高效液相色谱法测定玉米中生育酚异构体

高效液相色谱法测定玉米中生育酚异构体

张

东，薛雅琳

（国家粮食局科学研究院，北京100037）

4．摘要：建立了一种玉米中生育酚异构体的测定方法。试验采用SunfireC18反相柱（5μm，

6×150mm），柱温25℃，甲醇+水（98+2）作为流动相，流速1．0mL/min，进样量20μL，通过荧光检测器（激发波长为295nm，发射波长为330nm）测定生育酚异构体。方法线形范围为1～

（β+γ）－生育酚、100μg/mL，α－生育酚、δ－生育酚在此范围内线形良好，相关系数为0．99976～

0．99983。在5～50mg/kg浓度范围内，加标回收率为86．5%～97．4%，相对标准偏差为0．4%～3．5%。α－生育酚、（β+γ）－生育酚、0．02、0．02mg/kg。方法δ－生育酚的检出限分别为0．03、快速、灵敏、准确、简便易行。

关键词：玉米；生育酚；异构体；高效液相色谱法

中图分类号：TS207．3文献标识码：A文章编号：1007－7561（2012）01－0036－03

Analysisoftocopherolisomersincornbyhighperformanceliquidchromatography

ZHANGDong，XUEYa－lin

（AcademyofStateAdministrationofGrain，Beijing100037）

Abstract：Amethodtodetectethetocopherolisomersincornwasestablished．TheanalysiswascarriedoutwithaSunfireC18column（150mm×4．6mmI．D．，5μmparticlesize）at25℃．Themobilephasewasmethanol－water（98∶2，V/V）．Theinjectionvolumewas20μL，andtheflowratewas1．0mL/min．TocopherolsweremonitoredatEm295nm/Ex330nm．Thelinearrangesofα－tocopherol，（β+γ）－tocopherol，andδ－tocopherolwere1～100μg/mL（relativecoefficientswere0．99976－0．99983）．Intherangesof5～50mg/kg，therecoveryrateswere86．5%～97．4%，RSDswere0．4%～3．5%．Thedetectionlimitsofα－tocopherol，（β+γ）－tocopherol，andδ－tocopherolwere0．03，0．02，and0．02mg/kg．Inconclusion，themethodisrapid，sensitive，accurateandsimple．Keywords：corn；tocopherol；isomer；highperformanceliquidchromatography玉米是世界三大粮食作物之一，玉米胚芽含有丰

分子式C29H50O2，是一种脂溶性维生素。富的生育酚，

有四种类型α、β、γ和δ，对生殖功能、肌肉代谢均有影响，具有抗氧化作用等生理功效。易溶于丙酮、乙氯仿、乙醇等有机溶剂，几乎不溶于水。生育酚在醚、

外界环境下不稳定，受光、氧气等影响而被氧化破

对于其分析检测仍是难题。坏。由于影响因素较多，

生育酚的检测方法主要是反相高效液相色谱

［1－5］6］

；也可用正相高效液相色谱法进行分析［3，，法

由于正相高效液相色谱法对仪器系统要求较高，需要配置专用的脱气包、泵和管路，分析检测时较少用

杂质峰较多通常会掩盖到；特别是分析玉米样品时，

目标峰，造成分析不准确。而反相高效液相色谱法，样品前处理较繁锁，容易造成待测物的损失；且内标物对人体存在致癌风险。通过摸索实验条件，开发了一种较快速准确测定玉米中生育酚异构体的方

收稿日期：2011－04－15作者简介：张东（1982－），男，助理工程师，学士．通讯作者：薛雅琳（1960－），女，研究员．

法，供同行借鉴。

1

1．1

材料与方法

材料与仪器

玉米：市售；乙醚（分析纯）、石油醚（沸程：30～60℃，分析纯）：购自北京市化学试剂公司；甲醇、脱醛乙醇（色谱纯）：购自迪马科技有限公司；α－生育酚、β－生育酚、γ－生育酚、δ－生育酚：纯度均大于

96%，购自Sigma公司。

1100系列高效液相色谱仪（配荧光检测器）：美国安捷伦公司；AB304－S型电子天平：瑞士梅特勒－托利多公司；V－855型旋转蒸发仪：瑞士步琪公司；Lambda45型紫外可见分光光度计：美国珀金埃尔默公司。

1．2液相色谱条件及生育酚标准浓度标定

1．2．1色谱条件SunfireC18色谱柱（5μm，4．6×150mm），柱温25℃；荧光检测器激发波长为295nm，发射波长为330nm；甲醇+水（98+2）为流动

相，流速1．0mL/min；进样量20μL。

6］

1．2．2生育酚标准浓度标定［2，用脱醛乙醇溶解生育酚标准品，使其浓度大约为1mg/mL，临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。1．3溶液的制备

1．3．1标准溶液的制备10mg/mL生育酚标准储备液：分别精密称取α－生育酚、β－生育酚、γ－生育酚、δ－生育酚各100．0mg，用脱醛乙醇溶解并定－20℃保存备用。容至10mL棕色容量瓶中，摇匀，

1．0mg/mL生育酚标准溶液：从上述储备液中各取1mL用脱醛乙醇定容至10mL容量瓶中，摇匀。1．3．2

样品溶液的制备取代表性样品，磨碎，全部通过0．30mm筛，混匀，备用。取约2g粉碎后的样品置于具塞试管中，加入50mL溶剂，加盖。超声

4000r/min离心5min，提取15min，取上清液，重复

2．3

A．生育酚标准品；B．玉米样品

峰1．δ－生育酚；峰2．（β+γ）－生育酚；峰3．α－生育酚

图1

生育酚标准品（A）和玉米样品（B）色谱图

标准曲线

从前述1．0mg/mL标准溶液中分别移取0．01、

0．2、0．4、0．6、0．8、1．0mL用脱醛乙醇定容至10mL（β－生育酚与γ－生育酚移取量各减半），配成1、20、40、60、80、100μg/mL的标准溶液，经HPLC测（β+γ）－生育酚、定后，分别以α－生育酚、δ－生

质量浓度（X，μg/育酚的色谱峰面积（Y）为纵坐标，

mL）为横坐标，绘制标准曲线。生育酚的回归方程、

相关系数、线性范围如表1。由表1可知，α－生育（β+γ）－生育酚、δ－生育酚在1～100μg/mL酚、

的浓度范围内线性良好。

表1

生育酚的线性回归方程

线性范围（X，ug/mL）1～1001～1001～100

上述操作2次。将两次上清液并入蒸发瓶中，并将

于水浴中减压蒸馏，待瓶中约其接至旋转蒸发器上，

剩2mL溶剂时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹干，加入2mL脱醛乙醇溶解，振荡混匀，过0．45μm有机滤膜，上机待测。

2

2．1

结果与讨论

样品提取溶剂的选择

实验对样品提取溶剂进行了探索，比较了甲醇、乙醇、乙醚、石油醚四种溶剂。超声提取过程中（恒

25℃），15min后几乎温水浴，乙醚由于沸点较低，

完全挥发；甲醇和乙醇是良好的提取溶剂，但在减压蒸馏过程中，需要较高的水浴温度和真空度，挥发速度慢，影响工作效率；石油醚在提取过程中不易挥发，而在浓缩过程中容易去除。所以选择石油醚作为提取溶剂。2．2色谱分离

依照前述色谱条件进行分析，标准品和玉米样（β+品色谱图见图1。由图1可见，α－生育酚、γ）－生育酚、δ－生育酚分离效果良好，峰形尖锐，响应值高。β－生育酚与γ－生育酚保留时间相同。由于β－生育酚在常温下极其不稳定，所以在实验操作中以γ－生育酚代替（β+γ）－生育酚测定

。

化合物线性回归方程相关系数

α－生育酚Y=42．349X－8．3950．999830．999760．99977

（β+γ）－生育酚Y=89．304X+35．106δ－生育酚

Y=68．154X+24．578

2．4检测限

在空白样品中加入生育酚标准溶液，按前述方

（β+γ）－生育酚、法测定，测出α－生育酚、δ－生育酚的检出限（S/N＞3）分别为0．03mg/kg、

0．02mg/kg、0．02mg/kg；定量限（S/N＞10）分别为0．11mg/kg、0．05mg/kg、0．04mg/kg。2．5

精密度和加标回收率

（β+γ）－准确称取含α－生育酚5．12mg/kg、

生育酚4．87mg/kg、δ－生育酚1．13mg/kg的玉米样品3组，分高中低三个梯度加入生育酚标准溶液，混匀样品。测定精密度和加标回收率，实验结果见表2。由表2可以看出，玉米样品中α－生育酚、（β+γ）－生育酚、δ－生育酚在添加水平5～50mg/kg，其加标回收率为86．5%～97．4%，相对标准偏差为0．4%～3．5%。

质量控制

表2

玉米样品中生育酚加标回收率和相对标准偏差

添加量X/（mg/kg）

5．627．9855．965．43

（β+γ）－生育酚

27．1754．334．21

δ－生育酚

21．0742．15

测得平均值X/（mg/kg）9．9632．0359．649．7230．9856．784．8320．0140．53

平均回收率

/%86．596．297．489．396．195．587．889．693．5

（n=3）RSD/%3．12．72．73．51．70．41．81．83．1

粮油食品科技第20卷2012年第1期

标准品

α－生育酚

2．6

样品分析

应用本方法检测市售玉米共6个样品，检测了

（β+γ）－生育酚、样品中α－生育酚、δ－生育酚的

含量，具体结果见表3。

表3

样品名称样品1

样品2样品3样品4样品5样品6

玉米样品中生育酚含量检测结果

δ－生育酚2．201．123．542．881．63－

检测结果X/（mg/kg）（β+γ）－生育酚α－生育酚

11．1536．8512．8520．1310．3453．3417．1142．927．2818．7411．885．92

用石油醚（沸程：30～60℃）作为提取溶剂，再以理，

乙醇溶解的方法进行样品处理。液相色谱使用SunfireC18反相柱（5μm，4．6×150mm），仪器的柱温设定为25℃，流动相为甲醇+水（98+2），流速1．0mL/min，进样量为20μL，荧光检测器（激发波长为295nm，发射波长为330nm）。适用于测定生

在1～100μg/mL线形范围内，α－生育酚异构体，

（β+γ）－生育酚、育酚、δ－生育酚线形良好，相关系数为0．99976～0．99983。在5～50mg/kg浓度范围内，加标回收率为86．5%～97．4%，相对标准偏

（β+γ）－生育差为0．4%～3．5%。α－生育酚、

酚、δ－生育酚的检出限分别为0．03mg/kg、0．02mg/kg、0．02mg/kg。该方法相对于现有的其他方法是一种快速、灵敏、准确、简便易行的方法。参考文献：

［1］邵裕坤，徐军，王珏．反相高效液相色谱法同时测定血清中维生

D3，E［J］．中国现代应用药学杂志，2005，22（6）：503－505．素A，

［2］GB/T5009．82—2003，S］．食品中维生素A和维生素E的测定［［3］GB/T17812—2008，饲料中维生素E的测定

［S］．

［4］NY/T1598—2008，食用植物油中维生素E组分和含量的测定

．高效液相色谱法［S］

［5］GB/T9695．30—2008，肉与肉制品

S］．维生素E含量测定［

［6］ISO9936—2006，Animalandvegetablefatsandoils－Determination

oftocopherolandtocotrienolcontentsbyhigh－performanceliquid

高效液相色谱法

“－”注：表中表示未检出或低于检出限。

3结论

通过大量实验条件的摸索，建立了一种玉米中

生育酚异构体液相色谱的分析方法。特别是前处

．●chromatography［S］

檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪（上接第23页）

（4）泡沫比例混合装置双螺杆泵采用软启动控

制方式，混合装置系统具备自动和手动控制方式。（5）全套消防泵系统控系统采用双电源自动切换方式进线，并配置自动功率补偿装置，补偿容量不少于300KVAR。

（6）稳高压消防自动控制控制要求。各消防泵组变频器选用带PID闭环调节功能的变频器。消防控制要求达到全自动平稳切换，恒压控制，主要是依靠管网压力的变化来控制启停泵。具体要求为：管网

PLC根据压力设定压力传感器的压力信号送入PLC，

值与实际检测值进行PID运算后给出信号控制变频

器的转速以使管网的压力稳定。当管网压力低于主泵启泵压力设定值时一台主泵在变频器的控制下启

PLC自动将原工作在变动运行，如果压力仍然不够，

4油库自动化控制要求

包括油罐区、油泵房的接受、中转、发放工艺的自

动控制。主要包括PLC、电机控制中心（MCC）、继电器柜、现场控制箱、上位机监控系统。通过以太网报

控制站，组成油库控制网络。油罐安装雷达操作站、

液位计，把油位信号传递给控制系统。油罐配备多点温度传感器，为测量油品的重量提供温度补偿信号。对于棕榈油油罐，通过对油温的自动检测来调整加热蒸汽阀门开启度，保持出油的流动性。油罐进出口管道安装流量计，测量管道中油品的流量、密度，计算累计流量。

5消防系统自动化控制要求

（1）消防雨淋泵组采用一拖五变频恒压自动控制，雨淋稳压泵采用一拖二变频自动控制。频状态下的泵投入到工频运行，以保持压力的连续

（2）消防自动喷淋泵组采用一拖二变频恒压自

性，同时将一台备用的主泵用变频器启动后投入运

动控制，喷淋稳压泵采用一拖二变频自动控制。以加大管网的供水量保证压力稳定。●行，

（3）消防栓泵组采用一拖二变频恒压自动控制，消防栓稳压泵采用一拖二变频自动控制。