HPLC_ELSD法同时测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量_唐元军

中药新药与临床药理2010年11月第21卷第6期

表6

123456

0.29070.29310.29220.29530.29450.3017

·651·

3.2因为合成龙脑为消旋龙脑，采用气相色谱法测定时，色谱图上分为异龙脑和龙脑2个峰。一般认为合成龙脑的起效成分主要为龙脑，故在计算含量时，只取龙脑峰面积作为龙脑的峰面积。用本法测定喉疾灵

99.76

1.25

喉疾灵胶囊中龙脑的加样回收率实验结果

5.95736.00655.98806.05156.03516.1827

5.986.215.896.576.516.51

12.049512.072612.625512.6674

99.0798.3999.9799.04

序号取样量/g样品含龙脑量/mg加入龙脑量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%

11.9843101.94

胶囊中龙脑的含量，方法简单、快速、准确、专属性强，对本品中的易挥发成分龙脑进行定量控制，能有效的保证本品的质量。参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准[S].

1992，（5）：177.

[2]陈建南，曾惠芳，李耿等.龙脑樟挥发油及天然龙脑成分分析[J].

中药材，2005，28（9）：781-782.

[3]潘金火，严国俊.气相色谱法测定溃可宁贴片中龙脑的含量[J].中

成药，2005，27（4）：469-470.

[4]范斌，柏冬，刘泓等.气相色谱法测定艾奇康胶囊中龙脑的含量

[J].中国实验方剂学杂志，2009，15（6）：15-17.

[5]聂少平，王远兴，谢明永.气相色谱法测定八味锡类散中龙脑的含量[J].中成药，2004，26（1）：80-82.

[6]郑剑红，肖树雄.气相色谱法测定复方蛇脂软膏中龙脑的含量[J].海峡药学，2004，16（4）：66-67.

12.6719100.16

谱仪，按照“2.1”色谱条件测定，按照内标法计算样品中龙脑含量，结果供试品中龙脑含量分别为：5.13mg/粒，5.16mg/粒，5.06mg/粒。

3讨论

3.1对提取龙脑进行了考察，用正己烷、乙酸乙酯对样品进行不浸泡以及浸泡过夜处理后，超声提取20min，测定其中的龙脑量，结果浸泡过夜后乙酸乙酯的提取效率较高。对超声提取时间进行了研究，乙酸乙酯为溶剂，浸泡过夜后，超声处理10，20，30，40min，并分别对其中的龙脑进行含量测定；结果表明，超声提取30min样品中的龙脑基本提取完全。故供试品溶液超声提取时间定为30min。

（编辑：修春）

HPLC-ELSD法同时测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量

唐元军，陈育琳，陈庆辉（福建省漳州市药品检验所，福建漳州363000）摘要：目的

建立HPLC-ELSD法同时测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定方法。方法

应用Wa－猪去氧胆

tersSymmetryC18（4.6mm×150mm，5μm）色谱柱，甲醇-0.2%甲酸溶液（80∶20）为流动相，流速：1.0mL·min-1；柱温：40℃；检测器为ELSD，漂移管温度：85℃，载气为高纯氮气，流量：2.0L·min-1。结果

），平均加样回收率为97.5%，RSD=2.3%；鹅去酸在0.5192μg～5.1920μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9994

），平均加样回收率为96.0%，RSD=1.6%。结氧胆酸在0.5012μg～5.0120μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9998论

该方法简便准确，灵敏度高，可用于猪胆粉的质量控制。

文献标识码：A

文章编号：1003-9783（2010）06-0651-03

关键词：猪胆粉；HPLC-ELSD；猪去氧胆酸；鹅去氧胆酸中图分类号：R284.1

SimultaneousDeterminationofHyodeoxycholicAcidandChenodeoxycholicAcidinSuisFellisPulvisbyHPLC-ELSD

TANGYuanjun，CHENYulin，CHENQinghui（ZhangzhouInstituteforDrugControlofFujianProvince，Zhangzhou363000Fujian，China）Abstract:Objective

ToestablishaHPLC-ELSDmethodforthesimultaneousdeterminationofhyodeoxycholicacid

TheHPLCmethodwasused.Thechromatographycondi－

anddhenodeoxycholicacidinSuisFellisPulvis.Methods

收稿日期：2010-08-20

作者简介：唐元军（1966-），男，副主任药师，大学本科，研究方向：中药质量控制。Email：tangyuanjun1966@http://wendang.chazidian.com。

·652·

TraditionalChineseDrugResearch＆ClinicalPharmacology，2010November，Vol．21No．6

tionswereasfollows:WatersSymmetryC18（4.6mm×150mm，5μm）column，methanol-0.2%formicacidsolu－tion（80∶20）asmobilephase，flowrateat1.0mL·min-1，thecolumntemperatureat40℃.ELSDwasusedasthedetector，thedrifttubetemperaturewas85℃andthenitrogenflowratewas2.0L·min-1.ResultsThecalibrationcurvesofhyodeoxycholicacidandchenodeoxycholicacidwerelinearintherangeof0.5192～5.1920μg（r=0.9994）and0.5012μg～5.012μg（r=0.9998），respectively，andtheaveragerecoveries（n=6）were97.5%（RSD=2.3%）and96.0%（RSD=1.1%），respectively.ConclusiontycontrolofSuisFellisPulvis.

Keywords:SuisFellisPulvis；HPLC-ELSD；Hyodeoxycholicacid；Chenodeoxycholicacid

Themethodissimpleandsensitive，anditcanbeusedforquali－

猪胆粉为猪科动物猪胆汁的干燥品，收载于《中国药典》2010年版

[1]

mV

70060050040030020010000

2

4

1

，具有清热，润燥，解毒，止咳

平喘至功效。临床主要用于热病燥渴，目赤，黄疸，哮喘，痈疮肿毒。猪胆粉主要含有猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆红素等活性成分。有文献报道采用薄层扫描法[1]和高效液相色谱法[2]测定猪胆粉中猪去氧胆酸的含量；高效液相色谱法[3]测定猪胆粉结合胆酸中甘氨酸和牛磺酸的含量。尚无文献报道同时测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量。为了更准确测定和体现猪胆粉质量，本文采用HPLC-ELSD法同时测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量。该方法简便，准确，灵敏度高，重现性好。

2

6

t/min

8

a.混合对照品

mV70060050040030020010000

2

4t/min

6

82

1

1仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪，AlltechELSD（中国药品生3300型蒸发光散射检测器。猪去氧胆酸

物制品检定所，批号：100087-200610），鹅去氧胆酸（中国药品生物制品检定所，批号：110806-200704）。甲醇为色谱纯,水为超纯水，其余试剂均为分析纯。猪胆粉由福建省漳州市片仔癀制药有限公司提供，批号分别为：0901003，0901011，0903002，0903005，0903010，0904001，0904007，0909003，0909004，0910006。

b.供试品

图1猪胆粉的HPLC色谱图

1、猪去氧胆酸2、鹅去氧胆酸

醇适量，振摇溶解，用甲醇定容，即得含猪去氧胆酸0.5192mg·mL-1、鹅去氧胆酸0.5012mg·mL-1混合对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备[1]

取本品细粉约0.1g，精密

称定，加10%氢氧化钠溶液10mL，120℃加热4h，放冷，滴加盐酸调节PH值至2～3，摇匀。用乙酸乙酯提取4次，每次10mL，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过即得。2.4线性关系考察

分别取混合对照品溶液1μL、2

μL、4μL、6μL、8μL、10μL，进样测定，以进样量常用对数为横坐标，峰面积积分值常用对数为纵

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：WatersSymmetryC18（4.6

mm×150mm，5μm）。流动相：甲醇-0.2%甲酸溶液（80∶20）；流速：1.0mL·min-1；柱温：40℃；ELSD漂移管温度85℃，载气为高纯氮气，流量：2.0L·min-1。在本色谱条件下两组分分离度大于1.5，且样品中其他成分对二者的测定无干扰。理论塔板数按猪去氧胆酸计算大于5000。结果见图1。2.2混合对照品溶液的制备

分别精密称取经五氧化

二磷减压干燥12h的猪去氧胆酸对照品12.98mg，鹅去氧胆酸对照品12.53mg于25mL量瓶中，加甲

中药新药与临床药理2010年11月第21卷第6期

·653·

表2

样品批号0901003090101109030020903005090301009040010904007090900309090040910006

坐标绘制标准曲线，得猪去氧胆酸回归方程为Y=1.4236X+3.4215，r=0.9994，鹅去氧胆酸回归方程为Y=1.5062X+3.0871，r=0.9998，表明猪去氧胆酸在0.5192μg～5.1920μg，鹅去氧胆酸在0.5012μg～5.0120μg范围内呈良好的线性关系。2.5精密度试验

取同一供试品溶液连续进样6次，

每次5μL，记录峰面积，结果猪去氧胆酸峰面积的RSD=1.1%，鹅去氧胆酸峰面积的RSD=1.0%。2.6重复性试验

精密称取同一供试品（批号：

0901003）6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，依法测定，测猪去氧胆酸含量为17.7%，RSD为1.9%，鹅去氧胆酸含量为19.1%，RSD为1.9%。2.7稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液5μL，

分别于配置后0h、2h、4h、8h、12h、24h进样，测得猪去氧胆酸峰面积RSD=1.1%，鹅去氧胆酸峰面积RSD=1.0%。表明供试品溶液在24h内稳定。2.8加样回收率试验

取供试品（批号：0901003）6

份，精密称定，分别加入猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸对照品溶液适量，按2.3项下供试品测定方法制备和测定，得猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸平均回收率分别为97.5%和96.0%，RSD分别为2.3%和1.6%。结果见表1。

表1

取样量样品中含量/mg/g

A

B9.589.589.619.579.579.59

0.050158.880.050188.880.050328.910.050098.860.050118.870.050228.89

猪胆粉中猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸含量（n=3）

猪去氧胆酸含量/%

17.120.121.517.018.822.120.619.719.420.4

RSD/%1.91.82.02.22.11.91.52.32.21.7

鹅去氧胆酸含量/%

19.122.223.619.320.124.322.321.921.122.5

RSD/%1.92.11.72.01.82.11.92.21.82.2

应取决于被分析物质颗粒的数量和大小，已成为分析无紫外吸收或紫外吸收差类成分的有力工具，所以本文选用HPLC-ELSD法。3.2样品的处理

本文通过用10%氢氧化钠溶液水解

样品，使样品中结合型猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸游离，从而更真实反映样品含量。3.3测定条件的选择

比较不同比例甲醇-水、甲醇-甲酸水溶液、乙腈-水、乙腈-甲酸水溶液等多种流动相系统，实验结果表明甲酸浓度对峰型影响较大；ELSD检测器的漂移管温度和载气流速对峰型和灵敏度也有较大影响。根据实验最终确定采用本法作为测定条件。3.4综合分析

RSD/%

猪胆粉加样回收率试验结果

加入量/mg

测得量/mgA

B

回收率/%A

B

平均回收率/%A

B

由于猪的品种、大小、生理状况、喂

养条件、制备工艺等存在很大差异，10批猪胆粉所含猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸差别较大。10批样品分别按本法和《中国药典》2010年版一部猪胆粉含量测定项下方法测定，其中猪去氧胆酸的含量结果的

A7.117.119.019.01

BAB

7.6815.6516.9995.2296.487.6815.7816.7597.0293.369.5218.0118.94101.098.009.5217.4518.6795.3495.59

97.596.02.31.6

RSD为2.0%，表明两法测定结果基本一致。参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：299.

[2]李志万，马强．HPLC-ELSD法对猪胆粉中猪去氧胆酸的含量测定研究[J]．中国实验方剂学杂志，2005，11（10）：14.

[3]陈志维，黎玉翠，暴梅佳，等.柱前衍生化高效液相色谱法测定猪胆粉结合胆酸中甘氨酸和牛磺酸的含量[J].药物分析杂志，2010，30（2）：288.

10.5111.0119.0620.3796.9698.0910.5111.0119.3220.0099.2494.55

注：A为猪去氧胆酸；B为鹅去氧胆酸

2.9样品含量测定测定，结果见表2。

取10批不同批号的供试品，按

2.3项下方法制备供试品溶液，照2.1项下色谱条件

3讨论

3.1方法的选择

由于猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸均在

紫外末端（205nm）有弱的吸收，本人参照文献报道（约为本法方法[4]实验发现，用HPLC-UV法灵敏度低

的十分之一），且仪器噪音及溶剂对结果影响较大。因ELSD不要求被测组分有特定的化学结构，它的响

[4]张贇华，刘建忠，彭霞，等.HPLC法比较熊胆粉及猪胆粉、牛胆粉、羊胆粉和鸡胆粉中胆汁酸类成分[J].药物分析杂志，2009，29（3）：487.

（编辑：修春）