测定痰液中细胞原血红素a-b-c用于肺癌筛查的有效性研究

　　理论与方法

　　测定痰液中细胞原血红素a/b/c用于肺癌筛查的有效性研究

　　何 强 夏 青 王瑞辉

　　1.济宁医学院附属医院兖州院区，山东 兖州 272000 2.山东大学附属济南市中心医院，山东 济南 250013 3.山东省诸城市妇幼保健院，山东 诸城 262200

　　摘要：目的：了解痰液细胞原血红素a/b/c测定用于肺癌筛查的有效性，对其在筛查和诊断肺癌中的价值进行评价。方法：对病理学诊断为肺癌和胸部CT检查为非肺癌病例，进行痰液细胞原血红素a/b/c测定，对两组病例进行对照研究。结果：细胞原血红素a/b/c检测用于筛查肺癌具有较高的阳性率和较低的假阳性率和假阴性率。结论：痰液细胞原血红素a/b/c检测技术在普及筛查肺癌方面有一定的实际应用价值。 关键词：细胞原血红素a/b/c；肺癌；肺癌筛查 中图分类号：R734.204 文献标识码：A 文章编号：1671-5780(2016)09-0200-02

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　　我国肺癌发病率越来越高，筛查是预防和控制肺癌的主要手段。检测痰液中的细胞原血红素a/b/c ，是便捷、快速、有效地筛查肺癌方法之一。

　　1 资料与方法

　　1.1 病例与分组

　　（1）观察组：我院病理学检查确诊为肺癌病例68例。 （2）对照组：我院因非胸部疾病做体检，经胸部CT检查未发现异常者100例。

　　（3）以上两组均排除支气管扩张、肺结核、慢性支气管炎、支气管哮喘、肺炎、肺动脉高压、二尖瓣狭窄等疾病。

　　（4）检测试剂：本研究痰液细胞原血红素a/b/c分析试剂为《苯胺蓝染色液》，由山东天倪生物技术有限公司提供。试剂盒的型号与规格：TNL ? SSF型，单人份。医疗器械产品备案/产品技术要求编号：鲁济械备20160006号/20160007号/20160042号；医疗器械生产许可备案证编号：鲁济食药监械生产备20160002号。

　　1.2 检测方法：

　　1.2.1 样本收集及要求：

　　（1）采集标本为晨痰，先应用清水、冷开水漱口，用力咳出呼吸道深部的痰（非后鼻部分泌物、非唾液），痰液直接吐入痰杯中，标本量应≥1ml。对于痰量少或无痰或咳痰困难者可用雾化吸入加温至45C的10% NaCl水溶液（痰液粘稠难咳,阻塞气道的,需要用α-糜蛋白酶盐水溶液），使痰液易于排出后咳痰。

　　（2）痰液可呈黏液性、浆液性、脓性、黏液脓性或血性等多种性状，检测前需要预处理。用采样拭子蘸取痰液，以拭子头部全部湿润为度。打开样本管，把拭子置入样本保存液（样本预处理液）内充分搅动，使蘸在拭子头部上的痰液与样本保存液混匀，然后静置5分钟制得样本液。

　　（3）操作步骤及结果判读：向样本管内依次加入试剂A、试剂B各0.5ml，盖好样本管塞，颠倒样本管2~3次，使样本液与试剂混匀。静置。在5分钟时间节点观察反应液显色情况，并与比色板比对。

　　阴性：尚未发现肺癌风险；

　　可疑阳性：可能存有肺癌风险； 阳性：存有肺癌患病风险。

　　若反应液缓慢出现粉色或黄色，表明样本内混有较多粘液，仍存有显示蓝色的可能性，再延长观察时间5~8分钟。

　　若反应液即刻显深蓝色后转为深黄色或棕红色，表明标本内内混有血液，应视为强阳性。

　　肺癌组68例，痰液细胞原血红素a/b/c检测阳性59例，阴性9例。阳性率为59/68=86.8%。即灵敏度为86.8 %。

　　（3）肺癌组与对照组痰液细胞原血红素a/b/c检测阳性率比较，差异有高度显著性（p0.01）。

　　肺癌组不同病理学分型间阳性率比较，腺癌阳性率较低，但因病例过少，无法进行统计学处理。

　　（4）病理学检查确诊为肺癌病例68例。按其临床分期痰液细胞原血红素a/b/c检查结果如下表所示：

　　2 实验结果

　　（1）特异性实验：胸部CT检查未发现异常者100例，痰液细胞原血红素a/b/c检查结果为阳性者14例。故对照组阳性率（假阳性率）为14/100 =14.0 %；计算得到该试剂特异度为86.0 %。

　　（2）敏感度实验：我院病理学检查确诊为肺癌病例68例。按其病理学分型痰液细胞原血红素a/b/c检查结果如下表所示：

　　肺癌组不同分期间阳性率比较，从数字看无明显差异，但因病例过少，无法进行统计学处理。以上资料显示，痰液细胞原血红素a/b/c对肺癌早期筛查具有一定的作用。

　　（5）计算《苯胺蓝染色液》检测痰液细胞原血红素a/b/c约登指数为0.73。

　　3 临床验证分析

　　结果显示痰液细胞原血红素a/b/c检测用于筛查肺癌时具有较高的阳性率（86.8%）和非常低的假阳性率（即误诊率，14.0 %）以及较低的假阴性率（即漏诊率，13.2 %）；

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　　中国科技期刊数据库 科 研

　　该方法用于肺癌筛查具有较好的有效性，对协助肺癌早期诊断亦有一定的意义。

　　素口袋）中的原血红素释放，导致局部组织渗液中原血红素含量增加，其释放量与细胞癌变程度呈正相关。测定局部组织渗液中原血红素含量，即可显示该组织是否存有细胞癌变及其程度。

　　该技术为无创取材、靶向、快速、床旁（POCT）诊断，5~10分钟即可显示检测结果。具有新颖性、创新性、实用性，高灵敏度、高特异度，准确、经济、操作方便，是肺癌筛查、普查和协助早期诊断的适宜技术。

　　参考文献

　　[1]董贝贝等，血红素结合蛋白生化特性及应用进展，中国实验血液学杂志 2013:21（2）；513~516.

　　[2]Wu Mian. P53 regulates biosynthesis throuth direct inactivation of glucose-6-phosphate Nature Cell Biology 2011，（13）310-316.

　　[3]Banerjee,P.Basu,A.Wegiel,B. et al.Heme oxygenase-1 promotes survival of renal cancer cells through modulation of apoptosis- and autophagy-regulating molecules[J].The Journal of biological chemistry,2012,287（38）:32113-32123.

　　[4]戴宇飞，等 活性氧对血红蛋白的损伤机理的研究，卫生研究 1999:01 5-8

　　[5]Belcher JD，Beckman JD，Balla G，et al． Heme degradation and vas-cular injury[J]． Antioxid Redox Signal，2010，12（ 2） : 233 －248．

　　[6]Figueiredo RT，Fernandez PL，Mour? o － As DS，et al． Charac-terization of heme as activator of Toll － like receptor[J]． Biol Chem，2007，282，20221 － 20229． [7]黄耿文,杨连粤.肿瘤细胞的缺氧信号传导通路.世界华人消化杂志 2002;10（12）:1441-1444.

　　[4，7]

　　4 讨论

　　据统计，我国肺癌发病率每年增长26.9%，肺癌已成为我国首位恶性肿瘤死亡原因，占全部恶性肿瘤死亡的22.7%，且发病率和死亡率仍在继续迅速上升。虽然近年来在肺癌的临床治疗方面有较大进展，但由于目前缺乏简便实用、行之有效的能为肺癌患者快速作出正确诊断的方法，一等到病理诊断时多已为中晚期，失去了早诊早治的机会，以及肺癌自身的特点，故肺癌的5年相对生存率仍较低，一般低于15%。

　　肺癌可以预防的。多项研究证明，90%的早早期肺癌手术后生存期＞10年。尽可能筛查高危人群，早期发现，及时采取措施，防止进一步发展。当前肺癌初筛及早期诊断推荐方法为低剂量螺旋CT，因其操作和价格因素的问题不宜在普通人群中开展大规模的筛查。通过寻找理想的方法用于肺癌的筛查、早诊、预后判断及指导个体治疗都已成为临床热门课题。

　　苯胺蓝染色液（ 肺/支气管粘膜细胞特殊染色 TNL? SSF 型）是一种分析肺/支气管粘膜上皮组织细胞病理变化的检测试剂，属液体活检病理学检测技术，检测痰液中的细胞原血红素a/b/c，应用于肺癌筛查及协助早期诊断。

　　原血红素是血红素家族的重要成员，是血红素在人体内

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　　的存在形式，是血红素结合蛋白的活性基。它由原卟啉Ⅸ与二价铁离子结合而成。据其分子结构和功能不同又分为原血红素a、b、c，在肿瘤发生过程中被释放，属于医学相关生物标志（medicine-related biomarker）。致癌因素导致

　　[2~3]

　　肿瘤细胞代谢异常，糖循磷酸戊糖途径代谢，形成高代谢水平、高氧化态势和高间质压力微环境。其间芬顿氏反应产

　　[4~6]

　　生的羟自由基、过氧自由基等对线粒体造成氧化损伤，改变细胞蛋白的极性量值，使位居线粒体基膜中血红素结合蛋白（以原血红素为活性基酶和细胞色素）疏水核（又称血红

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　　竞赛榜，奖励回答正确的小组托马斯小火车，大大激发了学生的学习兴趣。为了能让多名学生出不同的题目，我在此页面上增加了页面重置按钮。在学生能利用对应点准确的说出图形是向哪个方向平移了多少格之后，我出示试一试的第一题：画出三角形向右平移6格后的图形。

　　在此请一同学利用电子白板，其他同学在课本上完成。这时可以让学生利用白板中笔的工具，选择不同的颜色标注出对应点，然后使用直线工具准确的画出图形。在学生操作的过程中我使用屏幕纪录器工具，将学生整个画图的过程录制下来，然后播放给操作有困难的同学看。在播放的过程中还可以实时的暂停，由刚才操作的同学说说操作的过程。然后由扶到放，放手让学生画出平行四边形向下平移5格后的图形。

　　交互式白板还提供了资源库管理的功能。交互式白板资源库分为个人资源库和公共资源库，每一类型库中又可分为图片库、页面库、模板库、活动挂图库等几种 类型，支持不同类型资源的存储和管理。资源库中的资源经过一段时间积累后将相当丰富，供自己以后或同行之间参考、共享，改善教师之间评价、合作、学习交流 的方式。

　　当然，交互式电子白板的利用策略还有很多，潜在的优势广大。例如可以利用电子白板记录下白板上发生的教与学的全过程,使课堂上即时产生的材料都被保存和再利用。课后可以将教学过程以最通用的格式记录下来,发给学生以便随时复习。教师也可以重复观察课堂记录,进行教学反思,改进课堂教学策略,提高教学设计水平。课堂上学生完全可以用原来记笔记的时间更多地进行思考,更多地参与到集体学习或交流反馈中,大大提高了课堂的效率,提高了学生在课

　　堂教学中的参与率。另外,我们还需要有意识地将白板所带有的交互能力融入自己的教学理念中,将已有资源和自主设计的白板资源整合进自己的课堂教学中,甚至可以鼓励学生参与电子白板的资源建设。电子白板延续了教师边讲解、边书写的授课习惯,而且使数字化的内容得以呈现。当然,技术功能的发挥很大程度上决定于教学策略的应用,只有进一步探讨相应的教学策略和方法,才能真正提高交互式白板的教学有效性。

　　交互式电子白板在我的教学过程中给予了很大的帮助，它增强了教学过程中的互动性，因为交互式电子白板拥有庞大的资源库，所以能够实现教学资源的共享和互用，突破了传统的演示性教学，增强了课堂的生动性和趣味性。而且可以将我在课堂上教学细节记录下来，方便之后进行调用，虽然有着这么多的优点，但在交互式白板的使用过程中还是存在一定问题，首先硬件方面长时间使用白板，白板的反光可能会造成学生视觉疲劳，其次我们在教学过程中，往往只是用了电子白板几个简单的功能，没有对功能进行深入了解造成资源的浪费。这些都是在以后的教学过程中需要我们注意和改善的。

　　参考文献

　　[1]朱莹.浅议交互式电子白板在小学数学教学中的应用[J].科学大众:科学教育,2014(1):101.

　　[2]李军.交互式电子白板在小学数学课堂中的使用现状及对策分析[J].江苏教育研究,2013(14):64-66.

　　[3]田怡.交互式电子白板在小学数学教学中的运用[J].学子:教育新理念,2014(10):111.

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