高效液相色谱法测定食用调和油中的游离棉酚

高效液相色谱法测定食用调和油

中的游离棉酚

于加乾

(宜宾市粮油质量监测站，四川宜宾644000)

摘

要：采用反相高效液相色谱法测定食用调和油中游离棉酚，流动相为:甲醇∶2%的磷酸水溶

C18(ODS)柱分离，液∶四氢呋喃=88∶10∶2，紫外235nm处测定。相对于国标GB/T5009．148—2003植物性食品中游离棉酚的测定缩短了分析时间。方法的重复性(相对标准偏差)优于5%，回收率为94%～98%，最低检测限度为1μg/g。可用于食用调和油中游离棉酚的定性定量分析。

关键词：高效液相色谱法;食用调和油;游离棉酚中图分类号：TS227

文献标识码：A

文章编号：1007－7561（2013）04－0078－02

标准溶液配制：精密称取0．1000g的棉酚标准品，用无水乙醚溶解（如不溶用超声波振荡器助溶）。并定容到100mL容量瓶中，此液相当于1．0mg/mL棉酚，置冰箱保存。

棉酚标准液使用液：吸取上述标准溶液5．0mL，置于100mL的容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度。此液相当于50μg/mL的棉酚。1．2

色谱条件

色谱柱：ZorbaxODSC18柱4．6mm×250mm；流动相（体积比）：甲醇∶2%的磷酸水溶液∶四氢呋喃=88∶10∶2；流速为：1．0mL/min；检测波长分别为：235nm；检测中控制柱温为室温。1．3

样品的提取与测定

取约1g的样品油，精密称重，加入5．0mL无水乙醇，玻璃珠数粒，在混匀器上振荡混匀提取5min，置于冰箱冷冻过夜，过滤，离心。滤液用于高效液相色谱分离测定，进样量10μL。

1．0、2．0、5．0、8．0mL的50μg/mL棉另吸取0、

酚标准液，分别置于10mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，混匀，高效液相色谱测定，进样10μL，根据响应值绘制标准曲线。

食用调和油在我国是一种日常普遍食用的油脂，棉籽油常常作为食用调和油中的组成成分，棉籽油含有脂溶性色素棉酚，这种物质能导致胃肠障碍，量大时引起肺出血、呼吸困难等症状。在制这种棉酚大部分会被除去，由于油的精炼过程中，

［1］

其毒性较大，国家标准GB2716—2005规定食用

因此建立快速、高效油棉酚的限量标准为0．02%，

测定食用调和油中的游离棉酚含量的方法具有重要意义。

已应用于棉酚测定的各种分析手段有：重量法、滴定法、分光光度法，由于棉酚和其他相近的色素与相同的分析试剂同样起反应，故这些方法并非特异。色谱法，包括纸色谱、薄层色谱、气—液色谱已应用于棉酚分析上。纸色谱和薄层色谱缺乏敏感性，而气—液色谱法需要预先转换成为棉酚的三甲基硅烷基酯衍生物。高效液相色谱（HPLC）对于分析类似高度选择及比较迅结构的化合物是一种高度敏感、

速的技术。本文描述了用于棉酚定性定量分析的高效液相色谱方法。该方法相对于国标GB/T5009．148—2003植物性食品中游离棉酚的测定［2］缩短了分析时间。

1

1．1

材料与方法

仪器与试剂

Agilent1100型液相色谱仪（配紫外检测器）、

2

2．1

结果与分析

波长的选择

以5．0μg/mL棉酚标准溶液作紫外扫描，在

超声波振荡器；无水甲醇、磷酸、四氢呋喃等

收稿日期：2012－11－05

1974年出生，作者简介：于加乾，男，四川大竹人，工程师．

200～400nm之间有3个吸收峰，280、分别为235、

限度为1μg/g。2．4

试验检测

在10g食用调和油中，添加50μg和200μg棉酚后，按实验方法1．3进行试验，色谱图如图3所示，从得到的色谱图来看，一些未辨出的附加峰的保5．9min，与棉酚的保留时间10．4min留时间是4．1、

相差较远，故不影响棉酚分析

。

370nm，最大吸收峰为235nm，故选用235nm为测定波长。紫外扫描见图1

。

图15．0μg/mL棉酚标准溶液吸收光谱

2．2流动相的选择

8位上的羟基受邻位羟基根据棉酚分子结构，

氢原子易离解，呈较强酸性，故在流动相中的作用，

加酸，抑制游离棉酚离解，使之呈分子状态，在键合柱上保留时间增加，从而达到分离的目的。使用ZorbaxODSC18柱时，洗脱液选择乙睛—水系统（pH2．5磷酸）和甲醇—水系统（pH2．5，磷酸）分别进行了实验，棉酚在柱中的停留时间较长，均在15min以上的要求。可见，棉酚在保持力强的柱填充剂内，洗脱是很困难的。按国标GB/T5009．148—2003规定的流动的色谱图见图2a，保留时间较长，在17min。本方法在上述流动相中加入少量的四氢呋喃后，缩短了保留时间，在10min，并且得到较尖锐的峰形，见图2b。因此最后确定流动相为：乙腈∶水∶四氢呋喃的混合体积比为80∶18∶2，用磷酸调至pH2．5

。

食用调和油样品名称

图3

试样的色谱分离谱图

2．5精密度与回收率

按1．2色谱条件测定了棉酚含量的精密度和回

收率。测定结果见表1，由表1可见：6次平行测定其峰面积的相对标准偏差（RSD）优于5．0%。不同加标水平下测得的回收率在85%～95%之间。符合食品检验分析的要求。

表1

高效液相色谱测定调和油中棉酚的精密度

和回收率试验结果

加标量

/μg

0501002000

棉籽油

50

测定值/μg未检出

46．645．747．948．547．147．6971935．3

98．197．696．995．698．31905．2

1925．6

1885．4

1945．7

1965．3

96．295．294．597．396．1

2．11．01．53．61．42．1

回收率RSD/%/%

48．347．847．548．649．147．3

189

193

187

186

197

200190

3结论

（1）通过在流动相中加入四氢呋喃，改善了棉

酚的分离效果，得到较尖锐的峰形，并且相对于国标GB/T5009．148—2003植物性食品中游离棉酚的测定缩短了分析时间。

（2）本法的重复性（相对标准偏差）优于5%，回收率为94%～98%，最低检测限度为1μg/g。参考文献：

［1］GB2716—2005，S］．中华人民共和国卫生食用植物油卫生标准［

2005．部，

［2］GB/T5009．148—2003，S］．●植物性食品中游离棉酚的测定［图2不同流动相的分离谱图

2．3标准曲线和检测限度

按照实验方法1．3作出标准曲线，棉酚在0～

400μg/mL范围内有良好的线性关系，其最低检测