Folin_Ciocalteu比色分光光度法测定鲜笋中的单宁

Folin－Ciocalteu比色分光光度法

测定鲜笋中的单宁

1111，21

费建枫，谢佳妮，刘娟娟，方旭波，陈可可，陈

娜

1

(1．浙江海洋学院食品与药学学院，浙江舟山316004;2．浙江省水产品加工技术研究联合重点实验室，浙江舟山316004)

摘

要：实验采用Folin－Ciocalteu比色分光光度法测定新鲜竹笋中单宁的含量。结果显示:新鲜

9%的Na2CO3溶液5mL，竹笋待测液加入Folin－Ciocalteu显色剂2mL，定容混匀后于40℃静置60min，并在770nm处测定其光密度值(OD值)，经计算得到新鲜毛竹冬笋和毛竹春笋单宁质量分0．3305%。以单宁为标样，数分别为0．1314%、单宁量在0．000～0．020mg/mL范围之内服从比

2

耳定律，回归方程y=98．957x+0．029，相关系数R=0．9927，据此线性回归方程定量测定鲜笋中

的单宁，该方法具有方便、操作简单、精密度高、稳定性好及准确可靠等优点。关键词：毛竹冬笋;单宁;Folin－Ciocalteu中图分类号：TS207．3

文献标识码：A

文章编号：1007－7561（2013）04－0084－04

DeterminationoftannininfreshbambooshootsbyFolin－Ciocalteu

colorimetricspectrophotometry

2

FEIJian－feng1，XIEJia－ni1，LIUJuan－juan1，FANGXu－bo1，，CHENKe－ke1，CHENNa1

（1．CollegeofFoodandPharmacy，ZhejiangOceanUniversity，ZhoushanZhejiang316004；

2．JointKeyLaboratoryofAquaticProductsProcessingTechnologyResearchof

ZhejiangProvince，ZhoushanZhejiang316004）

Abstract：TannininfreshbambooshootswasdeterminedbyFolin－Ciocalteucolorimetricspectrophotom-etry．Theresultsshowedthatthemassfractionsofthetanninwere0．1314%infreshwinterbambooshootsand0．3305%infreshspringbambooshootsaccordingtothecolorimetricreactionwith2mLanddeterminingtheODvalueat770Folin－Ciocalteureagentand5mL9%Na2CO3at40℃for60min，

nm．Tanninwasusedasthestandard，linearityforthedeterminationoftanninwasfoundintherangesof0．000to0．020mg/mL，regressionequationofthestandardcurvewasy=98．957x+0．029，thecorrela-tioncoefficientR2=0．9927．Tannininfreshbambooshootsweredeterminedaccordingtotheregressionequationofthestandardcurve，theadvantagesofthemethodwasveryconvenient，simple，precise，stable，accurateandreliable．

Keywords：bambooshoot；tannin；Folin－Ciocalteu竹笋是传统的森林蔬菜之一

［1］

，是一种资源丰减肥、抗衰老等，竹笋产品将是人们所追求的绿色健康食品之一。

单宁，也称单宁酸、鞣酸，是一种存在于鲜笋中的水溶性多酚类物质

［2］

富、产量较高的可食用植物。新鲜竹笋富含纤维素、蛋白质、糖类和矿物质等多种营养物质，因其味道独鲜美，广受人们喜爱。随着现代科技的发展，人特、

们逐渐发现竹笋具有多种医疗保健功能，如降血脂、

收稿日期：2012－11－06

基金项目：2012年浙江省大学生科技创新活动计划（新苗人才计划）

资助项目（2012R411012）

1990年出生，作者简介：费建枫，男，浙江嵊州人，本科生．1972年出生，通讯作者：方旭波，男，浙江舟山人，副教授，博士．

。它对产品质量有一定程

度的影响：⑴单宁易与口腔中的蛋白质结合并生成沉淀，导致舌头上皮组织收缩，产生干燥感以及涩味

［3］

；⑵单宁中大量的酚羟基在多酚氧化酶存在的

［4］

条件下，氧化成具有颜色的邻醌，使产品在货架期内色泽不稳定，颜色加深

；⑶缩合类在碱性或酸性

Folin－Ciocalteu长并且研究不同浓度Na2CO3溶液、

显色剂用量、显色时间及温度对OD值的影响。1．3．4

单宁标准曲线的绘制

取显色后的标准曲

线系列溶液，将试剂空白作参比，测定标准系列溶液将单宁浓度C作为横坐于770nm波长处的OD值，

OD值作为纵坐标，标，绘制单宁标准曲线。1．3．5

不同有机提取液对新鲜毛竹冬笋单宁提取

70%乙醇及70%丙分别用70%甲醇、

效果的比较的提取效果。1．3．6

待测液的测定

在本次实验中，根据绘制的

单宁标准曲线，以单宁为标样，计算新鲜竹笋中单宁的质量分数。取6份2．0mL新鲜竹笋待测液，按照上述实验方法对样品进行显色处理，测定OD值。根据所做回归方程或标准曲线，得到样品待测液的单宁浓度，计算新鲜竹笋单宁的质量分数稀释浓度倍数

［10］

［10］

条件下会发生分子间缩合现象性的红粉沉淀的外观品质

［4］［6］

［5］

，生成大分子不溶

，导致水煮笋汤汁混浊，降低制品

。因此，单宁作为竹笋的次生物质，

其含量是竹笋质量评价的重要质量指标之一。

食品中单宁的测定方法主要有光谱分析测定色谱分析测定法、高锰酸钾滴定法法、法

［8］

［7］

、树脂吸附

、Folin－酚法［9］。因比色法对仪器要求不是很

高并且简便、快速，本实验采用Folin－Ciocalteu（FC）比色分光光度法测定新鲜毛竹冬笋和春笋中为进一步开发产品提供依据。单宁的含量，

比较其不同酮提取新鲜毛竹冬笋和春笋中的单宁，

1

1．1

材料与方法

实验材料与试剂

新鲜舟山毛竹冬笋、毛竹春笋：购于舟山定海东

门菜场。

甲醇、无水乙醇、丙酮、福林酚试剂（FC）：国药集团化学试剂有限公司；无水碳酸钠：上海虹光化工厂；单宁酸（C76H52O46）：天津市津北精细化工有限公司，实验所用试剂均为分析纯。1．2

主要仪器

UV－2800紫外可见分光光度计：上海优浦科学仪器有限公司；电热恒温水浴锅：江苏金坛市城国胜实验仪器厂；粉碎机：四方电器设备厂；AL204电子天平：梅特勒－托利多仪器有限公司；离心机：上海安亭科学仪器厂；抽滤器、旋转蒸发仪：上海爱朗仪器有限公司。1．31．3．1

实验方法

新鲜竹笋待测液的制备

新鲜竹笋去除污

：

浸提液单宁浓度=样品溶液单宁浓度×浸提液

，

新鲜竹笋单宁质量分数（%）=浸提液单宁浓度×浸提液总体积/鲜竹笋样品质量×100。1．3．7

Folin－Ciocalteu比色方法评价

稳定性实

验：吸取2．0mL新鲜竹笋待测液按上述实验方法，分别在显色剂与待测样品液反应完全（60min）后的从而评价此方法在几个不同时间段内测定OD值，

一定时间段内的稳定性；精密度实验：通过Folin－Ciocalteu比色方法对新鲜竹笋同一样品重复测定6次，并通过计算测定值的相对标准偏差，从而评价该实验方法的精密度；重现性实验：吸取2．0mL新鲜竹笋待测液6份，按上述实验方法测定OD值，计算新鲜竹笋单宁的质量分数及测定值的相对标准偏差，从而评价该方法的重现性；单宁加标回收实验：向新鲜竹笋待测液中加入不同量的单宁标准溶液，测定OD值，分别计算其单宁含量和回收率，从而评价该方法的准确性及可靠性

［11］

剥去外壳，称取3～6g（均匀的切取），打碎后，泥，

放入100mL的烧杯中，用无水乙醇，配置成70%的乙醇溶液，倒入烧杯中，浸提3h，进行抽滤，把抽滤所得溶液进行旋转蒸发，除去浸提液中乙醇溶液，把旋转蒸发所得溶液倒入50mL容量瓶中，定容至刻度。从50mL样液中吸取2．5mL于25mL容量瓶中，稀释至刻度，作为待测液。1．3．2

单宁标准液的制备

精确称取单宁对照样

品25mg，用去离子水完全溶解后转于250mL的容量瓶中，定容充分摇匀后，得0．100mg/mL的单宁标准溶液。1．3．3

比色条件的研究

吸取2．0mL的待测液于

25mL比色管中，加入一定量Folin－Ciocalteu显色然后分别用一定浓度的Na2CO3溶液来调节溶剂，

液的pH，定容混匀后，在一定的温度下，静置一定时间显色后，将试剂空白作参比，然后在570～810nm波长范围内测定OD值。确定实验过程中的测定波

。

2

2．1

结果与分析

测定波长及Na2CO3溶液浓度的选择精确吸取2．0mL新鲜毛竹冬笋待测液和

1．0mL单宁标准液于比色管中，加入2mLFolin－5%、7%、9%及饱和Ciocalteu试剂，分别用3%、Na2CO3溶液来调节溶液的pH值［10］，定容至刻度摇匀，在40℃放置60min。将试剂空白作参比，取1cm比色皿在570～810nm波长区间测定OD值，波长间隔为1nm。单宁标准液显色曲线如图1，新鲜毛竹冬笋待测液显色曲线如图2。

质量安全

小

［10］

粮油食品科技第21卷2013年第4期

，因此显色温度选用40℃。单宁标准曲线绘制

2．5

0．5、1．0、1．5、2．0、2．5mL单宁标分别吸取0、

准液于6个25mL比色管中，分别加入2．0mLFolin－Ciocalteu试剂，5mL9%的Na2CO3溶液调节其pH，定容摇匀后，在40℃下静置60min，以试剂空白作为参照，测定在波长为770nm处的OD值，OD值作为纵坐标作图，将单宁浓度C作为横坐标，

如图3。回归方程y=98．957x+0．029，相关系数R2=0．9927，单宁量在0．000～0．020mg/mL范围服从比耳定律

。内，

从图1和图2可看出：单宁标准液和新鲜毛竹冬笋待测液最大吸收值的波长都在770nm附近。上述两种溶液在使用9%的Na2CO3溶液调节pH值定容后

［10］

图3单宁标准溶液曲线

2．6不同有机提取液提取效果的比较

单宁在不同有机溶液中溶解度存在差异性，因

，扫描曲线最大吸收值最接近770nm，并

此实验中采用不同有机溶液提取新鲜毛竹冬笋和春每种溶剂浸提液测定3次，取平均值，比笋的单宁，

较不同的提取效果。对新鲜毛竹冬笋和春笋单宁提取效果的比较如表1。

表1

不同有机提取液对新鲜毛竹冬笋和春笋

单宁提取效果的比较

有机提取液种类70%甲醇70%乙醇70%丙酮

单宁质量分数/%毛竹冬笋0．11370．13140．1415

毛竹春笋0．30820．33050．3499

所以本实验采考虑到实验的条件和实验的经济性，

测定波长为770nm。用9%的Na2CO3溶液调节pH，2．2

Folin－Ciocalteu显色剂用量的选择

按照实验方法，吸取2．0mL的样品待测液，以0．4mL为间隔，分别加入0～4．0mLFolin－Ciocal-teu显色剂，紫外分光光度计测定OD值。实验结果显示：Folin－Ciocalteu显色剂在用量为0．4～3．0mL范围里，对样品待测液显色后的OD值影响所以本实验采取Folin－Ciocalteu显色剂的用较小，量为2．0mL。2．3

显色时间的选择

吸取2．0mL的样品待测液，按照实验方法显20、40、60、80、100min）后测色，静置不同的时间（0、定OD值。实验结果显示：显色时间在40～80min内样品待测液OD值变化不大。因此显色时间选用60min。2．4

显色温度的选择

按照实验方法，吸取2．0mL的样品待测液，在20、30、40、50℃）下显色并测定相不同的温度（10、

应的OD值。实验结果显示：显色温度在30～50℃范围内，对样品待测液显色后的OD值影响较

从表1可得出，三种有机提取液的单宁提取率高低顺序为70%丙酮＞70%乙醇＞70%甲醇。实验结果表明：丙酮对新鲜毛竹冬笋和春笋的单宁提取效果都最好，但考虑到长期在丙酮环境下实验会对人体造成一定的危害，以及从实验结果及经济安全等方面综合考虑，本实验选用70%乙醇作为单宁提取溶剂。2．7方法评价2．7．1

对Folin－Ciocalteu比色法测

定新鲜毛竹冬笋和春笋样品单宁进行稳定性实验，

稳定性实验

粮油食品科技第21卷2013年第4期

质量安全

表4

本样底/μg6．766．446．516．696．636．38

加标量/μg1．51．51．53．03．03．0

新鲜竹笋加标回收实验结果

测得总量/μg8．117．817．889．389．179．17

回收率/%98．1898．3698．3896．8095．2297．76

97．45平均回收率

/%

放置若干样品一段时间后测定OD值，时间范围为40～120min（时间间隔为20min），实验结果表明：在体系反应完全后放置40～80min内测定的OD值

所以该方法具有良好的稳定性。仍比较稳定，2．7．2

精密度实验用Folin－Ciocalteu比色法对

新鲜毛竹冬笋进行6次测定，计算得单宁质量分数

0．1326%、0．1276%、0．1301%、分别为0．1288%、

0．1263%、0．1314%，RSD为1．825%。相同方法

检测新鲜毛竹春笋精密性，得到单宁质量分数分别0．3347%、0．3373%、0．3297%、为0．3398%、

0．3322%和0．3310%，RSD为1．165%。显示该方法具有较高的精密度要求。2．7．3

［11］

3结论

，能满足本实验样品分析的

（1）通过比较不同有机提取液对新鲜竹笋中单

70%丙酮对单宁的提取率最高，宁的提取效果可知，

70%的乙醇更适合作为鲜笋但综合考虑其他因素，

中单宁的提取溶剂。

（2）采用Folin－Ciocalteu比色法测定新鲜竹笋中单宁的质量分数，最佳显色条件为：加入Folin－Ciocalteu试剂2mL，用5mL9%的Na2CO3溶液调

显色温度为40℃，显色时间60min，测定在节pH，

波长为770nm处的吸光度，最终得到新鲜毛竹冬

笋、春笋中单宁质量分数分别为0．1314%、0．3305%。

（3）依据回归方程测定鲜竹笋中单宁的方法具

操作简单、精密度高、稳定性好及准确可靠有方便、等优点。参考文献：

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重现性实验及鲜笋单宁测定用Folin－

Ciocalteu比色法对毛竹冬笋6组样品进行单宁质量分数的测定，进行编号，测定结果如表2。用上述相同的实验方法对毛竹春笋测定，测定结果如表3。

表2

样品编号

123456

新鲜毛竹冬笋单宁质量分数的测定结果

测定结果

/%0．13520．12880．13010．13390．13260．1276

0．1314平均值/%

相对误差/%2．804－1．961－0．9711．8870．952－2．970

2．275RSD/%

吸光度0．1360．1310．1320．1350．1340．130

表3

样品编号

123456

新鲜毛竹春笋单宁质量分数的测定结果

测定结果/%0．32590．32970．33220．33470．32720．3335

0．3305平均值/%

相对误差/%－1．421－0．2550．5071．258－1．0300．884

1．072RSD/%

吸光度0．2870．290．2920．2940．2880．293

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［7］雷昌贵，孟宇竹，刘蒙佳，等．食品中多酚类化合物测定方法研究

由表2、表3可知，新鲜毛竹冬笋、春笋在实验

条件下测得单宁质量分数平均值分别为0．1314%、0．3305%，单宁质量分数的相对标准偏差RSD分别为2．275%、1．072%，说明实验结果具有良好的重复性。2．7．4

取一定量的新鲜毛竹冬笋待测液进行吸光值的测定，计算其中的总单宁含量作

［12］

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［12］刘清，李玉，姚惠源．Folin－Ciocalteu比色法测定大麦提取液中

加标回收实验

，分别测定其回收率，实验结果如表4。

由表4可知：加标回收率在95．22%～98．38%之间，加标平均回收率为97．45%，此方法准确可为本底量

靠，可应用于新鲜竹笋单宁质量分数的测定。

．食品科技，2007，（4）：175－177．●总多酚的含量［J］