免疫实验四
一 小鼠抗绵羊红细胞抗体的制备及检测
【实验原理】免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。具有灵敏度高、特异性强、快速反应的特点，是免疫学技术中应用最为广泛的方法之一。酶联免疫技术以酶作为标记物，与相应的抗原或者抗体结合后，通过底物的颜色反应作为抗原抗体的定量定性检测，即酶联免疫吸附实验（ELISA）。其中间接法适用于抗体的检测。
【实验步骤】
1.脱纤维防凝处理的绵羊血，配制20%和40%的SRBC悬液给小鼠免疫，腹股沟皮下注射，每周一次，连续3周，每次0.1ml。
2.第四周时，摘眼球取血，收集小鼠血于EP管，静置半小时。2000转离心10min，取血清。
3.取出包被好抗原的酶标板（4孔/组），甩干孔内液体。以洗涤液（200μL/孔）洗涤3次，2min/次。
4.编号各孔1~4，分别加入空白、阴性、阳性、待测液各100μL，置于37℃湿盒内30min。
5.甩干孔内液体，以洗涤液（200μL/孔）洗涤3次，2min/次，孔加入酶标羊抗鼠二抗100μL/孔，置于37℃湿盒内30min。
6.甩干孔内液体，以洗涤液（200μL/孔）洗涤3次，2min/次，加入底物溶液100μL/孔，避光显色，观察。
【实验结果】
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图片左组为20%组，右组为40%组，所加液体分别为空白、阴性、阳性、待测血清。其中显色的3、4号为阳性，1、2号为阴性。
【实验分析】
实验结果显示，待测小鼠血清结果为阳性，表示小鼠血清中含有抗绵阳红细胞抗原的抗体。 结果显示两组的3号添加阳性液的管内二者颜色深浅不同，可能是由于洗涤过程中由于4号管液体溅出至第一组3号管所致。
二 豚鼠过敏实验
【实验原理】超敏反应是指已致敏的机体再次接触相同变应原时，所引起的自身组织损伤和生理功能紊乱。其中I型超敏反应又称为速发型超敏反应或者变态反应，引起超敏反应的抗原称之为变应原。
变应原首次进入机体时，刺激浆细胞产生IgE，IgE的Fc段与肥大细胞或噬碱性粒细胞表面的FcεR结合，使得IgE吸附于细胞的表面。当相同的变应原再次进入致敏机体时，即可与吸附于细胞上的IgE结合，引起一系列反应，使这些细胞释放祖胺等生物活性物质，引起I型超敏反应的发生。
【实验步骤】
1.在实验开始前两周，给豚鼠皮下注射1ml稀释的蛋清。
2.固定好豚鼠，找到心尖搏动处，消毒后心内注射1ml稀释蛋清。放开豚鼠，观察反应情况。
【实验现象】预期现象：在注射后数分钟内，豚鼠会出现一系列症状，表现为兴奋不安、躁
动、鼻翼煽动、抓鼻，呼吸急促、毛发耸立、四肢痉挛、跳跃甚至死亡。
实际现象：豚鼠有轻微躁动反应，呼吸急促，但表现不明显。
【实验分析】超敏反应不明显，可能是由于发敏注射时注射剂量过小，不足以引发明显的超敏反应。
或者是由于注射时未注射到心内，导致超敏反应不明显。
应有的现象为在注射后数分钟内，豚鼠会出现一系列症状，表现为兴奋不安、躁动、鼻翼煽动、抓鼻，呼吸急促、毛发耸立、四肢痉挛、跳跃甚至死亡。但是小鼠并未死亡，原因可能是并未注射入心脏中，或者注射剂量不足。
左边为20%的实验组，右边为40%的实验组，1~4里分别加的是空白、阴性、阳性、待测血清。其中显色的3、4号为阳性，1、2号为阴性。
结果分析：根据4个管的颜色可知，待测小鼠血清为阳性，说明小鼠血清中含有抗绵阳红细胞抗原的抗体。但是左边3号颜色比右边深，可能是在实验过程中操作不当所致。
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