高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞表达T淋巴细胞毒性相关抗原4水平的影响及受体机制

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?实验研究?

高迁移率族蛋白Ｂ１对小鼠调节性Ｔ细胞表达Ｔ淋巴细胞毒性相关抗原一４水平的影响及受体机制

许长涛姚咏明

【摘要ｌ李为民邹一平目的观察高迁移率族蛋白Ｂ１（ＨＭＧＢｌ）对小鼠调节性Ｔ细胞（Ｔｒｅｇ）表达细胞毒性Ｔ淋巴细胞相关抗原（ＣＴＬＡ）－４水平的影响及其受体机制。方法免疫磁珠法分离正常Ｃ３１－Ｉ／ＨｅＮ［（Ｔｏｌｌ样受体４（ＴＬＲ４）野生型）］小鼠脾脏ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ，接种于细胞培养板，各细胞培养孔均加入可溶性抗ＣＤ３和可溶性抗ＣＤ２８作为辅助活化剂。应用／不应用抗１１ＬＲ４抗体预封闭ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表面，Ｉ＇ＬＲ４，观察ＨＭＧＢｌ刺激ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ｃＴＬＡ４的时间一效应关系和剂量．效应关系。结果ＨＭＧＢｌ（Ｏ．１ｍｓ／Ｌ）刺激ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ，ｃ７Ｉｕ．４在２４、４８、７２ｈ表达水平（４７．５６±５．４９、３５．８３±４．９６和３１．９４±４．６５）较正常对照组水平（７９．４２±２．７９）均显著下降（Ｐ＜０．０１），以４８、７２ｈ组下降尤为明显；不同剂量ＨＭＧＢＩ刺激ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅ９４８ｈ其ｃｌｌＡ４表达水平显著下调（Ｐ＜０．０１），其中以０．１ｍｓ／Ｌ和１ｍｓ／Ｌ组表达水平（分别为３３．３４±４．００和２９．９０±４．３０）降低幅度尤为明显。经封闭ＴＬＲ４预处理后，给予ＨＭＧＢｌ（ｏ．１ｍｇ／Ｌ）刺激２４、４８和７２ｈＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ＣＴＬＡ－４的水平（９０．３９±８．８０、９３．１３±４．８０和８０．２９±４．３１）均较对正常照组（７１．０３±４．３４）显著增强（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；而不同剂量ＨＭＧＢｌ刺激ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ４８ｈ，仅以０．１ｍｓ／Ｌ组能显著上调ＣＴＬＡ－４的表达水平（Ｐ＜０．０１）。结论ＨＭＧＢＩ通过ＴＬＲ４负向调节ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ＣＴＬＡ－４水平，从而影响Ｔｒｅｇ的免疫活性。

【关键词】高迁移率族蛋白Ｂ１；Ｔｏｌｌ样受体４；调节性Ｔ细胞

Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｅｃｅｐｔｏｒ

ｓｉｏｎｏｆｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴｍｅｃｈａｎｉｓｍｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ－ｌｐｒｏｔｅｉｎｏｎｅｘｐｒｅｓ－ＸＵＣｈａｎｇ一ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄａｎｔｉｇｅｎ４ｉｎｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌｓｉｎｍｉｃｅ

啪’，ＹＡＯＹｏｎｇ—ｍ垤，廿耽ｉ—ｍｉｎ，ｅｔ以．’Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ

ｔＯｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，＆ｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌＡ嘶ｌｉｕｔｅｄｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＰＬ４ＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９１，Ｃｈｉｎａ

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ－１Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＹＡＯ物昭一ｍｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ（ＨＭＧＢＩ）

ｃｅｌｌｓ（Ｔｒｅｇ）【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄａｎｔｉｇｅｎ４（ＣＴＬＡ４）ｉｎｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴ

ａｎｄｉｔｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｅｃｅｐｔｏｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｍｉｃｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴｒｅｇｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓｐｌｅｅｎｓｏｆＣ３Ｈ／ＨｅＮ［Ｔｏｕ－ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４（１＇ＬＲ４）ｗｉｌｄｔｙｐｅ］ｍｉｃｅｂｙｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｓｗｅｒｅｓｅｅｄｅｄｏｎ９６一ｗｅｌｌｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｐｌａｔｅｓｃｏａｔｅｄｗｉｔｈｌｍｓ／Ｌａｎｔｉ—ＣＤ３ａｎｄｓｏｌｕｂｌｅＣＤ２８．Ｂｙｔｒｅａｔｍｅｎｔ证ｔ｝ｌｏｒｗｉｔｈｏｕｔａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅＴＬＲ４ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｔｈｅｔｉｍｅ－ａｎｄｄｏｓｅ．ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ

ｓｉｏｎ

ｏｎｏｎｒｅｓｐｏｎｓｅｓｂｅｔｗｅｅｎＨＭＧＢＩｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄＣＴＩ。Ａ－４ｔｏｅｘｐｒｅｓ．ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＣｏｍｐａｒｅｄＷａＳｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓ．ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＴＬＡ４ａｔＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇｓｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｂｙ０．１ｍｇ／ＬＨＭＧＢＩｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｏｗｎ．ｒｅｇｕｌａｔｅｄ２４．４８．ａｎｄ７２

ａｔｈ（４７．５６±５．４９，３５．８３４－４．９６，ａｎｄ３１．９４±４．６５．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）（ａｌｌＰ＜０．０１），ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ

ｈ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ．ｍａｒｋｅｄｌｙ

ＨＭＧＢｌａｔ４８ａｎｄ７２ｄｅｃｒｅａＳｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉ＋ｏｎｏｆＣＴＬＡ－４ｖａｒｉｏｕｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（０．０ｌ。０．１ａｎｄ１ｗｉｔｈＣ１Ｍ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇｓｍｓ／Ｌ）ｆｏｒ４８ｈ（５８．８７±６．７０，３３．３４±４．００ａｎｄＷａｓｆｏｕｎｄｔｒｅａｔｅｄ２９．９０±４．３０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｌｌＰ＜０．０１）．Ａｆｔｅｒｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｎＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴｒｅｇｓＷａＳｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｄｂｙＨＭＧＢｌ（Ｏ．１ｗｉｔｈ麟ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅＣＴＬ度４ａｔｍｓ／Ｌ）ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ２４，

ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｉ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２００９．０３．０１５

基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０６７２１７８，３０８７２６８３，

３０８００４３７）；国家重点基础研究发展规划项目（２００５ＣＢ５２２６０２）

作者单位：１０００９１北京。解放军总医院第二附属医院肝胆外科（许

长涛、李为民、邹一平）；解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所

（姚咏明）

通信作者：姚咏明

生堡塞堕窆Ｅ越盘查！Ｑ塑生ｉ旦筮堑鲞筮！魍曼ｈｉ！』量翌§！垡：丛！望堕！Ｑ鲤：！！！：堑：丛！：２

?３１３?

４８ａｎｄ７２

ｈ（９０．３９±８．８０．９３．１３±４．８０ａｎｄ８０．２９±４．３１．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，Ｐ＜０．０５ｏｒＰ＜０．０１）．Ａｆｔｅｒ

ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓｏｆＨＭＧＢｌｆ矗４８ｈ．ｔｈｅＣ，ｎＡ－４ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｎＣＩＭ＋ＣＤ２５＋ＴｒｅｇｓＷａＳｍｕｃｈｈｉＩｇＩｌｅｒｉｎ０．１

ｍＳ／ＬＨＭＧＢｌ

ｇｒｏｕｐ（９４．９８±６．３５）ｔｈａｎｉｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ

ｃａｎ

ＷｉｔｈＨＭＧＢｌｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，ＴＬＲ４ｍａｒｋｅｄｌｙｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅＣＴＬＡ－４ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓ

ｏｎ

ＣＤ４＋Ｃ１）２５＋

Ｔｒｅｇｓ，ｔｈｅｒｅｂｙｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｔｈｅｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＴｒｅｇｓ．

【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘｌｐｒｏｔｅｉｎ；Ｔ０１ｌｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｅｅＨｓ

调节性Ｔ细胞（Ｔｒｅｇ）在机体免疫系统中发挥负向免疫调节作用，其免疫活性状态影响着机体的免疫稳态【ｌ’２１。调控Ｔｒｅｇ免疫活性的机制十分复杂，其中Ｔｏｌｌ样受体（ＴＬＲｓ）参与其调节过程∞］。ＴＬＲ４是ＴＬＲｓ家族的重要一员，探讨，Ｉ＇ＬＲ４是否参与调节Ｔｒｅｇ免疫活性的过程对于认识脓毒症的发生、发展有重要意义。新近研究提示，高迁移率族蛋白Ｂ１（ＨＭＧＢｌ）是重要的晚期炎症因子，在严重感染与免疫紊乱过程中扮演重要的角色”Ｊ。本实验旨在观察ＨＭＧＢｌ对小鼠ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达细胞毒性Ｔ淋巴细胞相关抗原４（ＣＴＬＡ－４）水平的影响，探讨其影响Ｔｒｅｇ免疫活性的受体机制。

材料和方法

１．材料：健康清洁级Ｃ３Ｈ，／ＨｅＮ小鼠（ＴＬＲ４野生

型，北京维通利华动物公司），雄性，体质量（２２±２）ｇ。

ＲＰＭＩ

１６４０培养基（北京天润善达生物有限公司），胎

牛血清（天海生物有限公司），ＨＭＧＢｌ（美国Ｓｉｇｍａ公司）；功能纯化级抗小鼠ＣＤ３／ＣＤ２８（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｅｅ）；功

能纯化级抗小鼠ＴＬＲ４抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）；异硫氰酸

荧光素（ＦＩＴＣ）标记的抗小鼠ＣＴＬＡ．４抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ

Ｂｉｏｔｅｃｈ

Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）；ＦＩＴＣ标记的抗小鼠ＣＩＭ抗体（美

国ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ公司）；自制磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ），调整ｐＨ７．２，并过滤除菌；ＭｉｎｉＭＡＣＳ磁性分离仪（美国

Ｍｉｈｅｎｙｉ

Ｂｉｏｔｅｃ公司）；ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ流式细胞仪（美国

ＢＤ公司）。

２．ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ制备：小鼠断颈处死，无菌取脾脏，置于平皿中，加入３—５

ｍｌ

ＰＢＳ，用１０Ｈｄ注射器活塞

研磨，研磨液过４００钼滤网２次。收集滤过细胞悬液，注入尖底离心管中，加入溶血素至１５ＩＩｌｌ，混匀后静置１０

ｍｉｎ。２０００

ｒ／ｍｉｎ离心、洗涤２次，弃上清，取下层细胞。

３．磁珠孵育和磁性分选：采用ＭｉｎｉＭＡＣＳ免疫磁性分离系统进行两步分离。每１

Ｘ

１０

７个细胞加入１０

一生物素抗体４℃孵育１０ｍｉｎ。加入２０“ｌ抗生物素

磁珠，１０出藻红蛋白（ＰＥ）标记的抗一ＣＤ２５抗体４℃孵

育１５ｍｉｎ，离心洗涤。细胞定容至０．５ｍｌ，经ＬＤ柱阴性选择后，收集流出细胞悬液，离心洗涤弃上清获取

ＣＩＭ＋Ｔ细胞。每１

Ｘ

１０７细胞加入１０斗ｌ抗．ＰＥ磁珠，４

℃孵育１５ｍｉｎ，离心洗涤。经ＭＳ柱进行第２步分选，流出液为ＣＤ４＋ＣＤ２５一Ｔ细胞悬液，将分离柱移出磁场，加压洗脱，收集细胞，计数细胞。用１０％ＦＣＳ—ＲＰＭＩ１６４０培养基重悬ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ，调整细胞浓度为１×１０６爪／ＩＩｌｌ，接种于９６孔细胞培养板。

４．细胞分组及处理方法：设ＴＬＲ４受体封闭组（每

１０６

ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ加入抗体２灿ｇ，共孵育２ｈ以充

分封闭细胞表面ｒＩ．ＬＲ４）和非封闭组，分别观察各组的剂量－效应关系和时间－效应关系。剂量一效应关系实验：各组根据加入ＨＭＧＢｌ（刺激４８ｈ）剂量不同随机分为４个亚组，即０．０１、０，ｌ、ｌｍｓ／Ｌ组和正常对照组，每组各４个复孔（ｎ＝４）；时间．效应关系实验：根据ＨＭＧＢｌ（刺激剂量为０．１ｍｇ／Ｌ）刺激时间不同，各组随机分为４个亚组，即２４、４８、７２ｈ组和正常对照组，每组各４个复孔（／＇ｔ＝４）。各孔均加入可溶性抗一ＣＤ３（１ｍｇ／Ｌ）和可溶性抗一ＣＤ２８（１ｍｓ／Ｌ）作为辅助活化剂¨ｊ。在３７ｏＣ、５％ＣＯ，的细胞培养箱中培养。流式细胞仪检测ＣＴＬＡ－４的表达平均荧光强度水平：收集细胞，用预冷的ＰＢＳ洗涤培养孔３次，离心洗涤，定容１００出，直接加入ＦＩＴＣ标记的抗小鼠ＣＴＬＡ－４抗体。ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤２次去除未结合荧光抗体，重悬于ＰＢＳ，定容至０．５ｍｌ通过流式细胞仪检测。ＣＴＬＡ４表达水平采用平均荧光强度来表示。

５．统计学方法：数据采用ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ数据分析软１２．ｏ统计软件包对数据进行单因素方差分析。

结

果

１．Ｔｒｅｇ纯度分析：由于分选ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ过

２．未封闭组中ＨＭＧＢｌ影响ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表ｍｓ／Ｌ）刺激后２４、４８、７２

４－５．４９、

孵育３０件分析。实验数据以均数４－标准差（露４－８）表示。采用

ＳＰＳＳ

程中ＣＤ２５已经被ＰＥ标记，仅用ＦＩＴＣ．ＣＤ４抗体标记细胞，利用流式细胞仪检测ＣＤ４和ＣＤ２５平均荧光强度，反映Ｔｒｅｇ纯度。右上象限内荧光点代表目的细胞，多次分选所得ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ纯度均在９１％以上；且所获ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ经台盼蓝检测活性大于

９７％。

达ＣＴＬＡ４水平的时间一效应关系：正常对照组小鼠ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表面表达ＣＴＬＡ＿４水平较高（７９．４２±２．７９）。ＨＭＧＢｌ（０．１ｈ的ＣＴＬＡ４表达平均荧光强度分别为４７．５６

?３１４?

主垡塞鲨处型盘盍！Ｑ塑生！旦筮堑鲞筮！翅垦！也』量翌坠强：丛！竺！！Ｑ螋：！！！：堑：盟！：１

３５．８３±４．９６和３１．９４±４．６５，与正常对照组差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０１），其中以４８、７２ｈ组平均荧光强度下降最为明显，并与２４ｈ组差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；而４８、７２ｈ组之间的ＣＴＬＡ４表达水平差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。

３．未封闭组中ＨＭＧＢｌ影响ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ＣＴＬＡ－４水平的剂量一效应关系：ＨＭＧＢｌ作用４８ｈ

后不同剂量组（Ｏ．０１、０．１、１ｍｇ／Ｌ）ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表

达ＣＴＬＡ－４的平均荧光强度分别为５８．８７

４－６．７０、

３３．３４±４．００和２９．９０４－４．３０，与正常对照组（８０．７１

４－

６．０４）比较，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０１），其中以

０．１

ｍｇ／Ｌ和１

ｍｇ／Ｌ组Ｃ’卧４表达水平降低的最明

显，并分别与０．０１ｍｇ／Ｌ组差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。

４．封闭组中ＨＭＧＢｌ影响ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ＣＴＬＡ－４水平的时间一效应关系：ＨＭＧＢｌ（０．１ｍｇ／Ｌ）刺激后２４、４８、７２

ｈ

ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ｃＴＬＡ４的平

均荧光强度为９０．３９４－８．８０、９３．１３

４－４．８０和８０．２９

４－

４．３１，与正常照组（７１．０３±４．３４）比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），其中以２４和４８ｈ组的差异最显著，并分别与７２ｈ组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。

５．封闭组中ＨＭＧＢｌ影响ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ＣＴＬＡ－４水平的剂量一效应关系：ＨＭＧＢＩ刺激４８ｈ后不同剂量组（０．０１、０，１、１ｍｇ／Ｌ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达Ｃ７ｒＬＡ一４的平均荧光强度分别为８３．９５

４－４．７４、９４．９８

４－

６．３５和７７．１８４－５．４１，与正常对照组（７６．５３４－５．３７）比较，０．１ｍｓ／Ｌ组的差异有统计学意义（Ｐ＜０，０１）。

讨

论

Ｔｒｅｇ作为重要的免疫调节性细胞，既可抑制免疫病

理性反应程度，又能限制机体ＣＤ４＋和ＣＤ８＋Ｔ细胞对肿瘤、异物和广谱病原体的应答强度”ｊ。ＣⅡＡ＿４是Ｔｒｅｇ发挥免疫抑制效应的重要膜表面分子，可与抗原提呈细胞或者活化的Ｔ细胞表面Ｂ７（ＣＤ８０和ＣＤ８６）之间发生交联作用，传递反向信号来抑制效应细胞的活性，因此

可通过Ｃ瞰一４表达情况反映Ｔｒｅｇ抑制功能的改变ＭＪ。

我们既往研究证实，ＨＭＧＢｌ能诱导ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴｒｅｇＣＴＬＡ－４表达减弱，进而影响ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ免疫调节

活性，但其作用的受体机制尚不清楚¨。。

本实验结果显示，正常Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ小鼠ＣＤ４＋

ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ受到ＨＭＧＢｌ刺激后，其ｃⅡＡ．４表达水平

随作用时间延长呈现显著下调趋势，于７２ｈ达最低点；同时，ＣＴＩＡ＿４表达强度也与ＨＭＧＢｌ刺激浓度呈现负相关，ＨＭＧＢｌ浓度达到１ｍｇ／Ｌ时其表达水平处于最低。而ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ经过封闭ＴＬＲ４预处理后，

０．１ｍｇ／Ｌ

ＨＭＧＢｌ可诱导ｃ７ｒＬＡ－４表达水平明显上调，

于４８ｈ达到峰值，２４～７２ｈ其表达水平均显著高于正常对照组；同时本组资料显示，ＨＭＧＢｌ仅以０．１

ｍｓ／Ｌ

刺激ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ后其ＣＴＬＡ４表达水平显著上调，币徊．０１ｍｓ／Ｌ和１ｍｇ／Ｌ组上调效应并不明显。从时间．效应关系和剂量一效应关系来看，１１ＬＲ４可下调由ＨＭＧＢｌ刺激后ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ＣＴＬＡ４的水平，但随时间和剂量的变化，Ｃ１ＬＡ４表达水平会趋于稳定而不再发生显著改变。而在消除了ＴＬＲ４作用后，ＨＭＧＢＩ可显著增强ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ＣＴＬＡ－４水平，进一步说明ＴＬＲ４是负向调控ＨＭＧＢｌ介导ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ表达ＣＴＬＡ４的重要受体之一，提示ＨＭＧＢｌ可通过ＴＬＲ４调节Ｔｒｅｇ的免疫活性，其确切免疫效应信号途径有待深入探讨。

ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ可以通过多种途径调节机体免疫状态，从而影响机体炎症与免疫反应的发展方向¨Ｊ。因此，对于ＨＭＧＢｌ与ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ之间相互关系的研究将有助于深入了解严重感染病理过程中炎症、免疫状态演变规律及其可能的作用机制。

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（收稿日期：２００８－０４－２８）