技能大赛
选手编号:______工位号: 标本号: 比赛日期:2015年 月 日 午 时 分
……………………………密……封……线……内……不……要……答……题…………………………………
第二届全国卫生职业院校检验技能竞赛
革兰染色法(传统法)竞赛试卷
竞赛时间: 15分钟
一、说明
1.本题满分100分,完成时间15分钟。 2.要求独立完成,不得相互询问或讨论。
3.考核成绩为操作过程评分、操作结果评分和考核时间评分之和。 4.全部操作过程时间和操作后处理时间计入时间限额。 二、实验原理
G+菌:细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上,呈紫色。
G- 菌:肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫-碘复合物溶出细胞壁,沙黄或稀释石碳酸复红复染后呈红色。 三、实验器材
载玻片、特种铅笔、接种环、酒精灯、打火机、生理盐水、吸水纸、冲洗瓶、钟表、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯、染色盘、染色架、消毒液等。(学生准备黑体字部分的器材) 四、实验试剂
革兰染液(杭州天和微生物试剂有限公司):结晶紫染液、碘液、脱色液(95%乙醇)、复染液。(学生准备黑体字部分的器材) 五、实验标本 平皿细菌培养物 六、操作步骤
1.涂片 用灭菌接种环挑取菌落与载玻片上预先滴加的生理盐水涂布成2
1cm或蚕豆大小的半透明菌膜。
2.干燥 涂片制成后,在空气中使其迅速干燥,以免细菌皱缩变形(若需加快干燥速度,将涂布面朝上,置于火焰上方慢慢烘干,切勿紧贴火焰)。
3.固定 玻片干燥后火焰加热法固定,即中速通过火焰3次进行固定,以玻片反面接触手背皮肤,热而不烫为宜。
4.初染 加结晶紫染液染1min,细流水冲洗,并倒去玻片上积水。 5.媒染 加碘液染1min,细流水冲洗。
6.脱色 加脱色液,不时摇动10~30s,至无紫色逸出为止,细流水冲洗。 7.复染 加复染液,染1min,细流水冲洗。
8.镜检 待已染色的细菌标本自然干燥或用吸水纸吸干后,再用显微镜进行观察。
选手编号:_____工位号: 标本号: 比赛日期:2015年 月 日 午 时 分
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七、染色结果
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八、报告
(如:找到革兰阳性球(杆)菌或找到革兰阴性球(杆)菌)
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选手编号:_____工位号: 标本号: 比赛日期:2015年 月 日 午 时 分
…………………………密……封……线……内……不……要……答……题……………………………………
第二届全国卫生职业院校检验技能竞赛
革兰染色(传统法)评分表
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现场裁判签名: 结果评分裁判签名:
复核裁判签名: 现场裁判长签名:
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