高氧致新生鼠肺损伤时肾组织一氧化氮及氧自由基的变化
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高氧致新生鼠肺损伤时肾组织一氧化氮及氧自由基的变化
中国当代儿科杂志第!卷第"期&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&’()*+’,*-./01.2)3-4#$$%年#月5,67!8,7"9.:7#$$%
?实验研究?
高氧致新生鼠肺损伤时肾组织
一氧化氮及氧自由基的变化
刘雪雁,吴捷,薛辛东
(中国医科大学附属第二医院儿科,辽宁沈阳&""$$$;)
&&[摘&要]&目的&观察持续吸入高氧致新生大鼠肺损伤时肾组织自由基的变化,以探讨高氧对肾脏的损伤。方法&采用高氧致新生鼠肺损伤的模型,将足月新生鼠生后分别在?$@A%@氧气(!B";$)和正常空气(!BCC)中持续暴露,于",>,!,";,#"2各处死C只,用分光光度计比色法动态测定肺和肾组织中超氧化物歧化酶(DEF)活性、丙二醛(GFH)和一氧化氮(8E)含量的变化。结果&高氧暴露>2肺组织DEF的活性开始增高,!2时明显高于对照组(#";A"?I8JKLMN"C=A"?I8JKL,"O$7$"),并逐渐增高持续至";2(##$A"%I8JKLMN"?!A#"I8JKL,和#"2(#%"A"%I8JKLMN"?%ACI8JKL,;GFH含量于高氧暴露>2开始增高并高"O$7$%)"O$7$")
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鼠肺损伤时可进一步诱发肾组织的自由基损伤,但其发生滞后于肺组织。
[中国当代儿科杂志,!""#,$(%):$%<$&]
[关&键&词]&高氧;肺损伤;肾脏;自由基;大鼠,新生
[中图分类号]&P?%<>>&&[文献标识码]&H&&[文章编号]&"$$C<CC>$(#$$%)$"<$$!"<$;
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[收稿日期]&
[基金项目]&
[作者简介]&
[通讯作者]&#$$;<$;<#$;&[修回日期]&#$$;<$!<#=辽宁省博士科研启动基金(编号:#$$>"$;")。刘雪雁("?!><),女,博士在读,讲师。主攻方向:新生儿急救。刘雪雁,中国医科大学第二附属医院儿科,邮编:""$$$;。
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&&:,;<"20’:&TH0.4,R)3;U;*<23/3<.;V)2*.H;94..432)@36;Q3-,*.,*3-36
&&氧疗法是改善机体缺氧状态的一项重要措施,但长时间吸入高氧会导致不同程度的肺损伤,甚至发展成慢性肺疾病(@(4,*)@6;*<2)>.3>.,’UC)。除局部肺组织病变外,关于高氧对视网膜、脑以及肝肠组织等远隔器官的损伤也有报道,但对肾组织的损伤未见研究。现研究认为肺部氧化应激反应参与介导高氧诱导未成熟肺损伤,本研究以高氧诱导’UC的新生大鼠为研究对象,动态观察肺损伤过程中肾组织一氧化氮(*)-4)@,R)2.,8B)及氧自由基的变化,以探讨高氧对肾脏的损伤。
2)>/;-3>.,ABC)、丙二醛(/36,*2)362.(H2.,ECF)的测定
取冻存的肺和肾组织"<切碎,于冰盒内超声粉碎匀浆,制成"$$<JU的组织匀浆,G[低温离心后取上清液,分别采用南京建成生物工程研究所的8B、ABC及ECF试剂盒检测以上指标,应用紫外J可见分光光度计(法国%$$\1型)比色,考马斯亮蓝法测定组织蛋白含量,依据公式计算得出各指标数据。
77>=统计学处理
所有数值均用A1AA"$7$统计软件分析,数据用#多组间比$I$表示。两样本均数的比较用%检验;
较采用方差分析,两两比较用A8V\&检验。
7=材料与方法
777=实验分组及动物模型的建立
%$只雌性大鼠体重达#%$<左右后与雄性大鼠交配(GW")。孕#"2X#O2自然分娩的新生鼠生后"#(内随机分组($2):对照组("YNN)和高氧组("Y"G$)。高氧组置于氧箱(有机玻璃箱)中,氧浓度维持在(L$I%)Z,每日用数字式测氧仪监测,’B#浓度小于$7%Z,温度#%X#K[,湿度K$ZX!$Z,每天开箱"(,喂水及饲料,更换垫料,每天将母鼠与吸空气母鼠互换以避免代母鼠因氧中毒而致护理能力降低。对照组置于同一室内空气中,饲养条件与高氧组相同。于",O,!,"G,#"2分别从各组中随机抽取N只麻醉后,分离肺及肾组织,用冷生理盐水洗净右肺和肾组织的残血,吸干水分,\N$[冷冻保存待测定。
773=肺和肾组织8B、超氧化物歧化酶(>;0.4,R)2.
3=结果
377=肺组织ABC活性和8B、ECF含量
高氧暴露O2开始ABC的活力增高,但与对照组相比差异无显著性意义。!2时明显高于对照组(%Y"7$$,!M$7$"),并逐渐增高持续至"G2(%Y$7#L,!M$’$%)和#"((%Y$’G#,!M$7$");而ECF的含量,吸入高氧O2时即增高并高于对照组(%Y$7#",!M$7$%),!2最高,"G2虽有下降,但仍高于对照组(%Y$7$K,!M$7$%);8B水平则于!2时有所增高并高于对照组(%Y$7LO,!M$7$%),直至"G2(%Y$7$%,!M$7$%)和#"2(%Y$7$!,!M$7$")仍高于对照组。见表"。
表7=肺组织ABC活性和ECF、8B含量在不同吸氧时间的动态变化?1@%,7=A;#1-($$)1#B,’"C%&#BDEA1$+(F(+;1#0GAH,IE%,%F,%
吸氧时间(2)
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ABC(V8]J<)对照组"N"I##"L$I"$"NKI"L"L!I#""L%IN
高氧组"NOIG#$$I"O@#"GI"L:##$I"%3#%"I"%:
ECF(!/,6J<)对照组#"7!I"7$#"7"I"7O"L7LI#7###7KI#7O#$7$I#7"
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8B(!/,6J<)
高氧组!#I"G!!I"L
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对照组!OI"K!GI""NLINLOI"!"$KI#%
O$7NIG7#:#K7OIO7N3#O7OIG7N
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&&与对照组比较,3!M$7$%;&:!M$7$";&@与前一时间高氧组比较!M$7$%
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!7"#肾组织;<=活性和8<、>=?含量
随吸氧时间的延长,高氧组肾组织;<=的活性较对照组虽有增高趋势,但无差异;而>=?含量在"@2时增高并明显高于对照组(!A$7B#,"C
$7$"),#"2时虽有下降,但仍高于对照组(!A$7!","C$7$%);8<含量的变化趋势同>=?,于吸氧"@2时高于对照组(!A$7$D,"C$7$%),#"2仍明显较对照组增高(!A$7#E,"C$7$")。见表#。
表"#肾组织;<=活性和>=?、8<含量在不同吸氧时间的动态变化$%&’("#)*+%,-../%+0(1234-5+(*67)%.8-9-8*%+5:);%+5<7’(9(’1
吸氧时间(2)
"B!"@#"
#@!F@E#B#F@"##"F"E#KKFE#!DF#!
;<=(G8HIJ)对照组
高氧组#@!F%@#%DFB%#!BFKE#EBFB%#DEF"#
>=?(!/,6IJ)对照组"D7KF@7B"B7%F%7$"%7BFB7!"K7$F"7E"B7$F#7!
高氧组"K7"F%7E"!7BFB7@"D7KF@7E
L
#@7"F%7$:,
(#AD,$$F%)
8<(!/,6IJ)
对照组"%@FE"D%FBD#"EF"%###F@%#$@F@E
高氧组"K$F"$"D#F%K#BBF%E#DKF!"3#EDFK%:
"K7%F#7#3
&&与对照组比较,3"C$7$%;&:"C$7$";&L与前一时间高氧组比较"C$7$%
衡,导致氧化应激性肺损伤。
!#讨论
虽然’M=的发病机制仍不十分清楚,但活性氧(4.3L-)N.,OPJ.*Q0.L).Q,R<;)及其诱导的脂质过氧化、蛋白氧化和=8?损伤在肺损伤中的作用一直受到关注。有研究发现,>=?是高氧致肺早期损伤的
["]
一个敏感指标,本研究也证实,吸入高氧后,>=?
新生儿缺氧、缺血可引起肾组织的自由基损伤,而吸入高氧后,除局部肺组织病变外,肾组织能否发生自由基损伤至今未见研究。新生儿肾单位发育未完善,在活性肾发生区内仍有处于发育中的肾小球和小管,这与肺脏很相似,因此,本研究在观察高氧肺损伤的同时,也观察了肾组织的氧化应激状态。结果发现;<=的活性与对照组相比无差异,>=?、8<含量在吸入高氧!2内无明显变化,"@2时方明显增高。这提示,高氧肺损伤时,肾组织存在自由基损伤,但发生时间滞后于肺损伤,其发生机制考虑有以下几种可能性:(")吸入高氧本身对肾脏的影响:肾脏是一个高灌注器官,虽然吸入高氧只增加溶解状态氧而不能明显改变氧含量,但由于肾特殊的血管排列,高氧使肾局部的氧分压(1<#)增高,而高1<#具有潜在的血管收缩作用,可使总肾血流减
[%]
少。此外,吸入氧浓度还可直接通过影响肾交感
水平早期升高,达到高峰后,逐渐下降趋于对照组,
["]
与以往报道类似。近年的研究结果表明,8<这
种新型细胞信使分子也是一种自由基,容易与氧、超氧化物自由基、过渡金属离子等起反应,因此在高氧情况下,8<可产生高活力有害物质对未成熟的
[#]肺造成不同程度的损伤。国内学者研究表明高
氧可上调早产大鼠支气管肺泡灌洗液(S?M9)中8<含量及肺炎症细胞、上皮细胞一氧化氮合酶的
[B]表达,本研究进一步证实,高氧可引起新生鼠肺
组织8<含量的增加,但其发生较>=?增高迟并且持久,提示8<体系参与的高氧肺损伤是一复杂的病理生理过程。肺抗氧化酶发育在新生儿期仍处于未成熟阶段,但当吸入高氧而产生大量R<;时,也要作出保护性反应。有研究发现,高氧可诱导;<=
[@]/R8?表达。本研究表明,新生鼠吸入高氧早期
神经活性、血液循环中的激素水平、局部因素等多种途径而改变肾的血液动力。这种防御反应,在减少过多的氧进入肾组织的同时,也导致了肾缺血,从而引起肾组织氧自由基损伤。(#)高氧诱导肺部的氧化应激反应,>=?、8<等自由基大量生成并释放入血,引发肾组织的自由基损伤。(B)高氧可触发肺部炎症反应,使大量的细胞因子、炎症介质、蛋白酶类等释放入血,进一步活化炎性细胞,通过呼吸暴发、脱颗粒、释放氧自由基而致肾组织自由基损伤。(@)高氧诱发的’M=可引起细胞外基质重建,最终发生肺纤维化,肺部通气和换气功能的障碍和通气I
;<=活性开始升高,!2时;<=活性高于对照组,随着高氧暴露时间的延长,;<=活性的升高可能恰是对高氧后R<;产生增加的一种适应反应,但随着R<;的大量产生超过抗氧化系统的清除能力,或者抗氧化防御启动落后,均可能造成氧化I抗氧化失
?!B?
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血流比例的失调,必将造成周身各个脏器的供氧不足,从而导致肾组织的继发损伤。肾组织的自由基损伤可能正是上述诸多的因素相互作用的结果,因为肾组织自由基损伤滞后于肺,推测可能主要由高氧肺损伤所诱导,但是否引起病理学改变尚待研究。
吸入高浓度氧不但可引起新生动物局部肺组织的损伤,对其它远隔器官亦可能造成不同程度地损害,因此在临床工作中,积极防治早产儿’;<的同时,也不能忽略高氧对肾脏及其他器官的损伤。
[参&考&文&献]
["]&=)3*;>;,’(3*?;>@,A(3*?=>B,C,*?A>D7;E*?)*FE4G,H04.>
[%]&[N]&[X]&[#]&
-.4/43-I)*2EJ.2:G04,6,*?.2.K0,IE4.-,()?(,KG?.*J,*J.*-43>
[+]7中国当代儿科杂志,#$$N,%(#):O%>OO7-),*,HL%M
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7S/+1(GI),6,"OOL,#!X(N1-"):;X"">;X"Y76E*?J.66I[+]
马丽亚,常立文,全裕凤Z高浓度氧对早产鼠肺一氧化氮合酶表达的影响[+]Z中国当代儿科杂志,#$$",N(N):#N#>#N%7D,[B,<.GVB,’430,+<7S*-),K)23*-.*RG/..K04.II),*)*43-6E*?I2E4)*?(G0.4,K)3[+]7S/+1(GI),6,"OOY,#!$(%1-"):;L"$>;L"L7
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S/B,J8.0(4,6,#$$$,""("):"L>#X7
(本文编辑:钟乐)
?会议纪要?
第三届全国婴儿高压氧舱治疗新生儿缺氧缺血性脑病
协作组研讨会会议纪要
#$$X年""月#N日在长沙举行了第三届全国婴儿高压氧舱治疗新生儿缺氧缺血性脑病(Da])协作组会议,大部分协作组成员负责人和全国新生儿脑损伤专家研讨会的全体专家出席了本次会议。
提出了存在的问题和面临的困难。在过去#年中,主要杨于嘉教授对协作组过去#年的工作作了小结,
由于Da]纳入标准过严,经费短缺和家长不合作等原因,不少医院"年中无符合纳入标准的病例。但与会目代表与专家一致认为协作组的工作是很有意义的,一定要坚持下去。高压氧治疗新生儿Da]是否有效,前尚无科学的、使人信服的证据。只有通过多中心协作,合理的科研设计进行前瞻性的临床研究才能获得符合循证医学原则的科学结论。这样的结论无论是阴性还是阳性对临床均具有重要指导意义。纳入标准宜适又结合我国国情,当放宽,可分组总结。本次新生儿脑损伤会上修订的Da]诊断标准既考虑到与国际接轨,作为协作组纳入病例的依据是合理的。通过本次会议,协作组有决心将本课题进行到底。
&&(祁伯祥&整理)
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