多指标综合评分法优选西洋参提取工艺_雷晓林

StudyofHPLCChromatographicFingerprintofCitrusreticulataBlancocv1Dahongan

Xurunjuan1,Zhangfanghong2

(11JiangmenInstituteforDrugContro,lJiangmen529000;21GansuAcademyofMedicalSciences,Lanzhou730050)Abstract Objective:ToestablishHPLCchromatographicfingerprintofCitrusreticulataBlancocv1Dahongan1Methods:Theex-perimentalconditionoftheRP-HPLCmethodwasasfollows:AngilentZorbaxC18column(416mm@250mm,5Lm),withlineargra-dientelutionusing(A)methanoland(B)water;Theflowratewas110ml/min,andtheinjectedvolumewas20L,ldetectedwave-lengthwas283nm1Results:UnderthequalitativeconditionswedetermineddifferentsamplesofCitrusreticulataBlancocv1Dahon-gan,Therewere11commonpeaksinchromatographic1Conclusions:Accordingtoanalyzeandcontrasttherelativeretentionvaluesandrelativepeakareainchromatographicfingerprint,weestablishHPLCchromatographicfingerprintofCitrusreticulataBlancocv1Dahon-gantoprovideascientificbasementforthequalityevaluationofit.

Keywords CitrusreticulataBlancocv1Dahongan;ChromatographicFingerprint;HPLC;Qualityevaluation

多指标综合评分法优选西洋参提取工艺

雷晓林 束家有 招翠微

(11武汉大学药学院,武汉430072;21广州固志医药科技开发公司,广州510520)

摘要 目的:优选西洋参最佳提取工艺。方法:(1)采用正交试验法,以西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的总转移率及浸膏得率为指标,多指标综合评分,优选西洋参的乙醇提取工艺条件;(2)运用RP-HPLC梯度洗脱法同时测定西洋参中的人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。结果:西洋参乙醇提取的最佳条件为12倍量70%乙醇回流提取2次,每次提取3h。结论:该工艺可以有效提高西洋参的提取率。

关键词 西洋参;人参皂苷Rg1、Re、Rb1;正交试验:综合评分法;梯度洗脱

1

1

2

西洋参(PanaxquinquefoliumL1)为五加科植物西洋参的干燥根,人参皂苷是其主要活性成分之一,具有抗疲劳、耐缺氧、调节免疫、抗肿瘤等作用分

122

112

21111 色谱条件:色谱柱:Hypersi,lODS2(416@150mm,5Lm);流动相:乙腈-011%磷酸;梯度洗脱:0~25min,19%~20%乙腈;25~35min,20%~2517%乙腈;35~50min,2517%~36%乙腈,50~60min,36%~19%乙腈;流速111ml/min;检测波长203nm;柱温:室温;进样量:10Ll。理论塔板数不低于5000;分离度大于115。

21112 线性关系考察:精密称取干燥的人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品适量,置5ml容量瓶,加甲醇制成每1ml各含01108mg、01401mg、11014mg的溶液,作为对照品溶液。分别吸取该对照品溶液各215Ll、5L、l10L、l15L、l20L,l按上述色谱条件进行测定。以峰面积积分值为纵坐标,人参皂苷对照品进样量为横坐标,分别进行线性回归。结果:人参皂苷Rg1进样量在0127~2116Lg范围内线性关系良好,回归方程为:Y=1310861X+010750,r=019999;人参皂苷Re进样量在11003~81020mg范

围内线性关系良好,回归方程为:Y=10122438X+012585,r=019999;人参皂苷Rb1进样量在21535~201280Lg范围内线性关系良好,回归方程为:Y=

#599#

,

其中人参皂苷Rg1、Re、Rb1被视为西洋参的代表成

。为充分发挥以西洋参为君药的抑癌扶正颗粒的药效,进而将其开发为新药,本实验采用正交试验优选西洋参的乙醇提取工艺,以RP-HPLC梯度洗脱法同时测定西洋参中的人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量以及测定西洋参浸膏得率,综合评分优选出工艺条件。

1 材料、仪器与试药

111 材料 Dionex高效液相色谱仪,P680HPLCPump,ASI-100AutomatedSampleInjector,UVD170检测器,Chromeleon色谱工作站。

112 试剂 人参皂苷对照品Rg1、Re、Rb1(中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯:其他试剂均为分析纯;西洋参药材购于广州市药材公司,经鉴定为五加科植物PanaxquinquefoliumL12 方法和结果

211 人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定方法

年7月

711590X+013964,r=019999。

212 浸膏得率的测定 取西洋参提取液,置于干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干后,置烘箱内105e干燥至恒重,取出,置干燥器内冷却,迅速精密称定重量。

213 工艺优选 根据初步筛选的结果,按表1设定的因素水平进行正交试验,筛选最佳的工艺条件。

表2

因素

实验号

A

123456789K1K2K3R

1112223331651751681291581979132

B12312312316611517014915613714112

C1232313121571916317217113913149

D1233122311641131661271621613166

4

表1 因素水平表

因素

水平123

乙醇浓度(A)80%70%60%

提取时间(B)

2h3h4h

加醇量(C)8倍10倍12倍

提取次数(D)

234

L9(34)正交试验设计表及结果

评价指标

Rg1、Re、Rb1总转移率(X1/%)

80164

8611982141851049012279113861387918676175

2y1=493101CT=27006154

浸膏得率(X2%)综合评分

411404313043135451154513542125461354218541170

531645717454137551926014351194561595213250106

称取西洋参药材共9组,每组50g,按L9(3)正交表的条件提取,过滤,合并滤液,称重,分别测定提取液中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量,计算总皂苷提取率和浸膏得率,进行多指标综合评分。评分时以各指标的最大值为参照将数据进行归一化,再给出不同的权重。人参皂苷的权重系数设为018,在有效成分明显的前提下,浸膏得率越高则纯度越142

低,因此浸膏得率设为负权重系数-012。以综合值进行统计分析,结果见表2。其中综合评分Y=018X1@100/019022-012X2@100/014635。

直观分析表明,以综合评分为标准,在所选因素水平范围内,提取时间对西洋参的提取效果影响最大,提取浓度影响较小,而次数影响最小。经方差分析,各因素没有显著性,故以直观分析选取最佳提取条件为C3B2A2D2,即70%乙醇提取三次,每次12倍量提取3小时。由于提取次数影响甚小,故结合实际选取提取次数为2次,即第五组实验条件:70%乙醇12倍量,提取二次,每次提取3小时。

214 验证实验 根据正交实验结果筛选的工艺条件C3B2A2D1,进行三批验证实验,每批投料500g,加12倍70%乙醇,回流提取2次,每次3小时。人参皂苷总转移率为90119%;浸膏得率为41184%(n=3)。

#3 讨论

311 西洋参主要含有人参皂苷等有效成分,中国

药典2000版中西洋参是以Rb1的量来计算,不能很好的控制西洋参的质量,本实验同时测定人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量,则能更好的考察西洋参的质量。

312 由于西洋参有效成分明确,浸膏得率越高则纯度越低,因此本实验设为负权重系数;如果指标成分不明确,以浸出物多少来代表有效成分时,浸膏得率的权重系数应相应增大,并设为正权重系数,这样进行方差分析,优选出的工艺条件更加合理。313 我们曾对色谱柱、流动相及流速进行了筛选,结果表明:采用C18柱(416@150mm),以流动相乙腈-011%磷酸溶液,流速111ml/min,梯度洗脱较为理想,Rg1、Re、Rb1分离完全。

参

考

文

献

1 张春枝,等1人参皂苷生理活性的研究进展1食品与发

酵工业,2002,28(4)B70

2 张均田1人参皂苷Rg1和Rb1药理作用的比较1基础

医学与临床,2000,20(5)B4

3 陶菊春,等1综合加权评分法的综合权重确定新探1系

统工程理论与实践,2001,(8)B43

(2005-02-04收稿)

中药材第282005年7月

ApplyingGradingMethodsofSynthesizingMultipleGuidelinestoOptimizing

ExtractingTechnologyforRadixPanacisQuinquefolii

LeiXiaolin1ShuJiayou1ZhaoCuiwei2

(11WuhanUniversity,Wuhan,430072;21GuangzhouGuzhiPharmaceuticalScienceAndTechnologyCo,LTD,Guangzhou510520)

Abstract Objective:TooptimizethebestextractingprocedureforRadixPanacisQuinquefolii1Methods:(1)Theoptimumalco-holextractingprocedurewasselectedwiththecontentandextractionefficiencyofginsenosideRg1、Re、Rb1fromRadixPanacisQuin-quefoliibyorthogonaltestdesignandsynthesizingmultipleguidelinesmethod.(2)ThecontentofthreeginsenoidesRg1、ReandRb1inRadixPanacisQuinquefoliiwasdeterminedbygradientelutionmethodinRP-HPLC1Results:Theoptimumalcoho-lextractingproce-durewasdeterminedas12timesof70%alcoholrefluxingandextracting3hfor2times1Conclusions:Theoptimumextractingproce-durecanincreaseextractionefficiencyofRadixPanacisQuinquefolii1

Keywords RadixPanacisQuinquefoli;iGinsenosideRg1、Re、Rb1;Orthogonaltestdesign;Gradingmethods;Gradientelution

高效液相色谱法测定苦参素胶囊中氧化苦参碱及有关物质的含量

邱文炜 简淑娟 龚惠伉

(广东省惠州市药品检验所,广东惠州516008)

摘要 目的:测定苦参素胶囊中氧化苦参碱的含量与氧化槐果碱等有关物质的量。方法:采用HPLC法,色谱柱为C18柱,流动相为磷酸盐缓冲液-甲醇(85B15),检测波长为210nm。结果:氧化苦参碱线性范围为61952~201856Lg/ml(r=019999),氧化槐果碱线性范围为011837~015510Lg/ml(r=019997)。结论:所用方法简便、快速、准确、专属性好。

关键词 高效液相色谱法;苦参素胶囊;氧化苦参碱

苦参素胶囊具有显著抑制乙型肝炎病毒DNA复制的作用,目前临床上多用于治疗慢性乙型肝炎等疾病,其主要成分为氧化苦参碱及极少量的氧化槐果碱。苦参素胶囊试行质量标准中有关物质检查方法为薄层色谱法,含量测定的方法为高效液相色谱法

112

含量测定用);苦参素胶囊(宁夏某制药企业,批号:20030501,20030702,20030712,规格:011g)。甲醇(色谱纯,美国TEDIA公司);其他试剂均为分析纯。2 方法与结果

211 色谱条件 流动相:磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾1136g,加水适量溶解后,加三乙胺1m,l加水至1000m,l用磷酸调节pH值至315?012)-甲醇(85B15);色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,迪马Diamonsil柱(416mm@250mm,5Lm);检测波长:210nm;柱温:室温;进样量:20L。l212 方法专属性 取氧化苦参碱与氧化槐果碱适量,置同一量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,按上述色谱条件,进样20L,l记录色谱图,结果氧化苦参碱峰与氧化槐果碱峰之间的分离度大于115。213 最低检测限 分别精密称取氧化苦参碱与氧化槐果碱对照品适量,加流动相溶解并稀释制成氧化苦参碱(浓度为011042Lg/ml)与氧化槐果碱(浓度为0105512Lg/ml)的溶液,进样20Ll测定,确定最低检测限(S/N>3),结果氧化苦参碱最低检测限为211ng,氧化槐果碱最低检测限为111ng。

#601#

,此标准中薄层色谱斑点很不明显,检测限

较高,且含量测定方法中采用氨基柱,流动相为乙腈-磷酸水溶液(pH210)-无水乙醇,此色谱条件在柱子选择上具有很大的局限性,且流动相条件会大

大减少柱子的使用寿命。本文选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,同时测定苦参素胶囊氧化苦参碱的含量及有关物质,方法简便准确,通用性强。

1 仪器与试药

美国SSIPC2002型HPLC仪(Model525型检测器;SeriesÒ、Ó型输液泵;ANASTAR工作站);梅特勒AE-240电子天平。

氧化苦参碱对照品(中国药品生物检定所,批号:0780-200004,供含量测定用);氧化槐果碱对照品(中国药品生物检定所,批号:111652-200301,供

年7月