HPLC法测定猪肉中磺胺类药物残留_高小龙

DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2013.06.017

ＪＴＣＶＭ

2013年第56期

ＨＰＬＣ法测定猪肉中磺胺类药物残留

高小龙1，赵海福2

（1.甘肃工业职业技术学院化工学院，甘肃天水

甘肃兰州

摘

741025；2.甘肃农业大学动物医学院，730070）

要：采用HPLC测定猪肉中磺胺类药物的残留，以CloversilC18色谱柱、甲醇-1%乙

酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱，柱温30℃，进样量5μL，流速0.6mL/min，240-280nm波长紫外检测。测定结果表明，猪肉中含有磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺噻唑、磺胺二甲准确。嘧啶和磺胺喹噁啉等磺胺类药物。利用HPLC法检测猪肉中磺胺类药物残留快速、

关键词：HPLC；猪肉；磺胺类药物中图分类号：S859.84

文献标志码：A

文章编号：1000-6354（2013）06-0058-04

命健康构成严重威胁，也为国家公共卫生领域敲磺胺类药物是一种合成的抗菌药物，抗响了警钟。

菌谱广，对大多数革兰氏阳性和革兰氏阴性，如脑膜炎双球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、葡萄球菌、淋球菌及某些杆菌如痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆

收稿日期：2013-08-05

基金项目：甘肃省天水市2013年政府财政重点支撑资助项目作者简介：高小龙（1980-），男，讲师，主要从事药物分析化学与

食品理化检验。

食品安全是当今世界人们所关注的焦点问题之一，每年食源性疾病（因食用不安全的食品）导致数亿人患病，并造成人员死亡。近年来，我国相继发生食品安全事件，不仅对广大人民群众的生

实验技术

菌、鼠疫杆菌都有抑制作用，对某些真菌（如放线菌）和疟原虫也有抑制作用，临床上用于治疗流行上呼吸道感染（如咽喉炎、扁桃体性脑脊髓膜炎、

中耳炎、肺炎等）、泌尿道感染（如急性或慢性尿炎、

生出版社，1992.

[8]李勇，张学礼，许斌．披针叶黄华碱体外细胞毒

性的研究[J]．黑龙江畜牧兽医，2012（12）:118-119．

．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．[6]刘

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[7]陈新谦，金有豫.新编药物学[M].北京:人民卫

LD50determinationofThermopsislanceolatealkaloidinmice

LIYong1，LISheng-hu1，ZHANGYong-kang1，HESheng-hu2

（1.DepartmentofLifeScience，NingxiaPolytechnic，YinchuanNingxia750021；2.NingxiaUniversity，

YinchuanNingxia750021，China）

Abstract：Objective:TostudythetoxicityofThermopsislanceolatealkaloidanddetermineitshalflethaldose（LD50）.Methods:Alkaloidswereextractedwithchloroformandn-butanolrespectivelyfromThermopsislanceolatetreatedby95%ethanolwithcombinationofultrasound.Thenthetoxicitiesofalkaloidsweredeterminedwithmiceastestanimals.Results:LD50ofchloroformextractioncomponentwas127.04mg/kgwiththe95%confidencelimitof115.41-139.72mg/kg.Conclusion:Theresultswerevariedwithdatareported，whichmayberelatedtotestmethod，theconcentrationofextractedsolutionofactualandotherfactors.

Keywords:alkaloidofThermopsislanceolate；mice；LD50

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道感染、轻症肾盂肾炎）、肠道感染（如细菌性痢疾、肠炎等）、鼠疫、局部软组织或创面感染、眼部感染沙眼等）、疟疾等，可广泛分布于所有组（如结膜炎、

织，在胸腔、腹腔、滑膜及眼球内液中可达高浓度，脑膜炎时脑脊液能达到高浓度，但这些药已不再用于治疗脑膜炎，脓液可抑制其抗菌活性。

磺胺药是具有对氨基苯磺酰胺结构的化学治疗药物，其在动物体内能迅速被吸收，在24h内就可以在动物肉、蛋、奶中残留，其危害性主要表过敏反应、细菌耐药性、致畸作用、现为变态反应、

致突变作用、致癌作用以及激素样作用。因此有必要研究开发出动物肉产品中磺胺类药物残留的快

2]

准确的色谱检测方法[1，。笔者等通过HPLC对速、

在-18℃下保存备用。使用前，根据实验需要将此标准贮备液用甲醇稀释至适宜含量，绘制标准曲线[3-5]。

取新鲜肌肉样品组织于碎肉器中绞碎至肉糜状，准确称取1.00g待测样品于离心管中，加入10mL乙酸胺缓冲溶液，于涡旋仪中振荡3min，4000r/min离心3min。准确吸取1.0mL上层清液以1.0mL正己烷萃取[6-10]，重复萃取3次，合并萃取液于吹氮管中，以30℃水浴吹氮至干。准确加入1.0mL甲醇溶解残渣，过0.45μm滤膜，待测。22.1

结果

检测波长的选择

分别用甲醇配制一定浓度的标准品溶液，用紫外-可见分光光度计在250-270nm波长范围内扫描各标准品的紫外吸收情况。结果显示，各标准（见图1、2所示），品在260nm时有较强的吸收峰

在最大波长处提取色谱图并计算峰面积。

猪肉中5种磺胺类药物的残留进行检测，不仅分离效果和峰形较好，且整个出峰时间控制在10min内，检测快速。11.1

材料与方法材料与试剂

猪腿肉（购于甘肃省天水市某市场“杜洛克”新鲜猪肉）；磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺噻唑、磺胺二甲嘧啶和磺胺喹噁啉标准品；甲醇、1％乙酸、乙酸胺等，其余试剂均为国产或进口分析纯。1.2

仪器

岛津SPD210ATvp（HPLC系统）；吉尔森GX-271ASPEC固相萃取系统；T18型碎肉器；Centrifuge5810型高速离心机；N-EVAP11型吹氮AL204型电子天平；涡旋仪；恒温水浴锅；低速仪；

离心机；酸度计以及少量玻璃器皿等。1.3

色谱条件

色谱柱：CloversilC18柱（4.6mm×150mm，5μm），柱温30℃，进样量5μL，紫外检测波长240-280nm，

流速0.6mL/min，流动相A为甲醇，流动相B为三蒸水，用磷酸调pH值至3.7。

梯度洗脱程序：0min15%A，15-25min25%A，65min75%A，70min15%A。1.4

方法

准确称取一定量的磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺噻唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹噁啉等5种磺胺类标准品，用甲醇溶解并转移至10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容、封口、静置，作为标准贮备液，

实

验技术

1.磺胺嘧啶；2.磺胺甲基异噁唑；3.磺胺噻唑；

4.磺胺二甲嘧啶；5.磺胺喹噁啉

图1五种磺胺标准品色谱图

Fig.1Chromatogramsofsulfonamidesstandards

1.磺胺嘧啶；2.磺胺甲基异噁唑；3.磺胺噻唑；

4.磺胺二甲嘧啶；5.磺胺喹噁啉

图2样品色谱分离图Fig.2Chromatogramsofsamples

2.2

流动相的选择

通过预实验及对比分析发现，选用甲醇-Ⅰ％乙酸水溶液作流动相，效果较好。2.3

标准曲线和检出限的确定

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分别配制一定浓度的5种磺胺类物质混合标流速0.6mL/min，按上述确准溶液，进样量5μL、定的色谱条件进行测定，进样后计算出不同浓度的峰面积，并计算出回归方程，其结果见表1。表1标准曲线及方法检出限

Tab.1Regressionequationanddetectionlimit

药物磺胺嘧啶磺胺甲基异噁唑磺胺噻唑磺胺二甲嘧啶磺胺喹噁啉

保留时间

回归方程

相关系数检出限/μg·mL-10.99980.99970.99920.99950.9998

0.010.020.010.040.06

10.31y=26.230x+9.5077.63y=25.320x+7.80411.75y=25.100x+9.28113.47y=20.310x+6.43718.39y=23.270x+6.750

度高、应用范围广，70%以上的有机化合物可用高大分子、强效液相色谱分析，特别适用于高沸点、热稳定性差化合物的分离分析。该方法已成极性、

为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。

本实验通过高效液相色谱法对肌肉样品预处理、仪器最佳色谱检出条件等考察发现，该法简便快速、基体干扰小、线性范围宽、回收率和检出限令人满意，从而建立了猪肉中多种磺胺类药物残留的HPLC测定方法，为今后快速灵敏地测定猪肉中磺胺类药物的残留量奠定了实验基础和理论依据，为动物源性食品的安全提供了保障。检测手段只能作为一种定性方法，要想从源头上杜绝水产品中有害物质的存在，首要任务还是要建立健全肉猪饲养体系，加强疾病及检疫预警机制，保证肉猪的健康生长。参考文献：[1]白

琦.高效液相色谱法测定鸡血浆中二氟沙2002，21（2）：5-7.星的浓度[J].中兽医医药杂志，

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分析[J].分析化学，1994，22（12）：1226-1227.

2.4方法回收率和精密度

在确定检测方法后，为验证该方法对样品中

实

验技术

磺胺类物质检测的适用性以及该方法的准确度和精密度，选取样品为测试对象，进行加标回收率和精密度实验，结果见表2。表2回收率及精密度

Tab.2Recoveryandprecisiondegree

组分磺胺嘧啶磺胺甲基异噁唑磺胺噻唑磺胺二甲嘧啶磺胺喹噁啉

加入量/μg

1010101010

测出量/μg9.3219.4429.4729.7849.381

回收率/%81.6080.5181.3683.6881.64

RSD2.603.703.601.902.70

[3]ArgerinosA，AthanasiouG，MalmatarisS.Rapid

sumultaneousdeterminationoftrimethoprimsupha－methoxazoleandacetylsuphamethoxazoleinhumanplasmaandurinebyHPLC[J].JPharm，1999（4）：125-127.

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前处理中的应用[J].分析测试仪器通讯，2010，

从表2可以看出，肌肉样品中5种磺胺类物质的加标回收率均在80%以上，且相对标准偏差低。此法精密度高，适用于猪肉中磺胺类物质的检测。3

小结

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样载液流速快，通常分析的分析。该法分析速度快、

一个样品在15-30min，有些样品甚至在5min内即可完成，一般小于1h；且其分离效能高、灵敏

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2013年第56期

6（4）：193-197.

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学学报，

DeterminationtosulfonamidesresiduesbyHPLCinpork

GAOXiao-long1，ZHAOHai-fu2

（1.DepartmentofChemistryEngineering，GansuIndustryPolytechnicCollege，TianshuiGansu741025；

2.CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，LanzhouGansu730070，China）Abstract：HPLCwasusedtodeterminesulfonamidesresiduesinporkwithCloversilC18chromatographiccolumnandmethanol-1%aceticacidaqueoussolutionasmobilephaseingradientelution.Columntemperaturewas30℃andsamplequantitywas5μLwithflowrateof0.6mL/minandultravioletdetectionwavelengthof240-280nm.Theresultsshowedthatsulfadiazine，sulfanilamidemethylisopropylpbo，sulfathiazole，sulfadimidineandAnti-ksulfamaterialweredetectedinthesamples.ItindicatedthatHPLCisarapidandaccuratemethodforthedeterminationofsulfonamidesresiduesinpork.Keywords:HPLC；pork；sulfonamidesresidue实验技术