘ等，它们普

遍存在于光调控启动子中，对光调控的转录激活是必需的【嚣以１｜。以拟南芥ｒｂｃＳ一１Ａ启动子为例，包括Ｉ、Ｇ和ＧＴｂｏｘ的１９６ｂｐ序列（…３２０

１２５）

在烟草叶片中足以通过光诱导表达乙醇脱氢酶基

因（ａｌｃｏｈｏｌ

ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ

ｇｅｎｅ，ａｄｈ），定点突变分

析发现全长ｒｂｃＳ一１Ａ启动子（一１７００一＋２１）中Ｇｂｏｘ和Ｉｂｏｘ突变会降低ａｄｈ和ｇｕｓ基因的表达［３２Ｊ，将这些特异性元件置于非光调控的基本启动子上游，均能表现出组织特异性和光敏色素介导的光反应口五川。

２．１

Ｇ－ｂｏｘ

Ｇ—ｂｏｘ是植物中广泛存在的顺式作用元件，

通常含有一个核心序列５’－ＣＡＣＧＴＧ－３’，最初是从

编码励岱基因的上游区作为光调控元件而被发

现的。Ｇ—ｂｏｘ往往是作为应答反应调控元件中的

一个组成部分，通过与其他顺式作用元件共同起作用，尤其是Ｇ．ｂｏｘ两侧的序列对应答反应的特

异性起重要作用，如Ｄｏｎａｌｄ和Ｃａｓｈｍｏｒｅｌ３２１研究发现，在拟南芥ｒｂｃＳ．１Ａ启动子中，Ｇ－ｂｏｘ和两侧的

３个Ｉ－ｂｏｘ共同参与光应答反应。Ｇ—ｂｏｘ结合蛋白（ＧＢＦ）广泛存在于植物界，绝大部分属于ｂＺＩＰ转

录因子Ⅲ］。如在拟南芥中，ＧＢＦｌ、ＧＢＦ２、ＧＢＦ３是

调节ｒｂｃＳ．１Ａ启动子的Ｇ．ｂｏｘ结合蛋白ｍＪ，欧芹中也存在３个参与基因光表达调控的Ｇ－ｂｏｘ结合蛋白ＣＰＲＦ．１、ＣＰＲＦ－２和ＣＰＲＦ－３。关于ＧＢＦ如何调控基因的表达，Ｓａｎｄｈｕ等旧刊提出了这样一个模型：ＧＢＦ合成后以单体形式存在于细胞质中，当接受光信号后，ＧＢＦ被磷酸化而激活，并从细胞质中转移到细胞核内，然后以异源或同源二聚体

的形式与Ｇ—ｂｏｘ结合，达到调控基因表达的目的。

３６

中国农业科技导报

１２卷

２．２Ｚ－ｂｏｘ

Ｚ—ｂｏｘ的通用序列是５７－ＡＴＡＣＧＴＧＴ－３’，在拟

南芥ｅａｂＩ启动子中含有三个Ｚ．ｂｏｘ。即Ｚ—ＤＮＡ形成序列。缺失分析暗示，位于光调控最小启动子中的Ｚ－ｂｏｘ，在ｃａｂｌ基因光依赖发育表达中发挥

重要的作用【１０｜。研究表明，包含Ｚ—ｂｏｘ和另外一个ＬＲＥ串联的启动子，能够对广谱波长产生反

应，这种反应分别由ｐｈｙＡ、ｐｈｙＢ和ＣＲＹｌ光受体在它们相应的波段介导，ｚ?ｂｏｘＬＲＥ的调控由多种光信号元件介导旧２１。研究还发现包含Ｇ、ＧＡＴＡ及ＧＴｌ等ＬＲＥｓ的启动子受广谱波长的光所诱导，只有单一ＬＲＥｓ的启动子仅对某一特定

波段的光产生反应旧引。

Ｚ．３

Ｉ－ｂｏｘ

Ｉ盒或ＧＡＴＡ元件含有５’－ＧＡＴＡＡ－３７序列。

有些光应答基因的启动子中含有单一的ＧＡＴＡ元

件，有些则含有多个拷贝。ＧＡＴＡ元件的缺失或突变都会导致启动子光应答能力的下降。ＧＡＴＡ

元件的旁侧序列对转基因植物中报告基因的表达也有一定的影响。

２．４

Ａ／Ｔ富集基序

Ａ／Ｔ富集基序普遍存在于植物各类启动子中，它既可以起正调控作用，也可以起负调控作用。Ａ／Ｔ富集基序在豌豆Ｒｂｃｓ－３Ａ启动子和谷氨酞氨合成酶ＧＳ２启动子中是一个正调控元件，而

在烟草的Ｃａｂ—Ｅ基因启动子中则是一个负调控元

件。Ｓａｎｄｈｕ等ｐ刊发现在豌豆ＰｅｔＥ（质体蓝素）基因启动子中，Ａ／Ｔ富集基序是一个没有组织专一性的增强子，它只能从量上增强基因在高等植物中表达强度。Ｈｏｆｆｍａｎｎ等＂引发现，改变豌豆线粒体ａｐｔ９启动子中Ａ／Ｔ富集基序的３个碱基将导致启动子的活性降低７０％。杨予涛等７３９］发现，ＰＮＺＩＰ启动子中的类ＡＴ．１ｂｏｘ也属于Ａ／Ｔ富

ＡＡＴＡⅢＡ，ｒｒ－３

集基序，它与豌豆ＲｂｃＳ－３Ａ启动子的ＡＴ．１盒（５’．

７）十分相似，推测存在于一３７９

一一１３３ｂｐ区段的类ＡＴ?１盒，与控制基因在光合组织中的表达强度有关。Ａ／Ｔ富集基序是一个正

调控元件，能增强基因在光合组织中的表达ⅢＪ。

２．５

ＧＴｌ元件

ＧＴｌ元件最初是在豌豆叶片Ｒｂｃｓ一３Ａ基因启

动子中发现的一个光应答元件，又称作ＢｏｘｌＩ，序

列为５＇－ＧＰｕ（ＴＡ）ＴＡ（ＡＴ）－３’，通常是５’一ＧＧＴ．ＴＡＡ－３’。它是一种负调控元件，在黑暗状态下，

负责关闭光调控基因的转录‘３８１。在有些光诱导启动子中ＧＴｌ序列的出现频率较高，甚至以串连方式存在。研究发现，核蛋白ＧＴ－１与ｂｏｘＩＩ（５’－

ＧＴＧＴＧＧＴｒＡＡＴＡＴＧ－３７）相互作用，参与植物的光

调控发育‘４０１。

３绿色组织特异表达启动子的应用前景

外源基因在转基因植物中的定位表达，可以

降低植物负担，减轻对其他性状的不利影响，而且还可以提高目标产物在特定部分的表达量，增强转基因的效果。鉴于此，研究者们更加莺视对组

织特异性启动子的开发和应用。绿色组织特异性启动子诱导基因只在茎叶等绿色组织表达，因而

可以用于以茎叶为主要收获产物的作物，使蛋白质产物富集于茎叶中，减少宿主植物无谓的物质

能量消耗，改善光合作用特性；也可以用于以种

子、果实为主要收获产物的作物，让抗除草剂、抗虫等外源基因只在茎叶部分而不在种子果实等器官中表达，以提高转基因作物的生物安全性，在植物基因工程研究中具有广泛的应用前景。

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Ｓ，Ｍｅｙｅｒｏｗｉｔｚ

Ｅ

Ｍ，Ｔｏｂｉｎ

ＥＭ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆｔｈｒｅｅｌｉｇｈｔ??ｈａｒｖｅｓｔｉｎｇｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ

ａ／ｂ?－ｂｉｎｄｉｎｇ

ｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅｓｉｎ

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ

ｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．。

１９８６，１４：４０５１—４０７６．

［８】ＣｅｃｉｌｌｉａＧ，ＬｕｉｓＣＲ，ＫｅｉｋｏＩ，ｅｔ面．．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｒｅｅ

ｔｉｓｓｕｅ—

２期王淼等：高等植物绿色组织特异表达启动子研究进展

３７

ｓｐｅｃｉｆｉｃ

ｅｌｅｍｅｎｔｓｆｒｏｍｔｈｅｗｈｅａｔＣａｂ一１

ｅｎｈａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪ．，１９９３。３：５０９—５１８．

［９］ＳｉｍｐｓｏｎＪ，Ｔｉｍｋｏ

Ｍ

Ｐ，ＣａｓｈｍｅｒｅＡＲ，甜ａ／．．Ｌｉｇｈｔ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ

ａｎｄ

ｔｉｓｓｕｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ

ａ

ｃｈｉｍａｅｒｉｃ

ｇｅｎｅ

ｕｎｄｅｒｃｏｎｔｒｏｌｏｆ

ｔｈｅ５＇－ｆｌａｎｋｉｎｇ

ｓｅｑｕｅｎｃｅ

ｏｆ

ａ

ｐｅａ

ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌａ／ｂ—ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ

ｇｅｎｅ［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ．，１９８５，４：２７２３—２７２９．

［１０］Ｈａ

ｓＢ，ＡｎＧ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ

ｕｐｓｔｒｅａｍｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ

ｅｌｅｍｅｎｔｓ

ｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅ

ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆｔｈｅＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ

ｔｈａｌｉａｎａ

ｃａｂｌ

ｇｅｎｅ［ｊ］．Ｐｒｏｃ．Ｎａｉｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８８，

８５：８０１７—８０２１．

［１１］ＬｉｗＭ，Ｗａｎｇ

ＺＸ，ＰｅｉＸＷ，ｅｔａＬ．Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒ－

ｉｚａｔｉｏｎ

ｏｆｔｈｅｌｉｇｈｔ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅＧａｃａｂ

ｐｒｏｍｏｔｅｒ

ｆｒｏｍＣ．ｏｓｓｙｐｉｕｍ

ａｒｂｏｒｅｕｍ［Ｊ】．Ｃｈｉｎｅｓｅ

Ｊ．蛳ｃ．Ｂｉｏｔｅｅｈｎ０１．，２００５，２（１）：

１７—２２．

［１２］王旭静，李为民，唐巧玲，等．中棉（Ｇｏｓｓｙｐｉｎｍ

ａｒｂｏｒｅｕｍ）光

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Ｄ，Ｈａｙａｋａｗａ

Ｔ，甜ａ／．．Ｌｉｇｈｔ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄａｎｄｃｅｌｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆｔｏｍａｔｏ

ｒｂｃＳ?－ｇｕｓＡａｎｄｒｉｃｅｒｂｃＳ－

ｇｕｓＡ

ｆｕｓｉｏｎ

ｇｅｎｅｓｉｎ

ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ

ｒｉｃｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉ０１．，１９９３。１０２（３）：９９１—１０００．［１４］刘巧泉，于恒秀，张文娟，等．番茄ｂｃＳ３Ａ启动子控制的ＧＵＳ

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Ｎ

Ｓ，ＰｅｔｅｒｓＪ，ｄｅＪｅｎｇＪ，ｅｔａ／．．Ｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒ－

ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒｏｆｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｒｂｃＳｌｄｉｒｅｃｔｓ

ｖｅｒｙ

ｈ；ｇＩｌ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｌｅｖｅｌｓ

ｉｎ

ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ，２１６（６）：１００３—１０１２．

［１８］Ｎｏｍｕｒａ

Ｍ，Ｋａｔａｙａｍａ

Ｋ，ＮｉｓｈｉｍｕｒａＡ，ｅｔ

ａ／．．Ｔｈｅ

ｐｒｏｍｏｔｏｒ

ｏｆｒｂｅＳ

ｉｎ

ａ

Ｃ３

ｐｌａｎｔ（ｒｉｃｏ）ｄｉｒｅｃｔｓＯｒｇａｎ－ｓｐｏｃ访ｃ，ｌｉｇｈｔ—

ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｉｎ

ａ

Ｃ４

ｐｌａｎｔ（ｎｌａｉＴ．ｅ），ｂｕｔｄｏｅｓ

ｎｏｔ

ｃｏｌＬｆｅｒ

ｂｕｎｄｌｅｓｈｅａｔｈｃｅｌｌ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＭ０１．

Ｂｉ０１．，２０００，４４：９９—１０６．

［１９］Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ

Ｍ，ＩｚａｗａＫ，Ｋｕ

Ｍ

Ｓ，ｅｔ

ａ１．．Ｔｈｅ

ｐｒｏｍｏｔｅｒ

ｆｏｒｔｈｅ

ｍａｉｚｅ

ＣＡ

ｐｙｒｕｖａｔｅ，ｏｒｔｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｉｋｉｎａｓｅ

ｇｅｎｅ

ｄｉｒｅｃｔｓｃｅｌｌ－

ａｎｄ

ｔｉｓｓｕｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｎａｉ∞ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ

Ｐｈｙｓｉ０１．，２０００，４１（１）：４２—４８．

［２０］Ｉｍａｉｚｕｍｉ

Ｎ，Ｋｕ

ＭＳ，ｌｓｈｉｈａｒａＫ，ｄａ／．．Ｃｈａｒａｃｔｅｆｉｓａｔｉｏｎｏｆ

ｔｈｅ

ｇｅｎｅ

ｆｏｒ

ｐｙｒｕｖａｔｅ

ｏｒｔｈｏｐｈｅｓｐｈａｔｅｄｉｋｉｎａｓｅ

ｆｒｏｍ

ｒｉｃｅ．ａ

Ｃ３ｐｌａｎｔ，ａｎｄ

ａ

ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒｅ

ａｎｄ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＣ３

ａｎｄＣＡ

ｇｅｎｅｓ

ｆｏｒｔｈｉｓ

ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＭ０１．Ｂｉ０１．，１９９７，３４：７０１—７１６．

［２１］ＰａｒｓｌｅｙＫ，Ｈｉｂｂｅｒｄ

Ｊ

Ｍ．Ｔｈｅ

ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓＰＰＤＫ

ｇｅｎｅ

ｉｓ咖－

ｓｃｒｉｂｅｄ

ｆｒｏｍ

ｔｗｏ

ｐｒｏｍｏｔｅｒｓｔｏＰ

ｒｏｄｕｃｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄ

ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｃｙｔｏｓｏｌｉｃａｎｄｐｌａｓｔｉｄｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ】．

ＰｌａｎｔＭ０１．Ｂｉ０１．，２００６，６２：３３９—３４９．

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［２５】Ｌｎｇｒａｎｇｅ

Ｔ，ＡｘｅｌｏｓｓＢ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ

Ｍ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆｔｈｅｎｕｅｌｅｎｒ

ｇｅｎｅｃｏｄｉｎｇｆｏｒｔｈｅｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｒｉｂｏｓｏｍａｌ

ｐｒｏｔｅｉｎＬ２１：ｄｅｖｅｌｏｐ－ｍｅｎｔａｌ

ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆ

ａ

ｈｏｕｓｅ－ｋｅｅｐｉｎｇ

ｇｅｎｅ

ｂｙ

ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ

ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ［Ｊ］．Ｍ０１．ＣｅｌｌＢｉ０１．，１９９３，１３：２６１４－２６２２．

［２６］ＨａｒｒａｋＨ，ＬａｒｇｒａｎｇｅＴ．ＴＩ．ｅ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆｎｕｅｌｅａｒ

ｇｅｎｅｓ

ｅｎｃｏ－

ｄｉｎｇｐｌａｓｔｉｄｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｅｃｅｄｅｓ

ｔｈｅ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ

ｇｅｎｅｓ

ｄｕｒｉｎｇ

ｅａｒｌｙｐｈａｓｅｓｏｆｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ

Ｐｈｙｓｉ０１．，１９９５，１０８：６８５—６９２．

［２７］Ｌａｇｒａｎｇｅ

Ｔ，Ｇａｕｖｉｎ

Ｓ．Ｓ２Ｆ，ａｌｅａｆ－ｓｐｅｃｉｅ

ｔｒａｎｓ—ａｃｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，

ｂｉｎｄｓｔｏ

ａ

ｎｏｖｅｌ

ｃｉｓ—ａｃｔｉｎｇ

ｅｌｅｍｅｎｔ

ａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ

ａｃｔｉｖａｔｅｓ

ｔｈｅ

ＲＰＬ２１

Ｇｅｎｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，１９９７，９：１４６９—１４７９．

［２８］ＭｉｌｌａｒＡＪ，ＫａｙＳＡ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｃｉｒｃａｄｉａｎａｎｄｐｈｏｔｏｔｍｎｓ－

ｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｓ

ｉｎｔｈｅ

ｎｅｔｗｏｒｋｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇＣＡＢ

ｇｅｎｅｔｒａｎｓｃｒｉｐ－

ｔｉｏｎｉｎ

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｅａｄ．ＳＣｉ．ＵＳＡ，１９９６，

９３：１５４９１—１５４９６．

［２９］ＴｅｒｚｎｇｈｉＷＢ，Ｃａｓｈｍｏｒｅ

Ａ

Ｒ．Ｌｉｇｈｔ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ

［Ｊ］．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉ０１．ＰｌａｎｔＭ０１．Ｂｉ０１．，１９９５，４６：

４４５—４７４．

［３０］Ｔｏｂｉｎ

Ｅ

Ｍ，ＫｅｈｏｅＤＭ．Ｐｈｙｔｏｃｈｒｏｍｅ

ｒｅｇｕｌａｔｅｄ

ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ－

ｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｅｍｉｎ．ＣｅＵＢｉ０１．，１９９４，５：３３５—３４６．

［３１］ＹａｄａｖＶ，ＫｕｎｄｕＳ，Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙ

Ｄ，ｅｔ

ａ／．．“ｓｈｔｒｅｇｕｌａｔｅｄ

ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＺ－ｂｏｘｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｍｏｔｅｒｓｂｙ

ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓａｎｄ

ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ

ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＣＯＰＩ

ａｎｄ

ＨＹ５，ｉｎ

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪ．，２００２，３１：７４１—７５３．

［３２］Ｄｏｎａｌｄ

Ｒ

Ｇ，ＣａｓｈｍｏｒｅＡ

Ｒ．Ｍｕｔａｔｉｏｎ

ｏｆｅｉｔｈｅｒＧｂｏｘｏｒＩｂｏｘ

ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｒｏｆｏｕｎｄｌｙａｆｆｅｃｔｓ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｆｒｏｍ

ｔｈｅＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ

ｒｂｃＳ—ＩＡ

ｐｒｏｍｏｔｅｒ［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ．，１９９０，９（６）：１７１７—１７２６．

［３３］１．ａｍＥ，Ｃｈｕａ

Ｎ

Ｈ．Ｇｔｌｂｉｎｄｉｎｇ

ｓｉｔｅｃｏｎｆｅｒｓ

ｌｉｇｈｔ—ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ

ｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２４８：４７ｌ

一４７４．

［３４］ＰｕｅｎｔｅＰ，Ｗｅｉ

Ｎ，ＤｅｎｇｘＷ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ

ｉｎｔｅｒｐｌａｙｏｆ

ｐｒｏｍｏｔｅｒ

ｅｌｅｍｅｎｔｓｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｓ

ｔｈｅｍｉｎｉｍａｌｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓｆｏｒｌｉｇｈｔ

ａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｃｏｎｔｒｏｌｏｆ

ｇｅｎｅ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｉｎ

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ

［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ．，１９９６，１５：３７３２—３７４３．

［３５］ＳｃｈｉｎｄｌｅｒＵ，Ｍｅｎｋｅｎｓ

Ａ

Ｅ，ＢｅｃｈｍａｎｎＨ，ｅｔ

ａ／．．Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍ．

ｅｒｉｚａｔｉｏｎ

ｂｅ“”ｅｅｎ

ｌｉｇｈｔ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄａｎｄｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄ

ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓＧＢＦｂＺＩＰｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ．，１９９２，１１：１２６１

一１２７３．

［３６］ＣｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙＳ。ＰｕｅｎｔｅＰ，Ｏｅｎｇｘｗ，ｅｔ以．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ

ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ

ｏｆ

ｌｉｇｈｔ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｓｐｈｙｓ

ａ

ｃｒｉｔｉｃａｌｒｏｌｅｉｎ

ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ

ｔｈｅ

ｒｅｓｐｏｎｓｅ

ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ

ｏｆ

ｌｉｇｈｔ?ｒｅｇｕｌａｔｅｄ

ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ

ｉｎ

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ】．Ｐｌａｎｔ

Ｊ．，１９９８，１５：６９—７７．

［３７］Ｓａｎｄｈｕ

Ｊ

Ｓ，Ｗｅｂｓｔｅｒ

Ｃ

Ｉ，ＧｒａｙＪＣ，耐越．．Ａ／Ｔ?ｒｉｃｈ

ｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｃｔ

ａｓ

ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｓ

ｅｎｈａｎｃｅｓ

ｏｆ

ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｉｎ

ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ

ｔｏｂａｃｃｏａｎｄ

ｐｏｔａｔｏ

ｐｌａｎｔｓ［Ｊ】．ＰｌａｎｔＭ０１．Ｂｉｏ．，

１９９８，３７（５）：８８５—８９６．

［３８］ＨｏｆｆｍａｎｎＭ，ＢｉｎｄｅｒＳ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｍｐｏｒｔａｎｃｅｏｆｎｕｃｌｅｅｔｉｄｅ

ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓｗｉｔｈｉｎｔｈｅ

ｐｅａ

ａｒｔ，９

ｐｒｏｍｏｔｅｒⅫｌｕｅｎｃ．ｅ［Ｊ】．Ｍ０１．

Ｂｉ０１．，２００２，３２０（５）：９４３—９５０．［３９］Ｓａｒｏｋｉｎ

Ｌ

Ｐ，Ｃｈｕａ

Ｎ

Ｈ．Ｂｉｎｄｉｎｇ

ｓｉｔｅｓｆｏｒ

ｔｗｏ

ｎｏｖｅｌｐｈｅｓｐｈｏ－

ｐｒｏｔｅｉｎｓ，３ＡＦ５ａｎｄ３ＡＦ３，ａｒｅｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｒｂｃＳ－３Ａｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ．，１９９２，４：４７３一镐３．

［４０］Ｇｉｌｍａｒｔｉｎ

Ｐ

Ｍ，ＭｅｍｅｌｉｎｋＪ，ＨｉｒａｔｓｕｋａＫ，ｅｔａ／．．Ｃｈａｒａｃｔｅｒ－

ｉｚａｔｉｏｎ

ｏｆ

ａ

ｇｅｎｅ

ｅｎｃｏｄｉｎｇ

ａＤＮＡ

ｂｉｎｄｉｎｇ

ｐｒｏｔｅｉｎ

ｗｉｔｈ

ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ

ｆｏｒ

ａ

ｌｉｇｈｔ—ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，

１９９２，４（７）：８３９—８４９．