葡萄糖氧化酶法筛选西洋参干预胰岛素抵抗脂肪细胞模型的活性成分_葛鹏玲
上传者:曹志勇|上传时间:2015-04-22|密次下载
葡萄糖氧化酶法筛选西洋参干预胰岛素抵抗脂肪细胞模型的活性成分_葛鹏玲
·110·中医药信息InformationonTraditionalChineseMedicine2010年第27卷第3期Vol.27,No.3,2010葡萄糖氧化酶法筛选西洋参干预胰岛素抵抗
脂肪细胞模型的活性成分
葛鹏玲,李冀,马育轩,尚广巍
(黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040)
摘要:目的:通过葡萄糖消耗试验测定西洋参单体成分对IR脂肪细胞模型葡萄糖消耗量的影响,筛选西洋参干预胰岛素抵抗的活性成分。方法:将西洋参的根部用70%EtOH回流,将提取物进行AB-8型大孔树脂柱色谱分析,按不同浓度洗脱,得到西洋参95%醇提组、西洋参60%醇提组、西洋参30%醇提
西洋参60%醇提组为活性部位。将西洋参组和水提组四个部分。本课题组的前期药效学试验已证明,
60%醇提部位用硅胶柱色谱及HPLC等现代分离技术与方法分离和纯化,通过理化常数及光谱数据确定其结构,共得12个化合物。将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,给予高糖高胰岛素
-1-6-1(25mmol·L葡萄糖,1×10mol·L胰岛素)刺激,建立胰岛素脂肪细胞模型,随机分为空白组、模型
罗格列酮组、西洋参单体成分组。药物干预培养24h后,通过葡萄糖消耗试验测定西洋参单体成分组、
对IR脂肪细胞模型葡萄糖消耗量的影响,筛选西洋参干预胰岛素抵抗的有效成分。结果:与模型组细
20(R)人参皂苷Rb1组、20(R)人参皂苷Rb2组、罗格列酮组、人参皂苷R3组、拟胞葡萄糖消耗量比较,
20(R)人参皂苷Rb1组、20人参皂苷F11组细胞葡萄糖消耗量有不同程度的升高,其中人参皂苷R3组、
(R)人参皂苷Rb2组、罗格列酮组葡萄糖消耗量明显升高,差异极显著(P<0.01),拟人参皂苷F11组差
(P<0.05)。其余化合物组与模型组比较,异显著,葡萄糖消耗量无统计学差异。结论:20(R)人参皂
20(R)人参皂苷Rb2,苷Rb1,人参皂苷R3,拟人参皂苷F11可能是西洋参干预IR脂肪细胞模型的活性
成分。
关键词:西洋参;胰岛素抵抗;脂肪细胞模型;活性成分
中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1002-2406(2010)03-0110-03
ScreentheActiveConstituentsthatAmericanGinsengImpacttheModelof
AdipocyteInsulinResistancebyGlucoseOxidaseMethod
GEPeng-ling,LIJi,MAYu-xuan,SHANGGuang-wei
(HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China)
Abstract:Objective:ToscreenthetheactiveconstituentsthatAmericanGinsengimpactthemodelofadipo-cyteinsulinresistancebyGlucoseconsumingexperimentshowedthecompoundconstituentssignificantlyeffecttheglucosemechanisminadipocytecells.Methods:TherootsofAmericanGinsengisextractwith70%EtOHtogetextractive.ThenextractiveiselutedaccordingtodifferentconcentrationsbyAB-8typemacroporousresincolumnchromatographytogetGinseng95%alcoholicextractiongroup,Ginseng60%alcoholicextrac-tiongroup,Ginseng30%alcoholicextractiongroupandaqueousextractgroup.ItisprovedthatGinseng60%alcoholicextractiongroupandiseffectivecomponentbypharmacodynamicstudy.Thenthe60%alcoholicex-tractiongroupisolatedbysilicagelcolumnchromatographyandHPLCpreparationchromatography.Theirstruc-turesweredeterminedbyphysicalandchemicalproperties,aswellasspectrographicalidentification.Thereare基金项目:国家自然科学基金项目(30672632);黑龙江省杰出青年科学
基金项目(JC04-01)
作者简介:葛鹏玲(1974-),女,副教授,博士,主要从事中药药效物质
基础及作用机理研究。
通讯作者:李冀(1960-),男,教授,博士研究生导师,国家重点学科方
剂学学科带头人,主要从事方剂配伍规律、作用机理及药效
物质基础研究。
收稿日期:2010-01-28
修回日期:2010-02-28
2010年第27卷第3期Vol.27,No.3,2010
http://wendang.chazidian.comter,effectthepreadipocytecellsbyhighglucoseandhighinsulininordertomodellingadi-pocyteinsulinresistance.Thendividedrandomlyintocontrolgroup,modelgroup,rogridonegroup,http://wendang.chazidian.comparedwithmodelgroup,othergroupratsGLUT-4mRNAexpressionisescalated.Therewasanextremedifferencebetweenroglitazonegroup,ginsenosideR3group、20(R)ginsenosideRb1group、20(R)ginsenosideRb2groupandmodelgroup(P<0.01).TherewasasignificantdifferencebetweenpseudoginsenosideF11groupandmodelgroup(P<0.05).Conclusion:Ginsen-osideR3、20(R)ginsenosideRb1group、20(R)ginsenosideRb2、pseudoginsenosideF11maybetheactivecon-stituents.
Keywords:ginsen;insulinresistance;ModelofAdipocyte;activeconstituents胰岛素抵抗(IR)是由遗传和环境因素导致的机体对胰岛素生理作用的反应性降低。即胰岛素促进葡
导致代偿性胰岛素分泌增多,其重萄糖摄取作用受损,
[1]
要标志为高胰岛素血症。主要表现为外周组织对
[2]
胰岛素敏感性下降,对葡萄糖的利用障碍。
传代、冻存、复苏及诱导分化过程。将3T3-L1前脂
2
肪细胞种入25cm细胞培养瓶,加入含10%优级小牛
-1
链霉素的高糖(25mmol·Lglucose)DM-血清及青、
DM培养液4~5mL,5%CO2条置37℃细胞孵育箱中,件下培养,每2d换1次培养液。每天观察细胞生长情况,细胞生长至80%满后进行传代或冻存。
分化:3T3-L1前脂肪细胞生长至接触抑制,待细
-1
胞汇合2天后加0.05mmol·L3-异丁基-1-甲基
1mmol·L-1地塞米松,10mg·L-1胰黄嘌呤(IBMX),
岛素和10%小牛血清的高糖培养基培养48h,10mg·L-1胰岛素和10%小牛血清的高糖培养基培养48h,10%小牛血清的高糖培养基培养,2d换1次培养
8~12d细胞90%以上呈成熟脂肪细胞表形。液,
1.5葡萄糖氧化酶法测培养基中葡萄糖浓度
1瓶葡萄糖工作试剂加100mLddH2O,振荡混匀;96孔板中每孔取8μL培养液,加入含1mL工作试剂的试管中,振荡混匀,另取标准液8μL,加入含1mL工作试剂的试管中;37℃水浴20min;每试管取100μL混
加入96孔酶标板中;酶标仪在510nm处测吸光合液,
光度值(OD值);根据公式计算待测液葡萄糖浓度。
-1
待测葡萄糖浓度(mmol·L)=待测液OD值/标准
-1
液OD值×5.5mmol·L。1.6统计学处理
±s)数据用SPSS软件处理,正态分布的资料以(x珋
表示,非正态分布的资料均取自然对数正态化后进行
P<0.01表示为有统计学统计分析,以P<0.05,
水平。
2实验结果
2.1成熟脂肪细胞诱导
光镜下3T3-L1前脂肪细胞形态与成纤维细胞相似,呈长梭型,细胞内没有脂肪积聚,诱导分化后,细
胞浆出现脂滴,随着分化程度的加深,脂胞形态变圆,
90%以上呈成熟脂肪细滴积聚增多。诱导分化8d后,
胞浆内有大量的脂滴,如图1所示。胞表形,
中医药信息
InformationonTraditionalChineseMedicine
·111·
本实验通过葡萄糖消耗试验测定西洋参单体成分
筛选西洋参对IR脂肪细胞模型葡萄糖消耗量的影响,
干预胰岛素抵抗的有效成分。从而为进一步探讨其作用机制及开发新药奠定基础。1材料及方法1.1细胞株
小鼠3T3-L1前脂肪细胞株来源于AmericanTypeCultureCollection(ATCC),由中国医学科学院协和医科大学细胞中心提供。1.2仪器与试剂
胰岛素(诺和诺德公司);地塞米松(Sigma公司);异丁基—甲基—黄嘌呤(Sigma公司);牛血清白蛋白(BSA,澳大利亚ST1006);DMEM培养液(Gibco公司);葡萄糖氧化酶法测定试剂盒(上海伊华生物科技有限公司);荧光显微镜(OLYMPUSIX71);CO2培养箱(FormaScientific);超净工作台(上海造鑫企业有限公司);酶标仪(TECAN公司)。1.3西洋参单体成分的分离
将西洋参的根部用70%EtOH回流提取,将此提
按不同浓度取物进行AB-8型大孔树脂柱色谱分析,
洗脱,得到西洋参95%醇提组、西洋参60%醇提组、西洋参30%醇提组和水提组四个部分。前期药效学试验证明,西洋参60%醇提组为活性部位。再将西洋参60%醇提部位用硅胶柱色谱及HPLC等分离技术与方法分离和纯化,通过理化常数及光谱数据确定其结构。共得12个化合物。
1.43T3-L1前脂肪细胞培养及诱导分化
培养:3T3-L1前脂肪细胞可经定向诱导分化为成熟的脂肪细胞。3T3-L1脂肪细胞培养包括培养、
内容需要下载文档才能查看
·112·
中医药信息
InformationonTraditionalChineseMedicine2010年第27卷第3期Vol.27,No.3,2010
图1脂肪细胞
2.2
胰岛素抵抗脂肪细胞模型的建立及鉴定
以含1%将24孔培养板中分化成熟的脂肪细胞,
BSA的低糖DMEM培养基培养12h后,分为正常葡萄
-1
糖正常胰岛素组(5.5mmol·L葡萄糖,
-9-1
1×10mol·L胰岛素)及高葡萄糖高胰岛素组(25mmol·L-1葡萄糖,1×10-6mol·L-1胰岛素),每
通过葡萄糖消耗试验测定组7个样本。干预24h后,
两组脂肪细胞葡萄糖消耗量的情况。
表1
组别正常组
高糖高胰岛素组
±s,n=7)高糖高胰岛素对葡萄糖消耗量的影响(x珋
RG(mmol·L-1)
2.70±0.154.21±0.22★
CG(mmol·L-1)2.80±0.151.29±0.22★
★
P<0.01;RG-葡萄糖剩余量,CG-葡萄糖消注:与正常组比较,
耗量。
如表1所示,与正常葡萄糖正常胰岛素组葡萄糖消耗量比较,高葡萄糖高胰岛素组葡萄糖消耗量明显下降,差异极显著(P<0.01),说明应用此法可建立胰岛素抵抗细胞模型。
2.3西洋参单体成分对胰岛素抵抗脂肪细胞模型葡萄糖消耗量的影响
实验分为空白对照组、模型组、西洋参单体成分组(12)及罗格列酮组。干预培养24h后,通过葡萄糖消耗试验测定西洋参单体成分对IR脂肪细胞模型葡萄糖消耗量的影响,筛选西洋参干预胰岛素抵抗的活性成分。
表2
组别空白组模型组
罗格列酮组人参皂苷R3组
20(R)人参皂苷Rb1组20(R)人参皂苷Rb2组拟人氏皂苷F11组
±s,n=7)药物对IR细胞模型葡萄糖消耗量的影响(x珋
RG(mmol·L-1)
2.72±0.174.10±0.223.24±0.25
★
CG(mmol·L-1)2.78±0.171.40±0.222.26±0.25★2.25±0.10★1.94±0.12★1.89±0.15★1.73±0.11
☆
3.25±0.10★3.56±0.12★3.61±0.15★1.36±0.11
☆
胞葡萄糖消耗量有不同程度的升高,其中人参皂苷R3
20(R)人参皂苷Rb1组、20(R)人参皂苷Rb2组、组、
罗格列酮组葡萄糖消耗量明显升高,差异极显著(P<0.01),拟人参皂苷F11组差异显著(P<0.05)。其余化合物组与模型组比较,葡萄糖消耗量无统计学差异。
20(R)人参皂苷Rb1,20(R)人参皂苷Rb2,提示,人参皂苷R3,拟人参皂苷F11可能为西洋参干预胰岛素抵抗脂肪细胞模型的活性成分。3讨论
细胞模型相对于动物模型具有重复性好、造模周期短、外界影响因素易于控制的优点。建立胰岛素抵抗的细胞模型,不仅广泛应用细胞水平研究胰岛素抵抗的发病机制,尤其适用于改善胰岛素抵抗药物的筛选及其机制研究。
1988年,Reaven[3]提出的胰岛素抵抗定义为胰岛素靶细胞对胰岛素介导的葡萄糖摄取及利用的抵抗,它反映的是胰岛素的糖代谢效应。在细胞实验中,对胰岛素敏感性的评价主要采用胰岛素刺激下对同位素标记的脱氧葡萄糖的摄取。但此法成本高、毒害作用大。葡萄糖氧化酶法测定脂肪细胞培养基中的葡萄糖消耗量,相对污染小、经济方便、优越性明显,可作为评价胰岛素敏感性的良好手段。
本实验通过葡萄糖消耗试验测定西洋参单体成分对IR脂肪细胞模型葡萄糖消耗量的影响,与模型组细
20胞葡萄糖消耗量比较,罗格列酮组、人参皂苷R3组、
(R)人参皂苷Rb1组、20(R)人参皂苷Rb2组、拟人参
20皂苷F11组细胞葡萄糖消耗量有不同程度的升高,
(R)人参皂苷Rb1,20(R)人参皂苷Rb2,人参皂苷R3,拟人参皂苷F11可能是西洋参干预胰岛素抵抗脂肪细胞模型的活性成分。参考文献:
[1]李冀,马育轩,高彦宇,等.中医药对2型糖尿病胰岛素抵抗的研
J].中医药信息,2009,26(3):5-7.究进展[
[2]李冀,马育轩,葛鹏玲,等.西洋参治疗胰岛素抵抗大鼠活性部位
J].中医药学报,2009,对骨骼肌转运蛋白-4mRNA表达的影响[
37(5):9-11.[3]ReavenGM.Roleofinsulinresistanceinhumandiseases[J].Diabetes,
1988,37(12):1595-1607.
☆★
P<0.05,P<0.01。注:与模型组比较,
实验结果如表2所示,与模型组细胞葡萄糖消耗
20(R)人参皂苷罗格列酮组、人参皂苷R3组、量比较,
Rb1组、20(R)人参皂苷Rb2组、拟人参皂苷F11组细
下载文档
热门试卷
- 2016年四川省内江市中考化学试卷
- 广西钦州市高新区2017届高三11月月考政治试卷
- 浙江省湖州市2016-2017学年高一上学期期中考试政治试卷
- 浙江省湖州市2016-2017学年高二上学期期中考试政治试卷
- 辽宁省铁岭市协作体2017届高三上学期第三次联考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2016-2017学年高二11月月考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2017届高三11月月考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2016-2017学年高一11月月考政治试卷
- 广西钦州市高新区2016-2017学年高二11月月考政治试卷
- 广西钦州市高新区2016-2017学年高一11月月考政治试卷
- 山东省滨州市三校2017届第一学期阶段测试初三英语试题
- 四川省成都七中2017届高三一诊模拟考试文科综合试卷
- 2017届普通高等学校招生全国统一考试模拟试题(附答案)
- 重庆市永川中学高2017级上期12月月考语文试题
- 江西宜春三中2017届高三第一学期第二次月考文科综合试题
- 内蒙古赤峰二中2017届高三上学期第三次月考英语试题
- 2017年六年级(上)数学期末考试卷
- 2017人教版小学英语三年级上期末笔试题
- 江苏省常州西藏民族中学2016-2017学年九年级思想品德第一学期第二次阶段测试试卷
- 重庆市九龙坡区七校2016-2017学年上期八年级素质测查(二)语文学科试题卷
- 江苏省无锡市钱桥中学2016年12月八年级语文阶段性测试卷
- 江苏省无锡市钱桥中学2016-2017学年七年级英语12月阶段检测试卷
- 山东省邹城市第八中学2016-2017学年八年级12月物理第4章试题(无答案)
- 【人教版】河北省2015-2016学年度九年级上期末语文试题卷(附答案)
- 四川省简阳市阳安中学2016年12月高二月考英语试卷
- 四川省成都龙泉中学高三上学期2016年12月月考试题文科综合能力测试
- 安徽省滁州中学2016—2017学年度第一学期12月月考高三英语试卷
- 山东省武城县第二中学2016.12高一年级上学期第二次月考历史试题(必修一第四、五单元)
- 福建省四地六校联考2016-2017学年上学期第三次月考高三化学试卷
- 甘肃省武威第二十三中学2016—2017学年度八年级第一学期12月月考生物试卷
网友关注
- 美学专业毕业自我鉴定范文
- 学校外出培训学习汇报材料
- 宪法学习的个人心得体会
- 柏子仁 检验报告模板
- 毕业戒指
- 热敏电阻通常为一款高阻抗、电阻性器件
- 四举措推进招商引资工作
- Y26职业及收入证明
- 劳动经济学专业毕业自我鉴定范文
- 2014-7-1演讲稿
- 外出听课学习心得体会
- 总结
- 社会实践报告附录
- 计算机培训总结心得
- 财政学专业毕业自我鉴定范文
- 年终总结
- 贴片电阻器在电路板中作用与用作分流器
- 大讨论活动阶段性小结
- 工程造价实习周记一篇
- 计算机应用技术专业顶岗实习计划
- 马克思主义哲学专业毕业自我鉴定范文
- 心理学课程学习心得体会
- 华为集团总裁任正非致新员工的一封信
- CCNA 实验
- 12年交大病生
- 实践报告
- 竞赛规则
- 潍水学校中考招生风险评估报告及应急预案
- 产业经济学专业毕业自我鉴定范文
- 青岛理工——机械电子作业
网友关注视频
- 七年级英语下册 上海牛津版 Unit5
- 人教版二年级下册数学
- 第五单元 民族艺术的瑰宝_16. 形形色色的民族乐器_第一课时(岭南版六年级上册)_T1406126
- 北师大版数学四年级下册第三单元第四节街心广场
- 第19课 我喜欢的鸟_第一课时(二等奖)(人美杨永善版二年级下册)_T644386
- 30.3 由不共线三点的坐标确定二次函数_第一课时(市一等奖)(冀教版九年级下册)_T144342
- 【部编】人教版语文七年级下册《泊秦淮》优质课教学视频+PPT课件+教案,广东省
- 8 随形想象_第一课时(二等奖)(沪教版二年级上册)_T3786594
- 沪教版八年级下册数学练习册一次函数复习题B组(P11)
- 外研版英语三起5年级下册(14版)Module3 Unit1
- 沪教版牛津小学英语(深圳用)五年级下册 Unit 1
- 外研版英语七年级下册module3 unit1第二课时
- 冀教版小学数学二年级下册第二周第2课时《我们的测量》宝丰街小学庞志荣
- 第4章 幂函数、指数函数和对数函数(下)_六 指数方程和对数方程_4.7 简单的指数方程_第一课时(沪教版高一下册)_T1566237
- 北师大版小学数学四年级下册第15课小数乘小数一
- 【部编】人教版语文七年级下册《泊秦淮》优质课教学视频+PPT课件+教案,天津市
- 8.练习八_第一课时(特等奖)(苏教版三年级上册)_T142692
- 沪教版八年级下册数学练习册21.3(2)分式方程P15
- 【部编】人教版语文七年级下册《老山界》优质课教学视频+PPT课件+教案,安徽省
- 【部编】人教版语文七年级下册《逢入京使》优质课教学视频+PPT课件+教案,辽宁省
- 人教版历史八年级下册第一课《中华人民共和国成立》
- 沪教版牛津小学英语(深圳用) 四年级下册 Unit 7
- 二年级下册数学第一课
- 外研版英语七年级下册module1unit3名词性物主代词讲解
- 第12章 圆锥曲线_12.7 抛物线的标准方程_第一课时(特等奖)(沪教版高二下册)_T274713
- 化学九年级下册全册同步 人教版 第18集 常见的酸和碱(二)
- 苏科版数学七年级下册7.2《探索平行线的性质》
- 外研版英语七年级下册module3 unit2第一课时
- 化学九年级下册全册同步 人教版 第25集 生活中常见的盐(二)
- 冀教版小学数学二年级下册第二单元《有余数除法的竖式计算》
精品推荐
- 2016-2017学年高一语文人教版必修一+模块学业水平检测试题(含答案)
- 广西钦州市高新区2017届高三11月月考政治试卷
- 浙江省湖州市2016-2017学年高一上学期期中考试政治试卷
- 浙江省湖州市2016-2017学年高二上学期期中考试政治试卷
- 辽宁省铁岭市协作体2017届高三上学期第三次联考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2016-2017学年高二11月月考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2017届高三11月月考政治试卷
- 广西钦州市钦州港区2016-2017学年高一11月月考政治试卷
- 广西钦州市高新区2016-2017学年高二11月月考政治试卷
- 广西钦州市高新区2016-2017学年高一11月月考政治试卷
分类导航
- 互联网
- 电脑基础知识
- 计算机软件及应用
- 计算机硬件及网络
- 计算机应用/办公自动化
- .NET
- 数据结构与算法
- Java
- SEO
- C/C++资料
- linux/Unix相关
- 手机开发
- UML理论/建模
- 并行计算/云计算
- 嵌入式开发
- windows相关
- 软件工程
- 管理信息系统
- 开发文档
- 图形图像
- 网络与通信
- 网络信息安全
- 电子支付
- Labview
- matlab
- 网络资源
- Python
- Delphi/Perl
- 评测
- Flash/Flex
- CSS/Script
- 计算机原理
- PHP资料
- 数据挖掘与模式识别
- Web服务
- 数据库
- Visual Basic
- 电子商务
- 服务器
- 搜索引擎优化
- 存储
- 架构
- 行业软件
- 人工智能
- 计算机辅助设计
- 多媒体
- 软件测试
- 计算机硬件与维护
- 网站策划/UE
- 网页设计/UI
- 网吧管理