儿童难治性肺炎支原体肺炎血清炎性细胞因子的检测_施弦

　　中国医学科学院学报ACTAACADEMIAEMEDICINAESINICAE

　　短篇论著

　　儿童难治性肺炎支原体肺炎血清炎性细胞因子的检测

　　1112

　　施弦，黄秋玲，郁峰，赵宁

　　1

　　2

　　湖州市中心医院儿科，浙江湖州313000

　　浙江大学医学院附属儿童医院血液实验室，杭州310003

　　弦

　　电话:13967281234，电子邮件:zjhzsx@

　　通信作者:施

　　关键词:难治性肺炎支原体肺炎;儿童;炎性细胞因子中图分类号:R725.6

　　文献标志码:A

　　文章编号:1000-503X(2013)02-0221-03

　　DOI:10.3881/j.issn.1000-503X.2013.02.017

　　肺炎支原体肺炎(mycoplasmapneumoniaepneu-monia，MPP)是儿童社区获得性肺炎最重要的病种之一，接近社区获得性肺炎的20%

　　［1］

　　内酯类抗生素治疗无效;(3)双侧多肺叶受累或合并胸腔积液及入院48h内病变扩大(X线胸片检测显示);(4)有脱水表现。正常对照组为同期湖州中心医院儿童保健门诊健康体检儿童共20例，无器质性疾病、近期无急性感染病史，且排除过敏性和免疫相关性疾病。

　　方法

　　对患儿临床特征进行临床分析和总结，根

　　据临床特征分为普通MPP组和RMPP组。入院时入选对象均抽取静脉血2ml，无需抗凝，3000r/min，离心10min(离心半径为13.5cm)取血清，保存置－80℃冰箱内待测。正常对照组同期取样。标本使用流式细胞仪(BD公司FACSCaliburFlowCytometrySystem)检测血清中的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α含量。试剂采用BD公司CytometricBeadAr-ray(CBA)Kit(HumanTh1/Th2CytokineCBA-Ⅱ)，检测软件为BD公司的CellQuest自动软件，数据分析采用BD公司的BDCBA软件。所有检测操作严格按照规程，由专业检验师一人操作完成。

　　统计学处理

　　采用SPSS13.0统计软件，经正态

　　。近年来难治

　　性肺炎支原体肺炎(refractorymycoplasmapneumoniaepneumonia，RMPP)逐渐增多，早期鉴别困难，给后期的治疗带来较多问题。目前尚缺乏RMPP早期鉴别的方法，有研究认为RMPP和患儿机体免疫反应、抗生素耐药、合并多种病原感染及个体基础状态有关

　　［2］

　　，而炎性细胞因子(inflammatorycytokines，ICKs)

　　在机体的防御机制激活中发挥重要作用。本研究拟通过早期对MPP患儿急性期血清ICKs白细胞介素(inter-leukin，IL)-2、4、6、10和肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)的检测，探讨其变化规律，以期能有助于早期识别和早期干预，提高临床治疗效果。

　　对象和方法

　　对象

　　选取2011年1月至2012年6月湖州中心

　　医院儿科就诊并确诊为MPP的68例住院患儿，其中男性38例(55.88%)、女性30例(44.12%)，年龄2～14岁，平均(6.152.91)岁，均符合MPP的诊断标准

　　［3］

　　分布及方差齐性检验，计量资料采用均数标准差表示，方差分析用于组间均数比较，P＜0.05为差异具有统计学意义。

　　。排除支气管哮喘、肺结核等其他呼吸系统

　　疾病，留取标本前未使用免疫调节剂、免疫抑制剂及糖皮质激素

　　［4］

　　结

　　临床特征

　　果

　　。在MPP患儿中根据临床表现将28例

　　～(4)之一可诊断为

　　普通MPP组患儿40例，男性23例、

　　女性17例，年龄2.5～13岁，平均(6.522.80)岁，临床表现均有发热、咳嗽，且病初均为干咳、痰

　　Vol.35No.2221

　　分为RMPP组，符合以下(1)

　　RMPP［5］:(1)符合小儿全身炎症反应综合征标准者;(2)发热10d以上(热度≥38.5℃)，遵医嘱用大环

　　中国医学科学院学报

　　少，入院前平均发热时间(5.432.04)d，入院时肺部体征有干湿罗音的15例(37.5%);RMPP组患儿28例，男性15例、女性13例，年龄2～14岁，平均(5.512.53)岁，临床表现均有发热咳嗽，入院前平均发热时间(6.022.98)d，入院时肺部体征有干湿罗音的12例(42.9%)，合并多发肺部感染20例(71.4%)、胸腔积液8例(28.6%)、肝功能异常17例(60.7%)、脱水表现2例(7.1%)，血液系统改变(包括白细胞减少、贫血、血小板减少等)23例(82.1%)、神经系统改变3例(10.7%)。两组患儿入院前发热时间及年龄、性别比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。对照组儿童20例，男性10例、女性10例，年龄2～13岁，平均(6.082.73)岁，与所有MPP患儿年龄、性别比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。

　　ICKs检测结果

　　与正常对照组比较，MPP组、

　　RMPP组患儿急性期血清中IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α均明显增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，IL-2的表达差异无统计学意义(P＞0.05);RMPP组与普通MPP组相比患儿血清中IL-4、IL-10表达增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达差异无统计学意义(P＞0.05)(表1)。

　　胞内病原体感染中发挥重要作用，Th1细胞参与细胞免疫及迟发型超敏性炎症反应，以Th1为主的免疫反应常和炎症反应及组织损伤有关;Th2细胞可辅助B细胞分化为抗体分泌细胞，主要参与体液免疫应答。Th1细胞分泌IL-2及IFN-γ、淋巴毒素，Th2细胞则产生IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13等，可以作为代表性细胞因子，它们相互作用构筑免疫网络

　　［8］

　　。

　　生理条件下，机体的Th1/Th2细胞处于动态平衡。如果Th1/Th2的极化发生偏移，容易诱发病理变化，而不同病理状况不同的细胞因子表达占主要地位，这也为细胞因子治疗干预提供依据。本研究所有MPP患儿的血清中IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ较正常对照增加，表明Th1和Th2免疫反应参与了MPP的发病过程。

　　本研究IL-4在RMPP患儿急性期血清中增高明显，表明IL-4对RMPP疾病的进展具有重要的鉴别意义，是对RMPP的诊断具有确定作用的细胞因子。IL-4是一种多功能的细胞因子，一方面通过诱导T细胞分化，加强ICKs的释放，促进炎症的发生，另一方面可以促使自身抗体的产生，诱导自身免疫性疾病的发生。IL-10作为一种有效的抗炎物质，通过T辅助细胞下调宿主的反应，抑制促ICks、IL-6、TNF-α等的过度表达，控制由促炎因子引发的过度炎症瀑布反应，减少对机体的损害后果

　　［4，9］

　　，和本研究结果一致;

　　讨论

　　而IL-10在RMPP患儿急性期升高较普通MPP显著，笔者考虑其高水平表达提示机体免疫调节失控，可能Loeches与RMPP的发病机制及病情轻重有关。Martin-等

　　［10］

　　RMPP是指经单用大环内酯类抗生素治疗1周左右病情无明显好转或加重，或合并神经系统、心血管系统、肾脏、胃肠道、皮肤及血液系统并发症，病程＞3周或＞4周甚至迁延不愈的MPP一

　　［7］

　　［6］

　　通过多中心前瞻性研究显示IL-6基因中启动因

　　子变异的患者，社区获得性链球菌肺炎疾病的严重程度明显减低，表明IL-6的表达与抗感染中过度免疫反应致机体损伤有关。也有研究表明社区获得性肺炎中IL-6与IL-10的升高与病情轻重密切相关，可以将两者水平作为预后的预测指标一步研究。

　　IFN-γ是巨噬细胞激活因子，能促使巨噬细胞杀伤病毒感染细胞，并破坏病原。孙立峰等

　　［12］

　　［11］

　　。有研究表明免疫功

　　能紊乱是导致RMPP致病及病情发展加重的重要因素之

　　，而其中细胞免疫功能紊乱、高细胞因子血症是近年研究热点，但具体导致RMPP的炎性细胞因子之间的变化一直不明确。

　　作为免疫反应核心的T淋巴细胞体系中，CD4+T细胞按其细胞因子模式和生物功能可分为两种不同亚群:即Th1、Th2。Th1细胞介导细胞毒效应，在抗细

　　表1

　　分组

　　正常对照组

　　普通肺炎支原体肺炎组难治性肺炎支原体肺炎组

　　。本研究RMPP组与普

　　通MPP组对比血清IL-6差异无统计学意义，有待进

　　研究显示

　　xs，pg/ml)各组患儿血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α的比较(-n204028

　　IL-21.730.441.960.591.860.54

　　IL-41.250.373.281.113.700.88ab

　　IL-64.861.728.093.37a39.786.30a

　　IL-102.670.734.321.207.622.09ab

　　干扰素-γ4.791.5310.593.77a29.6010.55a

　　肿瘤坏死因子-α2.280.872.510.822.990.92

　　ab

　　IL:白细胞介素;与正常对照组相比，P＜0.05;与普通肺炎支原体肺炎组相比，P＜0.05

　　222April，2013

　　儿童难治性肺炎支原体肺炎血清炎性细胞因子的检测

　　MPP急性期感染患儿血清IFN-γ水平显著升高，认为是T淋巴细胞亚群的失调，并和Th1型介导的细胞免疫有关。本研究IFN-γ水平在RMPP及普通MPP患儿组均有高于对照组的趋势，但两组差异无统计学意义，考虑与机体感染病原体后的早期防御反应有关，而与病情轻重无关，故不宜作为预测炎症反应高低和病情程度的准确指标。

　　本研究RMPP、MPP组与对照组相比，患儿TNF-α、IL-4水平差异无统计学意义，并不与IFN-γ一致，与乔红梅等

　　［4］

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　　［12］孙立锋，鞠云飞，陈星，等.肺炎支原体肺炎急性期患

　　的研究结果不一致，这可能与这些细胞因

　　子在肺炎支原体感染患儿的机体免疫反应中未能发挥主导作用有关。IL-2在炎症反应中有重要枢纽作用，代表TH1的功能。有研究表明支原体感染后TH1受抑制，IL-2出现减少等情况

　　［8］

　　，但本研究未见明显改

　　变，考虑在MPP、RMPP中，TH1向TH2转移，IL-2的作用受抑制未明显发挥有关。

　　综上，本研究提示IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ可能和RMPP的发生和发展有密切关系，其中IL-4、IL-10在一定程度上与病情轻重相一致，IL-4在RMPP中升高，而在MPP中和正常组差异无统计学意义，故可通过检测IL-4用于早期识别RMPP，以尽早进行免疫干预，减轻疾病的发展，缩短病程。IL-10在RMPP中显著升高，如果发现IL-10异常升高，也可作为RMPP诊断的参考。但因目前样本较少，支原体感染后免疫状态机制、免疫干预的时机选择及具体干预措施的实行，以及各个细胞因子之间相互影响，均有待进一步深入研究。

　　参

　　考

　　文

　　献

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　　(收稿日期:2013-02-25)

　　Vol.35No.2223