提取方法对鳐鱼肝脏油脂提取率及理化特性影响
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提取方法对鳐鱼肝脏油脂提取率及理化特性影响
提取方法对鳐鱼肝脏油脂提取率
及理化特性影响
111,23
臧丽芹,郑羽丽,陈小娥,方旭波,江旭华
(1.浙江海洋学院食品与药学学院,浙江舟山316004;
2.浙江省水产品加工技术研究联合重点实验室,浙江舟山316004;
3.浙江富丹旅游食品有限公司,浙江舟山316104)
要:以鳐鱼肝脏为原料,比较钠法、钾法及蛋白酶法的鱼肝油提取率,并对粗鱼肝油进行感官评
价及理化性质分析。结果表明,蛋白酶法的提取率高于碱法,且碱性蛋白酶的提油效果最好,提取率达到81.51%,提取鱼肝油理化指标达到SC/T3502—2000标准粗鱼油的二级要求,还需进一步的优化及精炼工艺。研究可为鳐鱼肝脏油脂的开发利用方面弥补空白,提供一定的参考价值。摘
关键词:鳐鱼肝脏;提取;蛋白酶法;碱法;理化性质
中图分类号:TS201.1文献标识码:A文章编号:1007-7561(2012)06-0038-03
Effectsofextractionmethodsontheextractionrateandthephysicalandchemicalpropertiesofskateliveroil
2
ZANGLi-qin1,ZHENGYu-li1,CHENXiao-e1,FANGXu-bo1,,JIANGXu-hua3
(1.CollegeofFoodandPharmacy,ZhejiangOceanUniversity,ZhoushanZhejiang316004;2.JointKeyLaboratoryofAquaticProductsProcessingTechnologyResearchofZhejiangProvince,
ZhoushanZhejiang316004;
3.ZhejiangFudanTourismFoodCo.,Ltd.,ZhoushanZhejiang316104)
Abstract:Theextractionrateofskateliveroilextractedbysodiummethod,potassiummethod,andprote-asemethodwerecompared,andthephysicochemicalpropertyofthecrudeoilswereanalyzedandevalua-ted.Theresultsshowedthattheextractionratebyproteasemethodwashigherthanthatbyalkalimethod,whichwas81.51%.ThephysicochemicalindexesofthecrudeoilsreachedsecondgradeaccordingtoSC/T3502—2000.Theoilsneededfurtheroptimizationandrefiningprocess.Thestudycanfillintheblankinutilizationofskateliveroilandprovidedsomereference.
Keywords:skateliver;extraction;proteasemethod;alkalimethod;physicalandchemicalproperties鳐鱼(skate)是板腮类多种软骨鱼的统称,鳐形目(Batoidea),主要分鳐科、魟科和鲼科,是鲨鱼的近亲。分布于印度洋、西部太平洋、中国的南海和东海,是远洋金枪鱼围网作业时的副产物,数量众多,弃之可惜。现阶段国内水产加工企业开发的产品以冻品和干制品为主,在加工过程产生的下脚料超过总重量的50%,其中肝脏占下脚料比例超过10%,是良好的鱼油(包括鱼肝油)加工原料,但是由于脂
收稿日期:2012-06-12
基金项目:浙江省自然科学基金项目(LY12C20007);浙江省大学生
科技创新活动计划项目(2010R4111002);舟山市海洋经济创新团队培育计划资助:1987年出生,作者简介臧丽芹,女,山东临沂人,硕士研究生.
1968年出生,通讯作者:陈小娥,女,浙江浦江人,博士,教授.
质成分不明确及技术水平限制,企业对它的加工利
用尚处于空白。迄今,对鳐鱼肝脏油脂的研究鲜有报道。因此,研究鳐鱼肝脏中鱼肝油的提取方法,为鳐鱼肝油的进一步加工与利用提供基础依据很有必要。
鱼肝油提取方法有蒸煮法、压榨法、溶剂提取法、淡碱水解法及酶法等。蒸煮法提油工艺简单,提油率低且品质较差。压榨法提取率较低,制备的鱼肝油质量较差。溶剂提取法耗费大量有机溶剂,其产品可能存在溶剂残留,很少应用。传统淡碱水解法采用氢氧化钠稀溶液及氯化钠溶液,此法已很成熟,但提取时废液含有较多钠盐,不可进一步利用,产生新的废弃物。钾法是提取鱼肝油的新工艺,可
1.3.2.2
钾法提油工艺参照1.3.2.1,将碱液及盐分别替换为氢氧化
[7]
保证鱼肝油的质量及提取率,且能克服传统的淡碱
水解法废弃物不可进一步利用的缺点。且钾盐是传统的农业肥料,提取鱼肝油后的废渣和废液中含有
[1]
大量的氨基酸和蛋白质,是很好的绿色肥料。酶法处理条件较温和,对油脂的功能成分及蛋白破坏小,能够将营养物质尽可能保存,有益于副产品的利用,能提高出油率,降低能耗、溶耗,减少生产废弃物的有害成分,对环境治理有利。并且可以充分利用
[2]酶解液,是提取鱼肝油较好的方法。
因此,本研究以鳐鱼肝脏为原料,分别用钠法、
钾及氯化钾,进行钾法提油工艺1.3.2.3
。
蛋白酶的选择及提油工艺
将一定量鳐鱼肝脏解冻,洗净沥干,绞碎后,分
别称取100g鱼脏置于烧杯中,依次加入鱼肝质量1.5%五种蛋白酶(胰酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶),加一定量的蒸馏水使液固比均为1∶1,置于恒温振荡器中,转速均为130r/min,并分别在各种酶的最适pH及温度条件下,酶
15解4h。然后将酶灭活,趁热离心(5000r/min,
[8-10]
min),。酶的最适pH分离上层液,即粗鱼肝油及温度条件参见表1。
钾法及蛋白酶法提取鱼肝油,并进行感官评价及理化性质分析,旨在为鳐鱼肝油的提取利用方面弥补空白,并为其保健品的开发方面提供有指导意义的理论数据。11.1
材料与方法
材料与试剂
鳐鱼肝脏:浙江富丹旅游食品有限公司,放置在低温(-18℃)下冷冻保存。中性蛋白酶(200000U/g)、胰酶(4000U/g)、木瓜蛋白酶(800000U/g)、碱性蛋白酶(200000U/g)、南宁庞博生物工程有限公司;胃蛋白酶(1∶3000):上海蓝季科技发展有限公司;氢氧化钠、氢氧化钾、乙醚、氯仿、冰乙酸、乙醇等均为分析纯。1.2主要仪器
均质器:中国铁道部电化院四方电器设备厂;FE20实验室pH计:梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;DSHZ-300旋转式恒温振荡器:太仓市实验设备厂;GZX-9140MBE数显鼓风干燥箱:上海博讯实业有限公司医疗设备厂;AnkeLXJ-ⅡB低速大容量离心机:上海安宁科学仪器厂。1.31.3.1
方法
鳐鱼肝脏基本成分测定
[3]
表1酶种类中性蛋白酶
胰酶碱性蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶
五种蛋白酶的最适pH及温度条件
pH77.582.56.5
温度/℃
5050504550
1.3.2.4
理论鱼肝油质量
即鳐鱼肝脏的粗脂肪含量,测定方法为索氏提取法。
鱼肝油提取率的计算
提取鱼肝油的质量
×100[11]。
理论油脂的质量
提取率(%)=
1.3.2.5
1.3.3鱼肝油的感官及理化性质分析
分别对不同方法提取的粗鱼肝油进行感官及理化性质分析,方法如下:感官评价,参照SC/T3502—2000;酸值测定,参照GB/T5530—2005;过氧化值测定,参照GB/T5538—2005;皂化值测定,参照GB/T5534—2008;不皂化物测定,参照GB/T5535.1—2008;碘值测定,参照GB/T5532—2008;水分及挥发物测定,参照GB/T9696—2008;不溶性杂质测定,参照GB/T15688—2008。22.1
结果与分析
鳐鱼肝脏基本组成由表2可知,鳐鱼肝脏中的粗脂肪含量约为29.03%,粗蛋白含量约为8.51%,说明鳐鱼肝脏含有的脂肪量较高,可以作为提取油脂的良好原料。且鳐鱼肝油提取的废液中可能含有一些氨基酸、蛋白质等,可以作为动物性饲料或调味汁进一步利用。
表2
粗脂肪29.03±0.05
±s)鳐鱼肝脏基本成分分析(x珋粗蛋白
8.51±0.06
水分60.59±0.13
%
灰分0.82±0.02
粗蛋白测定:常量凯氏定氮法法
[5]
;水分测定:
105℃干燥恒重法[4];粗脂肪测定法:索氏抽提;灰分测定:参照GB/T5009.4—2010《食品中
。灰分的测定》
鳐鱼肝脏提油方法的研究
钠法提油工艺
将100g鳐鱼肝脏解冻,洗净沥干,绞碎后,加
1.3.21.3.2.1
入烧杯中,加一定量的蒸馏水使液固比为1∶1,置于恒温振荡器中,并以130r/min振荡升温至45℃,分两次加入20%的氢氧化钠溶液,调pH值为8~9,继续振荡升温至80℃,保温60min,加鱼肝质量4%的氯化钠,继续振荡边水解,边盐析15min,趁热15min),离心(5000r/min,分离上层液,即粗鱼肝[6]油。
2.2
不同方法对鳐鱼肝油提取率的影响由图1可知,钠法与钾法的鱼肝油提取率相近。酶法比碱法的提取率高。在酶法中,碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰酶的提取率较高,其中碱性蛋白酶的提取率最高
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2.3
不同提取方法下鳐鱼肝油的感官性质比较对提取的鱼肝油进行感官评价,与我国水产行业的SC/T3502—2000粗鱼油标准进行比较,结果见表3。
由表3可得,从气味方面分析,碱法与酶法提取的鱼肝油均表现为具有鱼肝油的腥味、稍有鱼肝油酸败味,符合我国水产行业的SC/T3502—2000粗鱼油二级要求。从外观方面分析,钠法、钾法提取的粗鱼肝油颜色较好,为透亮的金黄色,达到粗鱼肝油二级标准。酶法提取的鱼肝油颜色为红棕色,不同蛋白酶提取的鱼肝油颜色深浅不一。其中,木瓜蛋白酶及碱性蛋白酶提取的鱼肝油外观为稍浅的红棕色,感官指标均达到粗鱼肝油二级标准。胰酶、中性蛋白酶及胃蛋白酶提取的鱼肝油颜色较深,有浑浊,为粗鱼肝油三级标准。
1-钠法;2-钾法;3-木瓜蛋白酶;4-碱性蛋白酶;5-胰酶;6-中性蛋白酶;7-胃蛋白酶。
图1
不同提取方法对鳐鱼肝油提取率的影响
表3
项目钠法钾法中性蛋白酶
胰酶碱性蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶一级标准二级标准三级标准
不同提取方法对鳐鱼肝油感官性质的影响
气味
具有鱼肝油的腥味、稍有鱼肝油酸败味具有鱼肝油的腥味、稍有鱼肝油酸败味具有鱼肝油的腥味、稍有鱼肝油酸败味具有鱼肝油的腥味、稍有鱼肝油酸败味具有鱼肝油的腥味、稍有鱼肝油酸败味具有鱼肝油的腥味、稍有鱼肝油酸败味具有鱼肝油的腥味、稍有鱼肝油酸败味具有鱼油的腥味、无酸败臭味具有鱼油的腥味、稍有鱼油酸败味
有鱼油酸败味
外观
浅黄色、稍有浑浊浅黄色、稍有浑浊红棕色较深、有浑浊红棕色较深、有浑浊红棕色、稍有浑浊棕褐色、有浑浊红棕色、稍有浑浊
浅黄色或红棕色、较澄清
浅黄色或红棕色、稍有浑浊或分层浅黄色或红棕色、有浑浊或分层
2.4
不同提取方法鳐鱼肝油的理化性质比较
分别对不同提取方法的粗鱼肝油进行理化性质测定其酸值、过氧化值、皂化值、不皂化物、碘分析,
值、水分和挥发物及不溶性杂质,并与我国水产行业的SC/T3502—2000粗鱼油标准进行了比较。结果见表4。
表4
不同提取方法对鳐鱼肝油的理化性质的影响
水分及不溶性挥发物杂质/%/%0.420.490.520.670.470.680.48
0.440.430.540.630.430.710.46
由表4可得,碱法中,钾法与钠法的鱼肝油品质
相差不大,提取的鳐鱼肝油酸值均达到了我国水产行业标准规定的粗鱼肝油一级标准,但过氧化值较高,原因可能是提取温度较高。不溶性杂质和水分及挥发物均达到粗鱼肝油二级要求。
蛋白酶法中,碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及中性蛋白酶提取鱼肝油的酸值及过氧化值均达到粗鱼肝油二级标准,可能是原料在空气中暴露的时间较长的缘故。其中碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶提取鱼肝油的不溶性杂质及水分和挥发物均达到粗鱼肝油二级要求。需要进一步的精炼,降低鱼肝油的酸值、过氧化值等,从而使所提鱼肝油达到国家精制鱼肝油一级标准。
碱法及酶法提取鱼肝油的碘值均达到粗鱼肝油一级标准。说明鱼肝油含有一定量的不饱和脂肪酸。仅有碱法、碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶提取鱼肝油的水分和挥发物及不溶性杂质达到粗鱼油二级标准。说明粗鱼肝油还含有一些蛋白质与色素等成分,这些杂质影响鱼肝油稳定性,且还会进一步影响
(下转第56页)
项目
酸值过氧化值皂化值不皂化碘值
/(gI2/(mgKOH//(mg/kg)物/%
/g)(mmol/kg)/100g)
6.987.129.7910.838.1511.258.34
12.9913.417.1515.588.7513.858.64
175.37174.12179.84172.55178.07177.93176.58--
2.232.292.102.052.382.412.23--
135132147132149133148≥120
钾法钠法中性蛋白酶胰酶碱性蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶一级标准二级标准
≤8.00≤6.00≤15.00≤10.00≤0.30≤0.30≤0.50≤0.50
:“-”注表示不存在。
c/(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线,得线性方程,以基线噪声3倍峰面积对应的质量浓度为检出限(RSN=3)[12],回归方程、相关系数及检出限见表1。
表1
分析物丙酸
回归曲线的基本参数
线性回归
方程
相关检出限系数/(μg/mL)
1.58
测定浓度范围/(μg/mL)
10~200
量进行测定,并进行了方法学考察。实验结果表明本方法前处理简单、出峰时间适中,方法可行,结果准确,该方法节省了检测时间,在实际的检测工作中具有较高的参考价值。参考文献:
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15-16.
[2]中华人民共和国卫生部.GB2760—2011食品添加剂使用卫生
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[12]中华人民共和国卫生部.GB/T5009.1—2003食品卫生检验方
y=4772.1c-4050.30.9996
2.3
精密度和加标回收试验
取一蛋糕空白样品进行加标回收试验,向2g蛋糕样品中分别添加1000μg/mL丙酸标准溶液
0.2mL,1mL,2mL即样品中丙酸含量为0.1g/kg,0.5g/kg,1g/kg。按上述提取步骤进行提取,重复6次。按1.2色谱条件进行测定,精密度和回收率计算结果列于表2,由表2数据可知,采用本方法丙酸的平均回收率为94.6%,相对标准偏差为1.61%,满足实验要求。
表2
加标水平/(g/kg)0.10.51
按照本方法样品添加回收和精密度实验
测定值/(g/kg)
平均
平均值
回收
/(g/kg)
率/%
RSD/%1.281.610.89
0.0910.0920.0900.0930.0910.0900.09091.00.4620.4710.4690.4800.4720.4830.47394.60.9350.9420.9280.9510.9380.9470.94094.0
3
结论
本实验采用毛细管气相色谱法对糕点中丙酸含
S].北京:中国标准出版社,2003.●法理化部分总则[
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪(上接第40页)
深加工,需要精炼工艺去除,以提高鱼肝油质量,达到食用和工业的目的。3
结论
不同蛋白酶中,碱性蛋白酶的鱼肝油提取率最高,理化性质也较好,颜色为较浅的红棕色,因此可采用碱性蛋白酶正交优化提油工艺,降低成本,扩大效益。鳐鱼肝油的不皂化物稍高,因此可以进一步分离,深入研究,从而得到一些有用的成分。仅有中性蛋白酶、碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶提取鱼肝油的过氧化值达到粗鱼肝油二级标准,需要在以后的提取过程中采取一些抗氧化措施。此外,粗鱼肝油含有一定量的杂质,因此需要进一步的精炼,从而使所提鱼肝油达到国家精制鱼肝油一级标准。并可作为保健品等应用于市场,满足消费者更大的需求,从而创造更高的利润。参考文献:
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