鱼卵中脂肪酸的毛细管气相色谱法研究

第&(卷第!期

!""#年&&月水产学杂志,:;<=5=>9?4</@9..;5:=4;=5ABCD&(，<BD!<BED!""#!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!文章编号：&"")$#*#!（!""#）"!$""#)$")

鱼卵中脂肪酸的毛细管气相色谱法研究

刘永&，宋金凤!，曹维强#，卢玲&

（&+中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江哈尔滨&)""’(；

!+东北林业大学，黑龙江哈尔滨&)""’(；#+东北农业大学，黑龙江哈尔滨&)""’(）

摘要：本文建立了一种鱼卵中脂肪酸测定的方法，该方法采用,-法提取脂肪，室温下

以氢氧化钠—甲醇酯交换法进行酯化，以../0毛细管气相色谱法进行检测，并对鱼卵

中的主要脂肪酸进行了鉴定，该方法各脂肪酸的平均回收率为%"+’*1&"!+2)3，456为

"+"2#%1"+"((&，最小检出限为"+!2*1"+’()787，结果表明各项指标均满足分析要求，!

具有简单、快速、准确的特点。对色谱条件进行适当优化，可用来分析各种动物性脂肪

酸。

关键词：脂肪酸；鱼卵；酯化；气相色谱法

中图分类号：9()’文献标识码：/

脂肪酸是构成脂肪的主要成分，是对生物体提供热量的重要物质。近年来，由于鱼

［&1#］体脂肪酸（鱼油）的营养特性及其对人体具有特殊功效，越来越受到人们的重视，

［2］而鱼卵中脂肪含量大于鱼肌肉中脂肪含量，营养价值较高，因而对其进行快速准确地

分析就显得尤为重要。传统的鱼卵中脂肪酸测定大多利用测定粗脂肪后的废液进行衍生化，即采用先将鱼卵烘干后，用无水乙醚或石油醚进行索氏提取，而提取液的回收和蒸发往往造成低分子脂肪酸的损失，而且由于提取时间较长，易造成不饱和酸的氧［)1(］化；脂肪酸测定的国标法为填充柱气相色谱法，而填充柱气相色谱经常会出现试样

［’］中不同脂肪酸甲酯具有非常相近保留时间的现象，从而容易引起定性判断错误，特别

是碳原子数相同而双键数量不同的分子量非常接近的脂肪酸更加如此。本研究采用氯仿$甲醇改良法（,-法）进行脂肪提取，用氢氧化钠—甲醇酯交换法在室温下甲酯［*1%］化，用毛细管气相色谱法分析其脂肪酸甲酯，同时采用外标法进行定量分析。&

&+&材料方法实验样品

鱼卵：!""!年&!月&)日采自黑龙江水产研究所渤海试验站，为健康成熟虹鳟亲鱼的第"期卵。

&+!试剂

甲醇、氯仿、氢氧化钾、石油醚、无水硫酸钠均为分析纯；棕榈酸（,&(：、硬脂"）

收稿日期：!""#$"%$&"

作者简介：刘永（，男，山东莱克人，助理研究员，主要从事渔业环境及水产品安全研究。&%’($）　

水产学杂志第"4卷?&4?

!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!酸（!"#：、油酸（!"#：、亚油酸（!"#：、亚麻酸（!"#：、花生酸（!%$：、’()$）"）%）&）$）（!%$：）的甲酯混合标样购自+,-./公司。*）

"0&!1法脂肪的提取

称取*2"$-样品，加入适量水调节样品含水量约达#$3，加入4份甲醇（如样品为*-，则加入&$.5甲醇，以下同），%份氯仿，在电动组织匀浆机中快速匀浆%.,6，然后加入7份氯仿继续匀浆".,6，最后加入&份蒸馏水，再匀浆".,6。将全部提取液通过布氏漏斗过滤入%$$.5具塞量筒内。从滤纸上取下残渣，加入4份氯仿，在电动组织匀浆机中匀浆".,6，此提取液滤入同一量筒内，最后再用少量氯仿冲洗残渣一次，混匀量筒内的提取液，静置分层，从量筒刻度读出下层氯仿体积（.5），移去上层液，将下层氯仿通过无水硫酸钠小柱（无水硫酸钠层约"8.厚）过滤于干燥洁净的具塞三角瓶内。然后取适量的氯仿提取液，在4$29$:水浴上，同时通入氮气使溶剂挥干（或将氯仿提取液用旋转蒸发器浓缩处理）。

"07甲酯化处理

精确称取&$2"$$.-（约%24滴）油脂，置入"$.5刻度试管内，加入"0$.5石油醚和苯的混合溶剂（";"），使油脂溶解，加入"0*.5$07.<5=>氢氧化钠—甲醇溶液，混匀后静置*2"$.,6后，加蒸馏水使全部石油醚苯的甲酯溶液升至瓶颈上部，静止分层后读出上层清液的体积（如上层清液浑浊，可滴入数滴无水乙醇）。吸取上层清液，使其通过无水硫酸钠小柱于进样瓶中。

"0*色谱条件

分析仪器：)-,5?6@4#A$B型气相色谱仪（带CDE检测器）

色谱柱：&$.F$0%*..F$0*&http://wendang.chazidian.com)(弹性石英毛细管柱!

载气：B%柱流速：%0*.5=.,6

进样口温度：%&$:

检测器温度：%9$:

"04定性及定量方法

脂肪酸定性分析采取比较未知峰与在相同条件下测得标准物质保留时间的方法，无标样峰采用保留时间的对数—碳原子图法定性；脂肪酸定量通过外标法处理，但对豆蔻（!"7：、棕榈油酸（!"4：$）"）的色谱峰定量，以测得的棕榈酸（!"4：$）为内标峰，用内标法定量。外标法所得数据用+(++数据处理软件进行统计处理。G%：空气H7$.5：7*$.5程序升温："%$:保持&.,6，"$:=.,6，终温%$$:，保持%*.,6分流比：%$;"尾吹：*$.5=.,6

%

%0"结果与讨论脂肪酸定性

取+,-./脂肪酸混合标样进地色谱分析，根据标样中脂肪酸浓度的不同，结合碳原子数的多少对保留时间的影响，确定棕榈酸（!"4：、硬脂酸（!"#：、油酸（!"#：、$）$）"）亚油酸（!"#：、亚麻酸（!"#：、花生酸（!%$：、’()（!%$：%）&）$）*）峰的位置。用保留时间对数—碳原子图法确定豆蔻酸（!"7：、棕榈油酸（!"4：$）"）色谱峰的位置，不同脂肪酸

　色谱峰所对应的保留时间如图"。

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!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!9期刘永等：鱼卵中脂肪酸的毛细管气相色谱法研究

图!鱼卵中主要脂肪酸的定性

"#$!%&’()#*#+,)#-(-*&-.#(,()*,))/,+#&0#(*#01’$$

色谱峰的定性一般利用单标定性法，但对于性质相近的复杂物质的定性，多根据分析物质浓度的不同与峰面积的关系，以及物质本身的性质，参照分析物质保留指数的方法。但对于""23（4,56-7,89:;和9<硝基对苯二酸衍生物制成的一种固定液）毛细管色谱柱，脂肪酸保留指数的数据较少，所以我们利用保留时间的对数—碳原子图法确定脂肪酸的保留时间。

9=9回归分析

精确吸取>#$.,脂肪酸混合标样，用石油醚和苯的混合溶剂（!?!）配制成不同浓度的脂肪酸溶液，定体积进样，以峰面积与进样浓度作图的回归方程及相关系数（表。!）

表!鱼卵中主要脂肪酸含量与峰面积的线性方程及其相关系数

@6A’!B#(+,5’CD,)#-(,(&+-55’A,)#-(+-’**#+#’()-*&-.#(,()*,))/,+#&0#(*#01’$$

脂肪酸种类

线性方程

相关系数

注：H：峰面积（4!E：:）（4!E：!）（4!F：:）（4!F：!）（4!F：9）（4!F：G）HI!=:E8JK=LKHI!=:M8JK=M9HIK=K!8J!=:GHI!=:F8NL=O!HI!=!G8JK9=L:HI!=:M8JK=9L:=LLLMP：进样浓度:=LLL9:=LLLG:=LLLM:=LLLL:=LLEE

Q-)’0：H：3’,R25’,P：%(S’+)#-(+-(+’()5,)#-(

鱼油中脂肪酸以棕榈酸（4!E：、棕榈油酸（4!E：、硬脂酸（4!F：、油酸（4!F：、:）!）:）!）亚油酸（4!F：、亚麻酸（4!F：9）G）为主，因而我们主要对这几种脂肪酸进行了分析方法的验证。结果表明，气相色谱法测定脂肪酸的线性关系良好，有M种脂肪酸线性相关系数在:=LLL9以上，只有亚麻酸（4!F：G）线性相关系数为:=LLEE，可能与亚麻酸（4!F：G）不饱和键较多，前处理过程易被氧化有关；E种脂肪酸线性范围均在!:G以上，满足分析要求。

9=G回收率测定

　氢氧化钠—甲醇酯交换法只能酯化甘油三脂，无法对游离脂肪酸进行酯化，而重氮

水产学杂志第#&卷?)’?

!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!

甲烷法对于各种脂肪酸的甲酯化均有较高的回收率（但测定复杂，且重氮甲烷毒性较强），我们分别称取两份!"法提取的相同脂肪酸含量的鱼油，以重氮甲烷法测定脂肪酸的含量为#$$%，计算以氢氧化钠—甲醇酯化法测定鱼油中棕榈酸（!#&：、棕榈油酸$）（!#&：、硬脂酸（!#’：、油酸（!#’：、亚油酸（!#’：、亚麻酸（!#’：#）$）#）(）)）的回收率（表。(）

表(

鱼卵中主要脂肪酸的回收率、精密度及最小检出限

*+,-.(/.012.34，53.067618（3.-+962.79+8:+3::.26+9618）+8:-1;.79:.9.09618-6<691=:1<68+89=+994+06:768=67>.??

脂肪酸种类回收率（%）

/EF

最小检出限（!?G?）

（!#&：$）@#A(#$A$D)@$A(’D

（!#&：#）@BA#C$A$D&D$A)(@

（!#’：$）@DA)($A$&&#$AD@’

（!#’：#）#$(ADB$A$D&@$AB($

（!#’：(）@#A#’$A$DD#$A&C&

（!#’：)）@$AC’$A$&$C$AC&B

各种脂肪酸的平均回收率为@DA#’%，说明氢氧化钠—甲醇酯交换法的酯化效率较高，只有亚麻酸（!#’：)）的回收率为@$AC’%，这与其相关系数较低是一致的。(AD

精密度试验

分别准确称取B份一定量的!"法提取的鱼油，用氢氧化钠—甲醇酯化法进行酯化处理，定体积进样，测得鱼油中棕榈酸（!#&：、棕榈油酸（!#&：、硬脂酸（!#’：、$）#）$）、亚油酸（!#’：、亚麻酸（!#’：。油酸（!#’：#）(）)）的相对标准偏差（表(）(AB

最小检出限

以E6?<+脂肪酸混合标样进行最小检出限测定，当峰高为噪声)倍时，测得鱼油中主要脂肪酸棕榈酸（!#&：、棕榈油酸（!#&：、硬脂酸（!#’：、油酸（!#’：、亚油酸$）#）$）#）（!#’：、亚麻酸（!#’：。(）)）的最小检出限（表(）

)结论

（#）本研究建立了一种鱼卵中脂肪酸测定方法，该方法采用!"法提取脂肪，氢氧化钠—甲醇酯交换法进行酯化，以HHIJ毛细管气相色谱法进行检测。实验表明，鱼卵中脂肪酸的回收率、精密度、最小检出限均满足分析要求。

（(）与传统的索氏提取法提取脂肪，填充柱气相色谱法测定脂肪酸相比，本方法不需要特殊设备，酯化条件容易控制，具有简单、快速、准确等特点，尤其对豆蔻酸（#D：$）等分子量较低的脂肪酸，本法具有明显优势；由于氢氧化钠—甲醇酯交换法对游离脂肪酸不起作用，因而该方法不适合游离脂肪酸的测定。

（)）本文中所用色谱法条件是针对鱼卵中脂肪酸种类和含量选用的。对不同样品，可适当改变色谱条件，如程序升温方式、载气流速、色谱流速、色谱柱等，以缩短分析时间，提高实验精度。

参

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考文献

许鸿生，段正康K葡萄籽油中脂肪酸组成的气相色谱分析［L］：B’MB@KK色谱，#@’@，C（#）

　王光华，周良模K食用油中脂肪酸含量的气相色谱分析［L］K分析化学，#@’C，#B（#$：@)&M

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!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!+期刘永等：鱼卵中脂肪酸的毛细管气相色谱法研究

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（上接第!#页）

数字化、网络化等相关知识和技术，跟上时代发展的步伐。同时要有教育学、心理学知识，图书馆员的知识结构中还应包括教育学和心理学方面的知识，了解读者的心理活动和需要方向，才能与读者进行有效沟通，更好地为读者服务。

,利用网络技术实现图书馆与读者的有效沟通

高校图书馆大部分实现计算机服务，建立了校园网，通过校园网访问图书馆的T>R站点，计算机及网络技术在图书馆的应用，拓宽了读者服务工作的深度。

参

［&］

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［"］

［,］考文献褚江玲$论高校图书馆员与读者的信息沟通［%］$图书馆工作与研究，+//"（+）$郭丽华$淡图书馆工作人员与读者的交涉互动关系［%］$图书馆学研究，+//+（+）$莫守忠$论高校图书馆员与学生读者沟通［%］$图书馆，&!!!（(）$罗传玲$+&世纪图书馆员应具备的素质和能力［%］$图书馆，&!!!（(）$