鸡卵黄免疫球蛋白的分离制备研究

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鸡卵黄免疫球蛋白的分离制备研究

宋宏新梁　艳

（陕西科技大学生命科学与工程学院

实验研究了从高免鸡卵黄中分离纯化免疫球蛋白（ＩｇＹ）的方法１８

盐析

总活性回收率达到６４．１６％

卵黄免疫球蛋白

超滤法

４

添加３％硅藻土进行微滤

结果表明

卵黄十倍稀释

再用４５％饱和硫酸铵（ｐＨ５．３）

ＬＩＵ　ＸｕａｎＬＩＡＮＧ　Ｙａｎ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，

Ｘｉａｎｙａｎｇ　　　　　　７１２０８１，　Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ　

２００４－０４－２６

基金项目

宋宏新（１９５９－）

教授

１９９９，　５０：　３０８－３１０．［９］宁正祥，　高建华．　食品防腐剂的抗菌机理及构效关系［Ｊ］．

广州食品工业科技，　１９９７，　１３（３）：　１－４．

［１０］Ｂｒａｄｆｏｒｄ　Ｍ　Ｍ．　Ａ　ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉ－

ｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｕｎｉｌｉｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｙｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ［Ｊ］．　Ａｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，　１９７６，　７２（１）：　２４８－２５２．

［１１］Ｍｏｔｏｈｉｒｏ　Ｔ．　Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ　ａｎｄ　ｅｍｕｓｉｆｉｅｒｓ　ａｓ　ｆｏｏｄ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ

［Ｍ］．　Ｋｏｋａｉ　Ｔｏｋｋｙ　Ｋｏｈｏ，　１９８７．　２５，　６２，　９２６．［１２］Ａｋａｚａｗａ　Ｈ，　Ｙａｊｉｍａ　Ｍ．　Ｆｏｏｄ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ

ｐｒｏｔａｍｉｎｅ　ｍｉｘｔｕｒｅ［Ｍ］．　Ｊｐ　Ｋｏｋａｉ　Ｔｏｋｋｙｏ　Ｋｏｈｏ，　１９８８．　１７，６３，　９７６．

［１３］Ａｋａｚａｗａ　Ｈ，　Ｙａｊｉｍａ　Ｍ．　Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ

ａｓ　ｆｏｏｄ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ［Ｊ］．　Ｊｐｎ　Ｋｏｋａｉ　Ｔｏｋｋｙｏ　ｋｏｈｏ，　１９８８．　６２，２０１，　５６３．［１４］何华．　国外新开发的几种天然食品防腐剂［Ｊ］．　四川食品工

业科技，　１９９５，　（３）：　２１－２２．［１５］Ａｓｐｅｄｏｎ　Ａ，　Ｇｒｏｉｓｍａｎ　Ｅ　Ａ．　Ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ

ｐｒｏｔａｍｉｎｅ：　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｍｅｍ－ｂｒａｎｅ　ｅｎｃｒｇｉｚａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｉｍｕｒｉｕｍ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　１９９６，　１４２：　３３８９－３３９７．

．　Ｍｉｌｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．　Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｐｏｒｔ　ｏｆ　ｔｈｅ

Ｔｏｋｙｏ　Ｍｅｔｒｏｐｏｌｉｔａｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ，

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１８．　Ｔｈｅ　ｔｈａｗｅｄ　ｙｏｌｋ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｗｉｔｈ　３％　ｄｉａｔｏｍａｃｅｏｕｓ　ｅａｒｔｈ，　ａｎｄ　ｆｉｌｔｅｒｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　０．

４５

ＩｇＹｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ

ＴＱ９３　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　文献标识码

随着免疫学和生物化学检测技术的迅速发展鸡卵

黄可富集从鸡血清中转移而来的大量特异多克隆抗体ＩｇＹ

因此

寻找一种简便

经济的方法

１材料与方法１．１

试剂与材料

混合纤维素酯微孔滤膜　　　　孔径０．４５上海兴

亚净化材料厂

Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司ＳＤＳ－ＰＡＧＥ成套电

泳试剂１．２

新鲜免疫鸡蛋

１２０日龄新开产母鸡

用法氏囊

病毒（ＩＢＤＶ）作抗原

收

集效价达１：６４以上的鸡蛋为原料

调节ｐＨ

解冻　　　　　　　　　　　　　微滤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　超滤

卵黄原液

添加适量硅藻土

盐析　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＰＢＳ溶解

脱盐

ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆ．Ｆ．离子交换层析

（１）在水稀释和微滤这两步实验中

６．０）０．１ｍｏｌ／Ｌ）稀释倍数（１：４

１：

１１）５％）及冻融效果

图１　　　鸡卵黄抗体分离纯化流程图

Fig.1 Flowsheet of IgY isolation and purification

１．４ＩｇＹ分离纯化工艺中的检测

ＩｇＹ存在于卵黄水溶性组分（Ｗａｔｅｒ－Ｓｏｌｕｔｉｏｎ　Ｆｒａｃｔｉｏｎ，ＷＳＦ）中说明ＩｇＹ提取保留率越高说明杂质去除越彻底

以这两个指标作为制定工艺优劣的主要依据

１００２－６６３０（２００５）０４－００５１－０４

甲醇提取法［３］

双扩及酶

联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）进行检测

３％浓

缩胶１．４．４微滤速度的测定

微滤速度　　　单位时间通过微滤膜的液体体积（ｍｌ／

ｍｉｎ）２结果与分析

２．１

卵黄水溶性组分（ＷＳＦ）的制备与分离［５，６］

鸡卵黄乳状液是由卵黄蛋白水溶液（连续相）和分散于其中的脂蛋白小颗粒（分散相）组成的

ＩｇＹ存在于卵黄蛋白水溶液中分离纯化的关键便是如何有效除去卵黄中高含量的脂类以制备卵黄水溶性组分（ＷＳＦ）

２．１．１

稀释倍数的影响分别取２０ｍｌ卵黄液

搅拌均匀

１８

解冻

可以看出

蛋白质含量逐

）

ｌｍ／ｇｍ（量脂肪含蛋白质含量（ｍｇ／ｍｌ）

稀释倍数

图２　　　稀释倍数对ＷＳＦ中蛋白质含量和脂肪含量的影响

Fig.2 Effect of dilution times on the contents of proteins

and lipids in WSF

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ÔÚÏ¡Êͱ¶Êý´ï1:9ºó΢ÂËЧ¹ûÒ²±íÃ÷

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HClµ÷½Ú²»Í¬pH

18

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5.5)

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4

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2.1.4

¶³ÈÚ¶Ô΢ÂËËٶȵÄÓ°Ïì·Ö±ðÈ¡20mlÂÑ»ÆÒºµ÷

½ÚpHΪ5.3

18

½â¶³)µÄÂÑ»ÆÏ¡ÊÍÒº½øÐÐÁ˱ȽÏ

表１　不同处理方法对微滤速度的影响

Table 1 Effect of different processing methods on Microfiltration

rate

´¦Àí·½·¨Æ½¾ù΢ÂËËÙ¶È(ml/min)

²»¾-À䶳0.31½øÐÐÀ䶳Ԥ´¦Àí

5.90

从表中数据可以看出

微滤速度提高了约１９倍对稀

释卵黄液进行冻融预处理可以大大改善分离效果

直接过滤的后

果是在过滤初期膜就会被各种粘稠的脂肪和脂蛋白所堵

塞

实验条件同２．１．４的冻融预处理实验

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搅拌均匀后用０．４５结果如图８所示

水以１：９进行稀释冻６ｈ

自然解冻

最终总活性回收

率达到６４．１６％

用膜微滤技术取代了传统

的高速冷冻离心方式

过滤速度（采用微滤

速度单位为ｍｌ／ｃｍ２现工业化生产剂

活性回收率

更有望能实没有使用有机溶这样可以提高ＩｇＹ的

成本较低

所以下冷

随着硅藻土用量的加大

在加量达３％后

尽可能的减少蛋白质被硅藻土吸附的损失２．２２．２．１

ＩｇＹ的浓缩分离与纯化

考虑

超滤浓缩［７］与盐析分离［４］ＩｇＹ收集微滤透过液采用室温下进料超滤膜分子截留量为５万１０５Ｐａ）

１０５Ｐａ）

再经高速冷冻离心（１００００

沉淀

选择ｐＨ７．０的Ｔｒｉｓ－

ＨＣｌ缓冲液（ＴＨＢ）进行梯度洗脱

经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆ．Ｆ．柱层析分离纯化后

结果表明

４

３０ｍｉｎ）后得到ＩｇＹ

３３．１

结　　论

通过实验确定的用水稀释法和微孔过滤法制备和分

卵黄液用蒸馏

离卵黄水溶性组分（ＷＳＦ）的最佳条件为

日本新推出低聚糖型比非斯特健美功能饮料

比非斯特健美饮料是日本新推出的低聚糖型功能饮料另外添加了食用纤维

由于双歧杆菌增殖能合成更多的Ｂ族维生素

所

以常饮用该饮料可助皮肤白嫩滋润