2005版中国药典西洋参质量标准的修订_王旭

·40· Chinese Journal of Information on TCM Apr.2005 Vol.12 No.4

·质量标准研究·

2005版《中国药典》西洋参质量标准的修订

王 旭,王萌萌,邬国庆,张小茜

(北京市药品检验所,北京 100035)

摘要：目的 修订西洋参质量标准,更全面地控制药品质量。方法 采用HPLC法,C18为固定相,用水饱和的正丁醇回流提取,以流动相A(乙腈)与流动相B[水-磷酸(100∶0.1)]进行梯度洗脱；柱温：40 ℃；检测波长：203 nm,分别控制人参皂苷Rb1、Re和Rgl的含量。结果 人参皂苷Rbl在4.088～20.440 μg(r=0.9999)、人参皂苷Rg1在0.21～2.13 μg(r=0.9999)、人参皂苷Re在2.5792～12.8960 μg(r=0.9999)范围内呈良好线性关系。加样回收率人参皂苷Rb1为96.942(RSD=0.59%),人参皂苷Rgl为99.67%(RSD=1.14%),人参皂苷Re为100.52%(RSD=1.81%)。结论 此次修订增加了总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的检查,并修订了含量测定项。修订后的标准能更全面地控制药品质量,含量测定方法简便准确,重复性好。

关键词：中国药典；西洋参；质量标准；修订；高效液相色谱法

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2005)04-0040-03

Revising of Quality Standard of Radix Panacis Quinquefolii for Chp 2005 WANG Xu, WANG

Meng-meng, WU Guo-qing, et al (Beijing Institute for Drug Control, Beijing 100035,China)

Abstract：Objective To revise the quality standard of Radix Panacis Quinquefolii and to control its quality comprehensively. Methods Tests of total ash, aid-insoluble ash and the determination of extractive were added. HPLC with C18 column was revised to control the content of Radix Panacis Quinquefolii, the mobile phase was a linear gradient of acetronitrile and water containing 0.1% phosphate acid, column temperature at 40 ℃ and detection wavelength at 203 nm. Results Ginsenoside Rb1, Ginsenoside Rg1 and Ginsenoside Re showed the good linear relationships at the range of 4.088～20.440 μg (r=0.9999), 0.21～2.13 μg (r=0.9999), 2.5792～12.8960 μg (r=0.9999),

respectively. Their average recoveries：Ginsenoside Rb1 was 96.94% (RSD=0.59%), Ginsenoside Rg1 was 99.67% (RSD=1.14%) and Ginsenoside Re was 100.52% (RSD=1.81%), respectively. Conclusion These methods were simple. The results are accurate and reproducible. It can be used in the quality control of Radix Panacis Quinquefolii comprehensively.

Key words：Chp 2005；Panax quinquefolium；quality standard；revise；HPLC 西洋参来源于五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根。2000版《中国药典》中有性状、薄层色谱鉴别、检查及含量测定项。此次修订增加了总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的检查,并修订了含量测定项。2000版药典采用HPLC法测定西洋参中人参皂苷Rb1的含量,只能测定其中1个成分,此次修订采用梯度洗脱的方法,同时测定西洋参中人参皂苷Rg1、Re与Rb1的总量,更全面地控制了质量。 1 仪器、样品与试剂

高效液相色谱仪,惠普1100。色谱柱C18(4.6 mm×250 mm)；Mili试剂；乙腈为色谱纯；磷酸为优级纯；其他试剂均为分析纯。人参皂苷Rg1(批号0704-200217)、人参皂苷Rb1(批号0703-200221)、人参皂苷Re(批号110754-200218)由中国药品生物制品检定所提供。实验样品分别由北京(2批)、广西、广州、湖北(2批)、四川、吉林(2批)、安徽等药品检验所提供,全部为药材。其中北京(怀柔)2批、吉林(修正药业)1批来源于西洋参种植基地。

2 试验结果 2.1 性状鉴别

同2000版药典未作修订。 2.2 检查

人参及水分的检查同2000版药典未作修订,增订总灰分、酸不溶性灰分浸出物项。

[1]

2.2.1 总灰分 照2000版药典灰分测定法测定不同产地

的10批西洋参的总灰分,其中最高值为4.1%,最低值为2.3%。根据测定结果将总灰分暂订为不超过5.0%。

[1]

2.2.2 酸不溶性灰分 照2000版药典酸不溶性灰分测定

法测定不同产地的10批西洋参酸不溶性灰分,其中最高值为0.267%,最低值为0.003%。根据测定结果将酸不溶性灰分暂订为不超过1.0%。

2.2.3 浸出物 由于本品含皂苷类成分,在乙醇中均有较好的溶解度,因此,认为用醇溶性浸出物能够起到控制西洋参质

[2]

量的目的。参照进口药材部颁标准,采用热浸法,以70%乙

2005年4月第12卷第4期 中国中医药信息杂志 ·41·

醇为溶剂进行测定。测定了不同产地的10批西洋参样品,其中最高值为50.4%,最低值33.5%。因此,将浸出物暂订为不得少于28.0%。 2.3 含量测定

西洋参活性成分为人参皂苷。进口药材部颁标准采用重量法、卫生部标准采用比色法、2000版药典采用HPLC法测定人参皂苷Rb1的含量。采用HPLC法测定人参皂苷含量的

[3]

方法报道有很多,其中色谱柱可采用苯基柱、氨基柱、C18

[2]

结果表明,本方法操作简便、灵敏、重现性好。

2.3.1 色谱条件 以流动相A(乙腈)、流动相B[水-磷酸(100∶0.1)]进行梯度洗脱(见表1)。流速：1.5 mL/min；检测波长为203 nm；柱温40 ℃。理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于5 000(见图1)。 表1 流动相洗脱表

时间(min)

0 25 60 90 100 105

流动相A(%)

19 20 40 55 60 19

流动相B(%)

81 80 60 45 40 81

柱,以C18柱为常用；检测器可采用UV、示差折光、蒸发光散射检测器；测定成分通常为人参皂苷Rb1、Re和Rg1。本实验选择C18柱和紫外检测器,以人参皂苷Rb1、Rg1、Re为检测指标,采用梯度洗脱的方法,对不同地区10批样品进行了测定。

A B C D

注：A.人参皂苷Rg1；B.人参皂苷Re；C.人参皂苷Rb1；D.西洋参样品

图1 西洋参样品HPLC图

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1 5 mg、Re mg,加甲醇分别制成每1 mL含人参皂苷Rg1 0.1 10 mg、Rb1 10

mg、Re 0.4 mg、Rb1 1 mg的溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过3号筛)1 g,精密称定,精密加入水饱和的正丁醇50 mL,密塞,称定重量,置水浴上加热回流提取1.5 h,放冷,再称定重量,用水饱和的正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25 mL,蒸干,残渣加50%甲醇适量使溶解,并转移至10 mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。

2.3.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,测定,即得。 2.3.5 线性关系的考察

2.3.5.1 人参皂苷Rg1线性关系的考察 精密称取人参皂苷Rg1对照品5.33 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,分别精密量取0.5、1、2、3、4、5 mL,置5 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取20 μL,注入液相色谱仪,同法测定,结果人参皂苷Rg1在0.21～2.13 μg范围内线性关系良好,回归方程为：Y=205.49X-2.18,r=0.9999。 2.3.5.2 人参皂苷Re线性关系的考察 精密称取人参皂苷Re对照品16.12 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,分别精密量取1、2、3、4、5 mL,置5 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取20 μL,注入液相色谱仪,同法

测定,结果人参皂苷Re在2.5792～12.8960 μg范围内线性关系良好,回归方程为：Y=149.88X+51.5,r=0.9999。 2.3.5.3 人参皂苷Rb1线性关系的考察 精密称取人参皂苷Rb1对照品25.55 mg, 置25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,分别精密量取1、2、3、4、5 mL,置5 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取20 μL注入液相色谱仪,同法测定,结果人参皂苷Rb1在4.088～20.440 μg范围内线性关系良好,回归方程为：Y=145.24X+31.96,r=0.9999。 2.3.6 稳定性实验 取供试品溶液,分别于配制后0、2、4、8、24 h测定,结果表明,供试品溶液在24 h内基本稳定,RSD分别为0.33%、0.12%、0.19%。

2.3.7 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液(编号1),按上述方法连续进样5次,RSD分别为1.07%、0.38%和1.82%。 2.3.8 重复性实验 按上述方法对同一编号(编号1)样品进行5次测定,RSD分别为1.37%、0.67%和0.67%。 2.3.9 回收率试验

2.3.9.1 人参皂苷Rg1回收率试验 精密称取已知含量的西洋参药材(编号1)粉末约0.5 g,置锥形瓶中,分别精密加入人参皂苷Rg1对照品甲醇溶液(0.968 mg/mL)1 mL,蒸干,再精密加入水饱和的正丁醇50 mL,称重,回流提取1.5 h,放冷,加水

饱和的正丁醇补足减失的重量,滤过,取续滤液

25 mL,蒸干,

残渣加

50%甲醇定量转移至10 mL量瓶中,同法测定。结果见表2。

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表2 人参皂苷Rg1回收率试验

取样量 样品含测得总加入Rg1检出Rg1回收率(g)

量(mg) 量(mg) 量(mg) 量(mg)

(%)

平均回收率(%)

RSD(%) 1.14

表5 西洋参含量测定结果

来源 北京 北京 广西 广州 湖北 湖北 四川 吉林 安徽 吉林

Rg1(%)0.2580.0720.1280.0880.0640.0590.1970.0540.0790.122

Re(%)1.0500.7861.5100.6850.8970.7740.5010.6340.9000.874

Rb1(%) 3.30 1.57 3.61 1.43 2.32 1.64 1.28 2.24 1.26 1.92

Rg1、Re、Rb1总量

4.34 2.43 5.25 2.20 3.28 2.47 1.98 2.93 2.24 2.92

0.5036 1.3094 2.2868 0.9680 0.9774 100.97 0.5025 1.3065 2.2561 0.9680 0.9496 98.10 0.5025 1.3065 2.2642 0.9680 0.9577 98.94 0.5039 1.3101 2.2806 0.9680 0.9705 100.26

0.5006 1.3016 2.2704 0.9680 0.9688 100.08 99.67

2.3.9.2 人参皂苷Re回收率试验 精密称取已知含量的西洋参药材(编号1)粉末约0.08 g,置锥形瓶中,分别精密加入人参皂苷Re对照品甲醇溶液(1.008 mg/mL)1 mL,蒸干,再精密加入水饱和的正丁醇10 mL,称重,回流提取1.5 h,放冷,加水饱和的正丁醇补足减失的重量,滤过,取续滤液5 mL,蒸干,残渣加50%甲醇定量转移至2 mL量瓶中,同法测定。结果见表3。

表3 人参皂苷Re回收率试验

取样量 样品含(g)

测得总加入Re检出Re回收率 平均回

(%) 收率(%)

RSD(%) 1.18

量(mg) 量(mg) 量(mg) 量(mg)

于人参皂苷Rgl与Re分离度较差,尽管人参皂苷Rgl含量较低,为了避免分离不完全造成测定结果不准确,仍把人参皂苷Rgl作为一项指标评价西洋参的含量。不同样品中人参皂苷Rgl、Re、Re与Rbl的含量差异较大,因此不分别规定人参皂苷Rgl、Rbl的限度,而计算人参皂苷Rgl、Re与Rbl的总量。 3.2 色谱柱的选择

曾试用4根3个不同型号的色谱柱：①Discovery C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)SUPELCO柱(44787-01)；②YWC-Pack ODS-AQ(150 mm×4.6 mm,5 μm)；③Phenomenex R Luna C18(250 mm×4.6 mm, (150 mm×4.6 mm,5 μm)；④Discovery 5 μm)SUPELCO柱(44787-05),结果Discovery R C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)SUPELCO柱分离效果最好。曾在岛津、安捷伦等3台液相色谱仪上进行测定,结果重现性较好。 3.3 流动相的选择

由于西洋参中含有多种人参皂苷,人参皂苷Rbl、Rgl和Re极性相差较远,无法选用单一流动相进行分离,故选用梯度洗脱。曾试用多种不同的梯度系统洗脱,以流动相A(乙腈)与流动相B[水-磷酸(100∶0.1)]梯度分离最好。 3.4 提取条件的选择

3.4.1 提取方法的选择 系统考察了提取分离对结果的影响,比较了AB-8大孔吸附树脂柱法、D101大孔吸附树脂柱法、甲醇回流提取法、乙醇回流提取法、正丁醇萃取法、正丁醇回流提取法等,以正丁醇回流提取法最优。

3.4.2 提取溶剂的选择 分别考察了以甲醇、乙醇、70%乙醇、70%甲醇、水饱和的正丁醇为溶剂回流提取,结果以水饱和的正丁醇为溶剂提取效果最佳。

3.4.3 提取方法与时间的选择 分别考察了冷浸、超声、回流提取30、60、90、120 min等条件,结果以水饱和的正丁醇为溶剂,回流提取1.5 h最佳。 参考文献：

[1] 徐礼鑫.中草药有效成分分析法[M].北京：人民卫生出版社,1984. [2] 王 旭.HPLC法测定西洋参中人参皂苷Rb1的含量[J].中国中药杂志, 1999,24(4)：227.

[3] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2000.

R

R

0.0804 0.8444 1.8652 1.0080 1.0208 101.27 0.0803 0.8427 1.8641 1.0080 1.0214 101.33 0.0802 0.8416 1.8498 1.0080 1.0082 100.02 0.0801 0.8405 1.8245 1.0080 0.9840 97.62

0.0805 0.8454 1.8773 1.0080 1.0319 102.37 100.52

2.3.9.3 人参皂苷Rb1回收率试验 精密称取已知含量的西洋参药材(编号1)粉末约0.05 g,置锥形瓶中,分别精密加入人参皂苷Rb1对照品甲醇溶液(1.0220 mg/mL)1 mL,蒸干,再精密加入水饱和的正丁醇10 mL,称重,回流提取1.5 h,放冷,加水饱和的正丁醇补足减失的重量,滤过,取续滤液5 mL,蒸干,残渣加50%甲醇定量转移至2 mL量瓶中,同法测定。结果见表4。

表4 人参皂苷Rb1回收率试验

取样量 样品含(g)

测得总加入Rb1检出Rb1回收率 平均回

(%)

收率(%)

96.94

RSD(%) 0.59

量(mg) 量(mg) 量(mg) 量(mg)

0.0509 1.6689 2.6599 1.0220 0.9919 96.97 0.0504 1.6531 2.6347 1.0220 0.9816 96.05 0.0504 1.6541 2.6508 1.0220 0.9967 97.52 0.0504 1.6544 2.6438 1.0220 0.9894 96.81 0.0501 1.6430 2.6377 1.0220 0.9947 97.33

2.3.10 样品测定 按上述方法对样品进行了测定,结果见表5。由于人参皂苷Rg1、Re与Rb1的含量差异较大,因此不分别规定人参皂苷Rg1、Re与Rb1的限度,将人参皂苷Rg1、Re与Rb1的总和订为不超过1.9%(见表5)。 3 讨论

3.1 含量测定指标的确立

由于西洋参有效成分为人参皂苷,其单个皂苷Rbl、Re、Rg1的含量分布与人参皂苷Rb1的含量高低并无明显的线性关系,因此,仅以人参皂苷Rb1一个指标评价西洋参的质量不够全面,有必要测定3个单一皂苷类成分,使结果更准确。由

(收稿日期：2004-06-22)