O-去甲基文拉法辛对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶亚型CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19活性的影响

O-去甲基文拉法辛对大鼠肝微粒体细胞色素 P450 酶亚型
CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19 活性的影响
刘明远 杨光远 杨 艳
1
孙严彤
1
赵锦程 朱秋双 张明远 白 雪 杨 玉 张 波
（佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007）
〔摘 要〕 目的 研究O-去甲基文拉法辛（ODV）对大鼠肝微粒体内细胞色素P450 酶CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19 活性的影响。方法 以生理
盐水为对照，大鼠每日灌胃给予22. 90 mg / kg 的O-去甲基文拉法辛琥珀酸盐水合物，连续7 d，然后测定其肝微体 CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19 的活
性。结果 与生理盐水对照组比较，ODV 组CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19 活性无变化（P ＞0. 05）。结论 ODV 对大鼠CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19 活
性无影响。
〔关键词〕 O-去甲基文拉法辛；CYP450；CYP1A2；CYP2C9；CYP2C19
〔中图分类号〕 R34 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202（2012）12-2547-02；doi：10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2012. 12. 047
基金项目：黑龙江省自然科学基金资助项目（D200873）；黑龙江省科技
攻关项目（GC09C317）；佳木斯大学新世纪创新基金项目
（CX2009-027）；佳木斯大学重点项目（Szj2008-015）
1 吉林大学药物代谢研究中心
通讯作者：杨光远（1975-），男，副教授，硕士生导师，主要从事心血管药
理及药物相互作用研究。
第一作者：刘明远（1973-），女，副教授，博士，主要从事药物分析及药物
代谢研究。
O-去甲基文拉法辛（ODV），化学名称为 1-〔2-（二甲基氨
基）-1-（4-苯酚）乙基〕环己醇，是抗抑郁药文拉法辛的活性代
谢物。与文拉法辛相同，ODV 通过抑制5-羟色胺以及去甲肾上
腺素的再摄取来治疗抑郁症、强迫症以及焦虑症，但副作用小，
比其更安全
〔1，2〕
。药物对CYP450 的影响是药物间相互作用的
重要机制之一，而ODV 对CYP450 代谢酶活性的影响国内外文
献鲜见报道。因此，明确ODV 对CYP450 酶各亚型的影响对了
解其与临床其他药物的相互作用、指导临床合理用药具有重要
的意义。本课题组前期实验结果表明，ODV 对大鼠 CYP450 含
量和 CYP3A4 活性无影响，对 CYP2D6 活性有抑制作用
〔3〕
，但
未对肝微粒体亚型 CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19 等酶活性进行
评价，可能还存在诱导或抑制作用，尚需进一步研究。本研究
进一步观察 ODV 对大鼠肝微粒体亚型 CYP1A2、CYP2C9 及
CYP2C19 活性的诱导和（或）抑制作用，旨在为临床安全联合
用药及相关实验研究提供参考。
1 材料与方法
1. 1 动物 健康Wistar 大鼠〔购自长春高新医学动物实验研
究中心，合格证号：SCXK-（吉）2003-0004）〕，体重200 ～ 250 g。
1. 2 主要试剂与仪器 O-去甲基文拉法辛琥珀酸盐水合物原
料药（含量＞ 98%，吉林省药物研究所）；非那西丁、对乙酰氨基
酚、甲苯磺丁脲、4'-羟基甲苯磺丁脲、美芬妥英、4'-羟基美芬妥
英（Sigma 公司）；Unico uv-2100 紫外分光光度计〔尤尼柯（上
海）仪器有限公司〕；Agilent 1100 高效液相色谱系统（美国Agi-
lent 公司）；QTRAP 型三重四极杆串联质谱仪（美国Applied Bi-
osystem 公司）。
1. 3 方法
1. 3. 1 给药方案 健康 Wistar 大鼠18 只，随机分成3 组，每
组6 只，雌雄各半。动物经禁食过夜，对照组灌胃给予生理盐
水，连续给药7 d；ODV 给药组，灌胃给予ODV （22. 90 mg / kg），
连续给药7 d；苯巴比妥诱导组，自 ODV 给药组给药至第5 天
开始腹腔注射苯巴比妥钠75 mg / kg，连续给药3 d。
1. 3. 2 肝微粒体的制备 在末次给药24 h 后，拉颈椎处死动
物，取出肝脏，立即置于冰冷的蔗糖溶液（0. 25 mol / L，pH7. 4）
中清洗，剪碎，清洗至无血色；取肝重2 g，加1 ml 蔗糖溶液，用
组织匀浆机在冰浴中制成匀浆；4℃下离心20 min，再取上清液
离心60 min，沉淀用Tris-HCl 缓冲液（0. 1 mmol / L，pH7. 4）悬浮
均匀，－ 80℃保存。
1. 3. 3 Lowry 法检测蛋白浓度 依据Lowry 等
〔4〕
方法，取牛血
清白蛋白配制标准溶液，测定750 nm 吸收度，以蛋白浓度 C 对
吸收度A 进行线性回归得标准曲线。用0. 5 mol / L NaOH 将肝
微粒体样品稀释适当倍数后同法操作，依据标准曲线计算蛋白
浓度。
1. 3. 4 CYP1A2 活性测定 选择非那西丁作为 CYP1A2 的特
异性底物
〔5〕
，建立定量测定非那西丁代谢物对乙酰氨基酚的
HPLC-MS/ MS 分析方法。参照文献方法
〔6〕
，建立孵育体系，孵
化10 min，取样100 μl，加入到200 μl 冰冷的甲醇中终止反应。
500 μl 的 Tris-HCl 缓冲液（pH7. 4）孵育体系中含 NADPH
1. 0 mmol / L、KCl 10. 0 mmol / L、MgCl2 10. 0 mmol / L、大鼠肝微
粒体蛋白1. 0 mg / ml、非那西丁10. 0 μmol / L，孵育体系中有机
溶剂的终浓度约为0. 01%。样品经处理后，高效液相色谱串联
质谱法（样品处理过程及色谱、质谱条件略）测定样品中对乙酰
氨基酚的含量。
1. 3. 5 CYP2C9 活性测定 选择甲苯磺丁脲作为 CYP2C9 的
特异性底物
〔7 〕
，建立定量测定甲苯磺丁脲代谢物4'-羟基甲苯
磺丁脲的HPLC-MS/ MS 分析方法。孵化体系、反应时间及反应
终止同1. 3. 4，甲苯磺丁脲浓度为30. 0 μmol / L，孵化体系中有
机溶剂的终浓度约为0. 06%。样品经处理后，高效液相色谱串
联质谱法（样品处理过程及色谱、质谱条件略）测定样品中4'-
羟基甲苯磺丁脲的含量。
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