试剂作用 汇总

试剂

1.DTT

二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT）是一种小分子有机还原剂，化学式为C4H10O2S2。其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）

。DTT

的

异构体为二硫赤糖醇（DTE），即DTT的C3-差向异构体。

二硫苏糖醇 分子结构式

DTT的还原力受pH值的影响，只在pH值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子（-S–）才具有反应活性，硫醇（-SH）则没有；而巯基的pKa一般为～8.3

2.Tris

Tris为弱碱，在25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，

Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。Tris碱的

水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需

值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris

的pKa的影响。

由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被

去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液

中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的

稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得

“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得

“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种缓冲液通常用

于核酸电泳实验中

Tris常用作生物缓冲液，常配成pH值为6.8，7.4，8.0，8.8。其pH值随温度变化很大。一般来说，温度每升高一度，PH值下降0.03。

1M Tris-HCl 6.8和1.5M Tris-HCl 8.8是SDS-PAGE最常用的试剂。

而由Tris配成的TAE，TBE等是DNA电泳最常用的试剂，TE（pH8.0）主要用于溶解DNA。（TE为 Tris加EDTA合称。）

3.Edta

可螯合金属离子，减弱dnase活性 （DNase I活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。

辅因子：Ca2+

活化剂：Mg2+

抑制剂：EDTA (可逆的)

4.Sds SDS是一种已知的能够使蛋白质变性的去污剂。它用于确定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳。它也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞及裂解（核酸：蛋白复合物）。在较高温度下，破坏蛋白质与DNA的结合，使DNA释放出来。

5.DAPI

DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。

6.

Strep-tag技术开发的原理是众所周知的生物素（biotin）和抗生物素蛋白链菌素（streptavidin）之间的结合反应。为了将这种牢固的相互作用用于蛋白质纯化用途，研究者们发现需要一个肽，该肽与重组蛋白质融合后，能够结合在streptavidin的生物素结合口袋，从而作为纯化tag。最后研究者们成功设计出一个只由8个氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)构成的短序列并称之为Strep-tag II

The Strep-tag is a synthetic peptide consisting of eight amino acids (Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys). This peptide sequence exhibits intrinsic affinity towards Strep-Tactin, a specifically engineered streptavidin

7.

HA标签系统利用一个HA (流感病毒血凝素，influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛应用于多种细胞类型，相应的HA标签抗体也被广泛应用。HA 标签抗体能特异识别C末端或N末端带有HA标签(HA-tagged)的融合蛋白，也可以用于检测和HA tag融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测HA tag融合表达蛋白等。

8

loading buffer

中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的紫兰色的条带是溴酚蓝，在0.6%、1%、

1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA

片段大致相同；后面的兰色条带是二甲苯青，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。而对于PAGE胶他们的迁移速率也分别不同。

loading buffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯氰FF起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液，加loading 100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解。

6×loading buffer 一般配置：

30mM EDTA

36%(v/v) Glycerol

0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF

0.05%(w/v) Bromophenol Blue

主要用于DNA电泳

9．BrdU

5-溴脱氧尿嘧啶核苷

可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。

10．LB培养基

液态

根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950 ml去离子水中加入:

胰蛋白胨10g

酵母提取物5g

NaCl 10g

摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌21min.

固态

LB固体培养基1L和液体一样，加10g~15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板

1.配制：100mlLB培养基加入1~1.5g琼脂粉

2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。

3.倒板：一般15ml-20ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。

4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。

ph值需要控制在7.4

11.胰蛋白胨

胰蛋白胨，又称胰酪蛋白胨（Casein Tryptone）[1] 、胰酶消化酪蛋白胨（Pancreatic digest of casein），是一种优质[2] 蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。