高迁移率族蛋白B1对人牙髓细胞迁移能力和增殖效应的影响

基础研究··

高迁移率族蛋白Ｂ１对人牙髓细胞

迁移能力和增殖效应的影响*

祁胜财１，崔春１，颜燕宏２，朱声荣１**

（１．华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心湖北

２．武汉大学口腔医学院附属口腔医院

湖北武汉

武汉

４３００３０；

４３００７９）

［摘要］目的：观察高迁移率族蛋白Ｂ１（ＨＭＧＢ１）在人牙髓细胞（Ｈｕｍａｎｄｅｎｔａｌｐｕｌｐｃｅｌｌｓ，ｈＤＰＣｓ）中的表达，以及对ｈＤＰＣｓ增殖和迁移能力的影响。方法：采用组织块培养法，培养原代ｈＤＰＣｓ，取第３～６代细胞用于实验。免疫荧光检测ＨＭＧＢ１在ｈＤＰＣｓ中的表达及定位；分别用含不同质量浓度（０．１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ）ＨＭＧＢ１的培养液培养ｈＤＰＣｓ，５天后采用ＣＣＫ－８法检测细胞增殖能力；细胞划痕实验法观察１ｎｇ／ｍＬ质量浓度ＨＭＧＢ１对ｈＤＰＣｓ迁移能力的影响。结果：ＨＭＧＢ１表达在ｈＤＰＣｓ胞核；低浓度ＨＭＧＢ１（０．１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ）明显促进细胞增殖；１ｎｇ／ｍＬＨＭＧＢ１明显促进ｈＤＰＣｓ迁移能力。结论：ＨＭＧＢ１表达在正常ｈＤＰＣｓ胞核中，细胞外低浓度ＨＭＧＢ１可以促进细胞增殖和迁移。

［关键词］牙髓细胞；高迁移率族蛋白Ｂ１；增殖；迁移［中图分类号］Ｑ８１３．１

［文献标识码］Ａ

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００３－１６３４．２０１３．０２．００２

ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＨＭＧＢ１ｏｎｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｄｅｎｔａｌｐｕｌｐｃｅｌｌｓ．ＱＩＳｈｅｎｇ－ｃａｉ１，ＣＵＩ

Ｃｈｕｎ１，ＹＡＮＹａｎ－ｈｏｎｇ２，ＺＨＵＳｈｅｎｇ－ｒｏｎｇ１．１．ＣｅｎｔｅｒｏｆＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉ－ｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｕｂｅｉＷｕｈａｎ４３００３０，Ｃｈｉｎａ；２．ＴｈｅＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙＢｒｅｅｄｉｎｇＢａｓｅｏｆＢａｓｉｃＳｃｉ－ｅｎｃｅｏｆＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ＆ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＯｒａｌＢｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｓｃｈｏｏｌ＆ＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，ＷｕｈａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＨｕｂｅｉＷｕｈａｎ４３００７９，Ｃｈｉｎａ．

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｉｇｈ－ｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ１（ＨＭＧＢ１）ｉｎｈｕｍａｎｄｅｎｔａｌｐｕｌｐｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＨＭＧＢ１ｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｄｅｎｔａｌｐｕｌｐｃｅｌｌｓ（ｈＤＰＣｓ）．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｎｉｍ－ｍｕｎｏｆｌｕｒｅｓｃｅｎｃｅｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１ｉｎｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｈＤＰＣｓ．ＴｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈＤＰＣｓｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄｕｓｉｎｇＣＣＫ８ａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｉｎｇｐｒｉｍａｒｙｈＤＰＣｓｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆＨＭＧＢ１ｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓ（０．１ｎｇ／ｍＬ，１ｎｇ／ｍＬ，１０ｎｇ／ｍＬ，５０ｎｇ／ｍＬ，１００ｎｇ／ｍＬ，５００ｎｇ／ｍＬ，１０００ｎｇ／ｍＬ）ｆｏｒ５ｄａｙｓ．ＴｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｈＤＰＣｓｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｕｓｉｎｇＳｃｒａｔｃｈＴｅｓｔａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｉｎｇｈＤＰＣｓｉｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ１ｎｇ／ｍＬＨＭＧＢ１ｆｏｒ２４ｈ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＨＭＧＢ１ｗａｓｆｏｕｎｄｐｒｅ－ｓｅｎｔｉｎｎｕｃｌｅｕｓｏｆｐｒｉｍａｒｙｈＤＰＣｓ．ＥｘｏｇｅｎｏｕｓＨＭＧＢ１ｐｒｏｍｏｔｅｄｔｈｅｈＤＰＣｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｔｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ０．１ｎｇ／ｍＬ，１ｎｇ／ｍＬ，１０ｎｇ／ｍＬ，５０ｎｇ／ｍＬ，１００ｎｇ／ｍＬａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｒｏｍｏｔｅｄｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎａｔｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ１ｎｇ／ｍＬ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＨＭＧＢ１ｗａｓｐｒｅｓｅｎｔｉｎｎｕｃｌｅｕｓｏｆｈＤＰＣｓａｎｄｅｘｏｇｅｎｏｕｓｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＨＭＧＢ１ｐｒｏｍｏｔｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｈＤＰＣｓ．

［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ｄｅｎｔａｌｐｕｌｐｃｅｌｌ；ＨＭＧＢ１；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｍｉｇｒａｔｉｏｎ

修复性牙本质的形成与牙本质牙髓复合体损伤修复功

能密切相关。人牙髓细胞（Ｈｕｍａｎｄｅｎｔａｌｐｕｉｐｃｅｌｌｓ，ｈＤＰＣｓ）在牙髓损伤时可被诱导分化为成牙本质细胞[１]。这个过程涉及到牙髓细胞的增殖、迁移和分化[２]，但其机制仍不清楚。高迁移率族蛋白Ｂ１（ＨＭＧＢ１）是一种ＤＮＡ结合蛋白，调节真核细胞转录和ＤＮＡ的结构[３]。ＨＭＧＢ１可以发挥多种生物学性能，除了在核内的作用外，还可以作为细胞外信号分子调节炎症和组织再生[５]。最近的研究表明ＨＭＧＢ１与牙齿的发育密切相关[４]；可以促进细胞迁移和细胞增殖[６～８]。本研究通过人工合成的

*基金项目：湖北省自然科学基金资助（２０１０ＣＢＤ０９５０２）**通讯作者：朱声荣：Ｔｅｌ：０２７－８３６６３３２８

Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｕｓｈｅｎｇｒｏｎｇ＠１６３．ｃｏｍ

ＨＭＧＢ１蛋白作为细胞外分子作用于ｈＤＰＣｓ，检测ＨＭＧＢ１对ｈＤＰＣｓ增殖和迁移的影响，初步探讨ＨＭＧＢ１对牙本质牙髓复合体再生修复能力的影响并提供理论依据。

材料和方法

１

主要试剂与仪器：

ＤＭＥＭ培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、胰蛋白酶（Ｓｉｇｍａ，美国）、胎牛血清Ｇｉｂｃｏ公司，美国）、青链霉素（Ｓｉｇｍａ，美国）、多聚甲醛（Ｓｉｇｍａ，（

美国）、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ（Ｓｉｇｍａ，美国）、牛血清白蛋白（Ｓｉｇｍａ，美国）、兔抗人ＨＭＧＢ１抗体（Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ，美国）、鼠抗兔抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，美国）、ＣＣＫ－８（日本同仁，日本）、基因重组人ＨＭＧＢ１蛋白（北京义

翘神州生物技术有限公司）、细胞培养箱（ＮＡＰＣＯ，美国）、超净工Ｈｅｒａｅｕｓ，德国）、荧光显微镜（ＬＥＩＣＡ，德国）、酶标仪（Ｂｉｏｒａｄ作台（Ｍｏｄｌｅ５５０，美国）。

２

组织块法体外培养ｈＤＰＣｓ

收集１３－２２岁患者因正畸而拔除的健康、完整、新鲜的前磨牙。以含有２００Ｕ／ｍＬ青链霉素双抗的ＰＢＳ清洗牙齿３次后，在无菌条件下劈开牙冠。超净台中取出牙髓，去根尖部，４℃ＰＢＳ反复冲洗后，将牙髓组织剪成约１ｍｍ×１ｍｍ×１ｍｍ大小，然后移至２５ｃｍ２细胞培养瓶内，倒置于３７℃、５％ＣＯ２培养箱中培养，待组织块贴壁后，翻转培养瓶，３ｄ换液１次，待细胞长满瓶增殖效果最明显（Ｐ＜０．０１）。这提示ＨＭＧＢ１在低浓度时（０．１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬ）可促进ｈＤＰＣｓ细胞增殖，并呈剂量依赖性。而高浓度组（５００～１０００ｎｇ／ｍＬ）时，ＨＭＧＢ１处理组ｈＤＰＣｓ的ＯＤ值明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），提示高浓度ＨＭＧＢ１可抑制ｈＤＰＣｓ细胞的增殖（图２）。

３

ＨＭＧＢ１对ｈＤＰＣｓ迁移能力的影响

细胞划痕实验结果示：对照组（０ｎｇ／ｍＬ）ｈＤＰＣｓ在划痕２４ｈ后有愈合趋势，划痕宽度缩小，但划痕仍很明显；与之比较，实验组（１ｎｇ／ｍＬ）ｈＤＰＣｓ在划痕２４ｈ后趋于愈合，细胞汇合，划痕消失。这提示ＨＭＧＢ１与ｈＤＰＣｓ的迁移有关，低浓度ＨＭＧＢ１可底８０％以上，０．２５％胰蛋白酶消化，按１：３比例传代。

３

免疫荧光

将第３代生长状态良好的ｈＤＰＣｓ按浓度２×１０４／ｍＬ接种于盖有细胞爬片的２４孔板中，培养过夜，用ＰＢＳ冲洗，４％多聚甲醛室温固定１５ｍｉｎ，然后用ＰＢＳ清洗３遍，０．２％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ室温处理１０ｍｉｎ；ＰＢＳ洗３遍后再用５％牛血清白蛋白室温封闭非特异性结合位点，然后加入１：３００兔抗人ＨＭＧＢ１于４℃孵育过夜，ＰＢＳ洗３遍后用羊抗兔荧光二抗室温孵育１ｈ；ＰＢＳ洗３遍后Ｃｅｌｌｓｔａｉｎ－Ｈｏｅｃｈｓｔ染核１０ｍｉｎ；加入抗淬灭剂后封片，在免疫荧光显微镜下观察并照相，整个过程在避光下完成。

４

细胞增殖实验

将第４代生长状态良好的ｈＤＰＣｓ按浓度５×１０４／ｍＬ接种于９６孔板中，每孔加入１００μＬ。细胞在１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养液中孵育过夜，在倒置显微镜下观察，镜下见大多数ｈＤＰＣｓ贴壁并伸展后，弃去孔内液体及未贴壁细胞，用ＰＢＳ冲洗３次后，分别加入１００μＬ含有不同浓度ＨＭＧＢ１蛋白（０ｎｇ／ｍＬ、０．１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ）的１％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养液，每组５个复孔，检测第５天的ＯＤ值：每孔加入１０μＬＣＣＫ８，３７℃培养箱继续孵育２ｈ后，在酶标仪上检测４５０ｎｍ波长下的各孔吸光度ＯＤ值）。

５

细胞划痕实验

取第４代对数生长期的ｈＤＰＣｓ，按浓度２×１０５／ｍＬ接种于６孔板中，每孔２ｍＬ。１０％ＦＢＳ培养，过夜后细胞可基本铺满６孔板，用２００μＬ枪头垂直于培养板底划痕；ＰＢＳ清洗３次，去除悬浮细胞，每孔加入终浓度为１ｎｇ／ｍＬＨＭＧＢ１的无血清培养基１ｍＬ，设空白对照，每组３个复孔。在显微镜下观察划痕宽度变化，并于划痕后０ｈ、２４ｈ在倒置显微镜下观察并拍照。

６

统计学分析

运用ＳＰＳＳ１１．０软件进行统计分析。细胞增殖结果用表示，两组间比较用ｔ检验。Ｐ＜０．０５时差异有统计学意义。

结

果

１

ＨＭＧＢ１在ｈＤＰＣｓ中的表达

免疫荧光结果可见ＨＭＧＢ１在ｈＤＰＣｓ中表达，且仅表达在ｈＤＰＣｓ的细胞核中，而在细胞质中不表达（图１）。

２

ＨＭＧＢ１对ｈＤＰＣｓ的增殖作用

第５天时，低浓度ＨＭＧＢ１处理组ｈＤＰＣｓ的ＯＤ值明显高于对照组ｈＤＰＣｓ（Ｐ＜０．０５），尤其当ＨＭＧＢ１浓度为５０ｎｇ／ｍＬ时，

明显促进ｈＤＰＣｓ迁移（图３

）。

Ａ：ＴＲＩＴＣ标记的ＨＭＧＢ１免疫荧光；Ｂ：Ｈｏｅｃｈｓｔ染核；Ｃ：Ａ和Ｂ重叠。

图１ＨＭＧＢ１在ｈＤＰＣｓ中表达情况（２００×

）

与对照组比较：* Ｐ＜０．０５；** Ｐ＜０．０１。图２ＨＭＧＢ１对ｈＤＰＣｓ增殖的

影响

图３ＨＭＧＢ１对ｈＤＰＣｓ划痕愈合的影响

讨论

ｈＤＰＣｓ已被证实具有多分化潜能，其作为一种成

体干细胞的来源，研究不涉及胚胎伦理及取材限制，可取自患者，经诱导分化后，移植回患者体内，不存在排斥问题[９]，是组织工程领域中的理想种子细胞[１０]。在口腔医学的临床工作中，因机械、外伤、龋病或医源性等因素造成意外露髓、牙髓感染坏死等发生率较高，而常规盖髓术不能达到牙本质牙髓复合体的良好生物学修

（

复[１１]。因此，如何诱导ｈＤＰＣｓ增殖、分化和迁移，引导牙本质牙髓复合体自身修复成为国内外学者研究的热点。文献报道了某些生长因子、信号分子以及转录因子参与了牙髓细胞的增殖和分化，如骨形态发生蛋白２[１２]，白血病抑制因子[１３]和牙本质涎蛋白[１４]等。

ＨＭＧＢ１在多种细胞的细胞核中表达，最初认为其主要功能是维持核小体结构以及调节基因转录。有研究表明，ＨＭＧＢ１作为晚期炎症因子被细胞主动或被动释放，通过与免疫细胞表面Ｔｏｌｌ样受体（ＴＬＲ）结合激活在培养２４ｈ后划痕仍存在。研究证实ＨＭＧＢ１具有促进肿瘤细胞迁移的能力[７]；也有研究表明ＨＭＧＢ１也可以促进皮肤伤口愈合，且该作用是基于ＨＭＧＢ１促进３Ｔ３成纤维细胞增殖和迁移，其机制则是通过ＨＭＧＢ１－ＲＡＧＥ结合，激活ＥＲＫ１／２信号通路[１９]。本研究显示，ＨＭＧＢ１可以促进ｈＤＰＣｓ细胞的迁移，其具体信号通路尚需进一步研究。

综上所述，本研究检测了ＨＭＧＢ１在ｈＤＰＣｓ中的表达情况以及其在ｈＤＰＣｓ增殖和迁移过程中的作用，相应的信号转导，激活ＮＦ－κＢ信号通路，影响多种炎性细胞因子的表达[１３]。巨噬细胞在ＬＰＳ刺激下可以主动分泌ＨＭＧＢ１至细胞外，激活ＮＦ－κＢ信号通路[１５，１６]。ＨＭＧＢ１可以促进恶性肿瘤的淋巴转移，具有促进细胞迁移的作用[１７]。ＨＭＧＢ１与肿瘤及组织再生有关，处于发育阶段的神经细胞及肌细胞中ＨＭＧＢ１高表达，提示ＨＭＧＢ１可能与这些细胞的增殖相关。Ｙａｍａｍｕｒａ等证实ＨＭＧＢ１样蛋白可以促进体外成骨细胞的增殖[６]；同时还发现ＨＭＧＢ１可以促进心肌细胞和３Ｔ３鼠成纤维细胞的增殖[１８～２０]。因此，我们推测ＨＭＧＢ１可以通过促进ｈＤＰＣｓ增殖和迁移，达到促进ｈＤＰＣｓ损伤修复。

本实验结果表明，ＨＭＧＢ１在ｈＤＰＣｓ细胞核中表达，这也提示高迁移率族蛋白Ｂ１（ＨＭＧＢ１）是一种ＤＮＡ结合蛋白，维持ＤＮＡ的结构及调节基因转录[３]。这也与Ｓｕｇａｒ等的研究结果相一致，他们认为ＨＭＧＢ１与鼠牙齿发育关系紧密，且通过对新生大鼠发育中的牙齿行免疫组化，发现ＨＭＧＢ１主要表达在鼠牙髓细胞的细胞核[４]。

我们初步探究了ＨＭＧＢ１对ｈＤＰＣｓ增殖的影响。在实验中，我们发现低浓度（０．１～１００ｎｇ／ｍＬ）组ＨＭＧＢ１可以明显促进ｈＤＰＣｓ增殖（Ｐ＜０．０５），尤其在５０ｎｇ／ｍＬ时，增殖效应最为明显（Ｐ＜０．０１）。而高浓度５００～１０００ｎｇ／ｍＬ）组ＨＭＧＢ１却抑制ｈＤＰＣｓ增殖（Ｐ＜０．０５）。低浓度ＨＭＧＢ１对ｈＤＰＣｓ的增殖效应与对心肌细胞、骨骼肌细胞和成纤维细胞结果相同[１８，１９，２１]，这可能是低浓度时，ＨＭＧＢ１－ＲＡＧＥ结合，激活ＥＲＫ１／２信号通路，介导ｈＤＰＣｓ的增殖效应[１９]。而高浓度ＨＭＧＢ１可能因为浓度太高，介导了ｈＤＰＣｓ细胞毒性反应或炎性反应[３]。目前，ＨＭＧＢ１对ｈＤＰＣｓ增殖影响的作用机理需要进一步研究。

在划痕试验中，为了降低细胞本身增殖产生的对划痕实验的负作用，选用了无血清的培养基来培养ｈＤＰＣｓ。同时为了将ＨＭＧＢ１的增殖效应降到最低，我们选用了增殖效应不明显的１ｎｇ／ｍＬＨＭＧＢ１组作为实验组，０ｎｇ／ｍＬＨＭＧＢ１组作为对照组。划痕实验结果显示：实验组在培养２４ｈ后划痕消失，且细胞汇合，而对照组

揭示了低浓度ＨＭＧＢ１促进ｈＤＰＣｓ增殖和迁移，为其在牙本质牙髓复合体再生修复中发挥作用提供了实验依据。

［参考文

献］

［１］

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（

不同愈合时间下挤压植入种植体对Ｂｅａｇｌｅ

犬骨界面改建的组织形态学测定*

武秀萍，李冰**，冯云霞

（山西医科大学口腔医院山西太原

０３０００１）

［摘要］目的：研究不同愈合时间下挤压植入微种植体对其周围骨界面改建的影响。方法：采用自身对照原则，将３６枚微种植体植入６只成年Ｂｅａｇｌｅ犬上颌后牙区。左右各植入３枚种植体，一侧为实验组以骨挤压植入，对侧为对照组。每侧随机分配植入不同愈合时间（２周，４周和８周）的种植体，取带有种植体骨标本制备不脱钙的超硬组织切片，采用组织形态学定量测定的方法，对钛种植体骨界面改建过程进行动态观察，从定量的角度分析其变化的差异。结果：实验组与对照组种植体骨接触率均随愈合时间的延长而增加。实验组愈合２周，４周时种植体骨接触率明显高于对照组，８周时趋于一致。实验２周组与８周组种植体骨接触率表现出显著性差异，对照２周组与４周组存在显著性差异。结论：愈合早期骨挤压可以提高种植体骨整合率，提示需要早期加载的微种植体以骨挤压术式植入可提高种植体稳定性。

［关键词］骨挤压；微种植体骨界面；愈合时间；组织形态学［中图分类号］Ｒ７８３．５

［文献标识码］Ａ

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００３－１６３４．２０１３．０２．００３

Ｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙｏｆｉｍｐｌａｎｔ－ｂｏｎｅｉｎｔｅｒｆａｃｅｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇａｆｔｅｒｍｉｃｒｏｓｃｒｅｗｃｏｍｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｏｍａｘｉｌｌａｒｙｐｏｓｔｅｒｉ－ｏｒｒｅｇｉｏｎｏｆＢｅａｇｌｅｄｏｇｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｅａｌｉｎｇｔｉｍｅ．

ＷＵＸｉｕ－ｐｉｎｇ，ＬＩＢｉｎｇ，ＦＥＮＧＹｕｎ－ｘｉａ．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，

ＴｈｅＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＳｈａｎｘｉＴａｉｙｕａｎ０３０００１，Ｃｈｉｎａ．

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｉｍｐｌａｎｔ－ｂｏｎｅｉｎｔｅｒｆａｃｅｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ．ｗｉｔｈｃｏｍｐｒｅｓｓｅｄｉｍｐｌａｎｔｉｎｇＭｅｔｈｏｄ：Ｔｈｉｒｔｙ－ｔｈｒｅｅｐｕｒｅｔｉｔａｎｉｕｍｍｉｃｒｏｓｒｅｗｓｗｅｒｅｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｂｕｃｃａｌｉｎｔｅｒｒａｄｉｃｕｌａｒｓｐａｃｅｓｏｆｔｈｅｓｉｘｍａｌｅｂｅａｇｌｅｓ＇ｍａｘｉｌｌａｒｙｂｏｎｅ．Ｏｎｅｓｉｄｅｗａｓｃｈｏｓｅｎｒａｎｄｏｍｌｙａｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｏｔｈｅｒａｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｍｉｃｒｏｓｃｒｅｗｏｆｅｘ－ｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｃｏｍｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｏｔｈｅｍａｘｉｌｌａｒｙｂｏｎｅ．Ｔｈｒｅｅｍｉｃｒｏｓｃｒｅｗｓｗｅｒｅｉｍｐｌａｎｔｅｄｏｎｅａｆｔｅｒｔｈｅｏｔｈｅｒｏｎｅａｃｈｓｉｄｅａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｉｔｅｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｅａｌｉｎｇｔｉｍｅ（２ｗ，４ｗｏｒ８ｗ）．Ａｌｌｔｈｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓｉｄｅｓａｎｄｓｉｔｅｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙａｓ－ｓｉｇｎｅｄ．Ｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｓｅａｎｄｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｏｆｉｍｐｌａｎｔ－ｂｏｎｅｉｎｔｅｒｆａｃｅａｓｗｅｌｌａｓｅｖａｌｕａｔｉｏｎｆｒｏｍｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎｄｄｙｎａｍｉｃａｓｐｅｃｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｈａｄＢＩＣｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅＤｇｒｏｕｐａｔ２ｗａｎｄ４ｗ（Ｐ＜０．０５）ｗｈｉｌｅｎｏｔａｔｔｈｅ８ｗ（Ｐ＞０．０５）．ＴｈｅＢＩＣｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｓｈｏｗｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎ２ｗａｎｄ８ｗ（Ｐ＜０．０５）；Ｈｏｗｅｖｅｒ，Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ８ｗｇｒｏｕｐ，ｔｈｅＢＩＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｈｅｔｈｅｒｉｎ２ｗｏｒ４ｗｇｒｏｕｐｓｈｏｗｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｂｏｎｅｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇｐｒｏｖｉｄｅｓｔｈｅｍｉｃｒｏｓｃｒｅｗｗｉｔｈｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｓｔｒｏｎｇｅｒｓｔａｂｉｌｉｔｙｉｎｔｈｅｅａｒｌｙｐｏｓｔ－ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｐｈａｓｅ．Ｔｈｕｓ，ｗｅｒｅｃｏｍｍｅｎｄｔｈａｔｔｈｅｍｉｃｒｏｓｃｒｅｗｂｅｉｎｓｅｒｔｅｄｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓａｋｅｏｆｅａｒｌｙｌｏａｄｉｎｇ．

［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ｂｏｎｅｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ；ｉｍｐｌａｎｔ－ｂｏｎｅｉｎｔｅｒｆａｃｅ；ｈｅａｌｉｎｇｔｉｍｅ；ｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙ

*基金项目：山西省科学技术厅科技攻关项目（２０１００３２１１０４）

太原市科技局项目（１２０１６９１０）

**通讯作者：李冰：Ｔｅｌ：１５００３５１１６６６

Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｂｉｎｇ－１９７５＠１６３．ｃｏｍ

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ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＪＤｅｎｔＲｅｓ，２０１２，９１（４）：４０７－７１２．

［１５］ＫａｗａｈａｒａＫ．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨＭＧＢ１ｒｅｌｅａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｆｒｏｍＲＡＷ－

［Ｊ］．ＩｎｔＪ２６４．７ｃｅｌｌｓｂｙｏｌｅａｎｏｌｉｃａｃｉｄｉｎＰｒｕｎｕｓｍｕｍｅＳｉｅｂ．ｅｔＺｕｃｃ（５）：６１５－６２０．ＭｏｌＭｅｄ，２００９，２３

［１６］ＴｓａｏＰＮ．Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄＮｏｔｃｈｓｉｇｎａｌｉｎｇａｃｔｉｖａｔｉｏｎ

ｔｈｒｏｕｇｈＪＮＫ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙｒｅｇｕｌａｔｅｓｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．ＪＢｉｏｍｅｄＳｃｉ，２０１１，１８：５６．

［１７］ＳｐａｒａｔｏｒｅＢ．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＡ４３１ｈｕｍａｎｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｍｏｔｉｌｉｔｙｂｙ

ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｈｉｇｈ－ｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ１ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｅｐｉｄｅｒｍａｌ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＪ，２００５，３８９（１）：２１５－２２１．ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓｔｉｍｕｌｉ

１８］ＤｉｎｇＨＳ，ＪＹａｎｇ．Ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ－１ａｎｄｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓ－［

ｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＳａｕｄｉＭｅｄＪ．３１（５）：４８６－４８９．

［１９］ＲａｎｚａｔｏＥ．Ｈｍｇｂ１ｐｒｏｍｏｔｅｓｗｏｕｎｄｈｅａｌｉｎｇｏｆ３Ｔ３ｍｏｕｓｅｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ

Ｊ］．ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏ－ｖｉａＲＡＧＥ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＥＲＫ１／２ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［ｐｈｙｓ，２０１０，５７（１）：９－１７．

［２０］ＣｈａｒｏｏｎｐａｔｒａｐｏｎｇＫ．ＨＭＧＢ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｒｅｌｅａｓｅｂｙｂｏｎｅｃｅｌｌｓ

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［２１］ＤｅＭｏｒｉＲ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘｐｒｏｔｅｉｎ１ｉｎ

Ｊ］．ＡｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒＴｈｒｏｍｂＶａｓｃＢｉｏｌ，ｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［２００７，２７（１１）：２３７７－２３８３．

收稿日期：２０１２－１１－２０