Hela-EGFP稳转细胞株说明书

上传者：全良
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上传时间：2015-04-24
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Hela-EGFP稳转细胞株说明书

Hela-EGFP细胞株是用表达EGFP的慢病毒感染Hela细胞,经嘌呤霉素筛选得到的多克隆稳转细胞株。细胞稳定表达EGFP荧光蛋白,培养时无需抗生素维持。可作为慢病毒感染实验中的对照细胞株使用。

北京英茂盛业‐产品说明书

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Hela‐EGFP细胞说明书

品名：Hela‐EGFP细胞货号：CG002

包装：1×10^6~1×10^7 1支

细胞株类型：稳定表达EGFP荧光蛋白多克隆细胞株细胞来源：Hela（人子宫颈癌细胞）表达基因：EGFP 抗性：嘌呤霉素

培养基：DMEM高糖培养基+10%胎牛血清消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA 冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO 培养条件：37℃，5% CO2

产品简介：

Hela-EGFP细胞稳定表达EGFP荧光蛋白，培养时无需抗生素维持。可作为慢病毒感染实验中的对照细胞株使用。

细胞株构建方法：

慢病毒载体pLV‐EGFP‐C（货号VL3215）包装慢病毒后感染Hela细胞，用嘌呤霉素筛选得到EGFP过表达多克隆细胞株。

收到细胞的处理：

根据客户所在地及发货季节，我们可能采用干冰运输的冻存细胞或者常温运输的培养瓶细胞两种不同形式发货。收到细胞后根据细胞运输类型采用下面两种方式操作。

干冰运输细胞：

1、 37℃水浴融化细胞冻存液，间或摇动冻存管以加速融化

过程。待细胞冻存液完全融化后，用70%乙醇消毒细胞冻存管外壁。

2、室温200g离心5分钟收集细胞。吸去上清。 3、用1ml培养基重悬细胞。

4、将细胞接种到6mm培养皿或25cm培养瓶中，补加5ml

培养基，37℃ 5%CO2培养。

常温运输细胞：

1、 3000g 10min室温离心收集细胞。 2、用细胞培养基轻柔吹吸重悬细胞。

3、接种到25cm培养瓶或60mm培养皿，补足培养基到5ml。4、放到细胞培养箱，37℃ 5%CO2培养过夜。

5、第二天观察细胞贴壁情况，换液去除未贴壁细胞，继续

培养。

6、细胞生长后及时消化传代，尽早冻存1~2支。

细胞传代：

1、传代前将细胞培养液、PBS和胰蛋白酶温浴到37℃。 2、吸去细胞培养液。 3、用PBS漂洗一次。

4、加入适量胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀

覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱中，37摄氏度消化。在倒置显微镜下观察，看到细胞分开及稍微变圆即可，过度消化可能导致细胞贴壁困难。 5、加入5ml 细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。 6、按1:3到1:5接种细胞。

细胞冻存：

1、将细胞培养液、PBS和胰蛋白酶和冻存液温浴到37℃。 2、冻存的细胞应为状态好，生长旺盛的细胞。

3、按细胞传代方法消化细胞，用适量细胞培养液终止消化，

重悬细胞。

4、室温200g离心10分钟收集细胞，用冻存液重悬细胞，

并调节浓度至大约1×10^6个细胞/ml。分装到细胞冻存管。

5、将细胞冻存管放入程序降温盒，‐80℃过夜。 6、将冻存的细胞转入液氮中。

细胞图片：

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